基于增量式PID算法的香精施加系统设计

为解决加热不燃烧烟草制品生产过程中香精施加量无法根据薄片质量变化进行实时调控的问题,设计了一种基于增量式PID算法的香精施加系统。该系统由称重单元、螺杆泵、喷嘴、流量传感器等组成,通过称重单元实时获取薄片质量数据,根据理论计算模型确定香精施加量,基于增量式PID算法驱动螺杆泵定量输出香精至喷嘴中,利用流量传感器对香精施加量实时反馈,实现香精精准施加。验证结果表明,当薄片质量发生变化时,香精施加量可快速调整,最大超调量为1%,最长调整时间为1.8 s,系统具有较好的跟踪性能;施加量检测值与理论值的偏移率为0.23%~0.52%,施加量组内波动为3.11%~4.17%,系统可实现香精的准确、均匀、稳定施加。

不同位置及加香水平对加热卷烟释放行为的影响

【目的】探索不同位置及加香水平对加热卷烟释放行为的影响。【方法】通过控制单支加热卷烟香精总量在一定的允差范围内,设计6组薄荷味加热卷烟并考察了烟碱、丙三醇、薄荷醇和N,2,3-三甲基-2-异丙基丁酰胺(WS-23)的释放规律。【结果】(1)对于烟碱和丙三醇,6组加热卷烟中烟碱的释放率和转移率都要大于丙三醇。(2)对于薄荷醇和WS-23,6组加热卷烟的释放率和转移率均存在较大差异,其中1#、2#、5#加热卷烟的释放率和转移率较高。释放率和转移率的波动受加热卷烟各段加香差异的影响。(3)每种成分的释放量均表现出先增大再减小的趋势,其中5#加热卷烟表现出相对较好的稳定性。

一株混合O血清型猪水肿病大肠杆菌的分离与鉴定

从具有典型临床症状和病理剖检变化的病死猪肠系膜淋巴结中分离到的1株革兰阴性细菌,通过菌体形态观察,染色、生化试验、SLT-Ⅱe基因检测、O血清型鉴定、动物试验,其结果证明分离菌为O26、O139、O142混合血清型,产SLT-Ⅱe大肠埃希氏杆菌。SLT-Ⅱe基因序列与GenBank上发表的参考序列(序列号为AY368993)的同源性达100%。用粗提的毒素经腹腔注射小鼠后引起小鼠后肢麻痹、死亡和胃肠水肿。

猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建

用MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物 ,通过逆转录—聚合酶链反应 (RT_PCR)从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18_T载体中 ,构建了重组质粒pMD18_T_JL94 /VP7,并对其进行了HindⅢ ,HindⅢ和BamHⅠ的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明pMD18_T_JL94 /VP7中的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物 ,通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18_T载体中构建了重组质粒pMD18_T_VP7,酶切鉴定其大小和方向后 ,与真核表达载体pcDNA 3.1(+)分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切 ,胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定 。

猪轮状病毒中国分离株JL94 VP7基因的克隆与序列分析

用 MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株 JL94。利用一对根据 Genebank中已发表的轮状病毒 VP7基因c DNA序列而设计并合成的引物 ,通过反转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)从 JL94毒株扩增出 VP7基因全长 c DNA。将其插入p MD18- T载体中 ,构建了重组质粒 p MD18- T- JL 94 / VP7,并对其进行了 Hind ,Hind 和 Bam H 的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明克隆的 p MD18- T- JL94 / VP7为轮状病毒的 VP7基因。通过核苷酸序列比较 ,JL94 / VP7与 A群猪轮状病毒 C134/ VP7、OSU / VP7、ICB2 185 / VP7、YM/ VP7核苷酸序列同源性分别为 87%、99%、74 %和 83%。

猪轮状病毒与传染性胃肠炎病毒核酸免疫研究

将昆明鼠随机分为A,B,C,D4组,各组分别采用含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA-VP7,含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH98株N基因的重组真核表达质粒pcDNA-N,pcD-NA-VP7和pcDNA-N、真核表达载体pcDNA3.1(+),肌肉注射3次,每次间隔2周。首次注射前后定期采血,检测血清抗体和外周血淋巴细胞中CD4+,CD8+T细胞数量的变化。A,C组小鼠血清在首免后第14天即可检出针对RVVP7的阳性抗体(P/N≥2.0)。B组小鼠血清在首免后第39天检出针对TGEVN蛋白的阳性抗体(P/N≥2.0)。A,B,C组小鼠在首免后外周血CD4+、CD8+T细胞数量与D组小鼠相比,在不同时间有显著差异(P<0.05),并明显高于D组小鼠。说明猪轮状病毒与传染性胃肠炎病毒核酸免疫后能诱发机体免疫反应。

猪传染性胃肠炎病毒核酸免疫昆明鼠的抗体应答

以猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)TH98株N基因的重组质粒 pHN为模板 ,Li 15和Li 2为上、下游引物扩增出TGEVTH98/N基因。将N基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)分别用BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后连接 ,构建了重组真核表达载体 pcDNA N。将昆明鼠随机分为 2组 ,分别肌肉注射 pcDNA N和pcDNA3.1(+) ,每只鼠 10 0 μg ,共免疫 3次 ,每次间隔 2周。首次免疫后第 0、14、2 1、2 8、35、39、4 7和 5 4d采血分离血清 ,采用ELISA检测抗体动态变化。注射pcDNA N组小鼠在首次免疫后第 39d检测到针对TGEVN蛋白的阳性抗体。

鸡空肠弯曲菌对SPF雏鸡致病性研究

用鸡空肠弯曲菌（Ｃａｍｐｙｔｏｂａｃｅｃｒｉｅｊｕｎ：）对１日龄ＳＰＦ（Ｓｐｃｉｉｃ－ｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｃｅ）雏鸡进行感染实验。随机将６０只１日龄ＳＰＦ雏鸡分为４组，那和对照组，每组１５只。分别用含菌７．５Ｘ１０８ＣＦＵ／ｍｌ、７．５ｘ１０４ＣＦＵ／ｍｌ，７．５×１０２ＣＦＵ／ｍｌ布氏肉汤菌液经口时ｔ、Ｊ、Ｉ组接种。接种后分别于２、４、６，８、１０日踏踏机取３只／组、经剖构观察病理变化；从心血、肝、胆汁、脾、肠内容物分离病原菌，测量肠道内物空肠弯曲菌菌数。得出以下结论；经口接种３．７５ｘ１０２ＣＦＵ空场弯曲菌即可造成１日龄ＳＰＦ雏鸡感染发病；感染鸡的主要病理变化为肝脏表面有点状，条索状或片状出血，同时伴有形状不规则大小不等的黄白色坏死灶，盲肠膨大充满气泡，十二指肠、空肠、直肠粘膜有散在的小出血点，首选检苗材料为胆汁、其次是脾、肝等器宫。

苯乙醇-β-D-吡喃葡萄糖苷的热裂解分析

采用热重-差热分析（TG-DTA）和热解-气相色谱/质谱法（Py-GC/MS）对苯乙醇-β-D-吡喃葡萄糖苷的热失重和热裂解产物进行了研究。结果表明：苯乙醇-β-D-吡喃葡萄糖苷的主要热失重区间是240~350℃,在此温度范围内,样品约完全失重;熔融温度为107.63℃,裂解温度为325.29℃;其主要裂解产物为苯类和杂环化合物,裂解产物数量随温度的增加而增多。该研究为考察其在卷烟燃烧过程中的转化行为提供了参考。

猪轮状病毒核酸免疫的研究

将昆明鼠随机分为A、B两组,分别肌肉注射含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA＿VP7和真核表达载体pcDNA3 1(+),每只鼠100μg/100μL,共免疫3次,每次间隔2周。首次免疫第0、14、21、28、35、39、47、54d采血,检测血清抗体和外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞的数量变化。A组小鼠血清在首免后第14d即可检出阳性抗体(P/N≥2 0)。A组与B组小鼠外周血CD4+、CD8+T细胞数量在首免后第14d开始有显著差异(P<0 05)。

昆明鼠对猪轮状病毒核酸免疫的抗体应答

将昆明鼠随机分为A、B两组,分别肌肉注射含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA-VP7和真核表达载体pcDNA3.1(+),每只鼠100μg·(100μL)-1,共免疫3次,每次间隔2周。首次免疫第0,14,21,28,35,39,47,54天采血分离血清用ELISA法检测抗体动态变化。A组小鼠血清在首免后第14天即可检出阳性抗体(P/N≥2.0)。

鸡空肠弯曲菌的分离鉴定

自哈尔滨地区某疑似空肠弯曲菌感染鸡场随机取５０份２０周龄蛋鸡新鲜粪便样本，用改良Ｃａｍｐ－ＢＡＰ培养基分离培养，经一系列生化试验鉴定，有１１株分离培养物为空肠弯曲菌，分离率为２２％。

猪轮状病毒的分离鉴定及部分特性研究

从吉林省某猪场发生腹泻的猪群粪便中,用MA＿104细胞培养,分离到一株猪轮状病毒,盲传至4代,感染细胞出现明显病变,经电镜观察,见有典型的轮状病毒颗粒。其RNA电泳型为4:2:3:2型,属A群轮状病毒,同时对其蚀斑特性和血凝特性进行了初步研究,这株病毒被命名为JL94株。

重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白制备的鸡卵黄抗体的效力评价

为探索以重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白为免疫原制备鸡卵黄抗体的可行性,本研究利用基因工程技术,在大肠杆菌中高效表达重组K88ab和K99蛋白。分别以重组蛋白和提取的天然菌毛为免疫原制备抗K88ab和K99菌毛的鸡卵黄抗体,并对抗体效价、特异性以及抗体的预防和治疗效果进行了检测和比较。试管凝集反应结果显示,以重组蛋白为免疫原制备的鸡卵黄抗体效价最高可达1∶2 560,与用天然菌毛为免疫原制备的鸡卵黄抗体的效价基本一致。该抗体分别与K88ab+和K99+大肠杆菌发生特异性凝集,并能分别有效抑制K88ab+和K99+大肠杆菌对新生仔猪肠上皮细胞的吸附。临床应用结果显示,本实验制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为100%,保护率为91%;治疗有效率为100%,治愈率为87%。实验结果表明该卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢具有良好的预防和治疗效果。

产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立

为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa基因的扩增产物分别为237 bp,314 bp和166 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的多重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的多重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果 2株为K99/STa阳性,1株为STa阳性。

大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立

目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47×103 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。

猪水肿病大肠杆菌基因突变株的构建

应用定点突变技术将野生型猪水肿病大肠杆菌（O139）主要毒力基因SLT—ⅡeA亚基中第167位谷氨酸和第170位精氨酸，分别突变为谷氨酰胺（E167Q）和亮氨酸（R170L）后，获得突变基因SLT—Ⅱe^＊。通过同源重组，将野生菌中的毒力基因SLT—Ⅱe替换为SLT．Ⅱe^＊，构建了一株毒力基因突变株（SLT-Ⅱe^＊）。实验结果显示，该突变菌株对Vero细胞的毒性是野生菌毒性的1／500.

产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立

为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。

H5亚型禽流感病毒HA1基因在Sf9昆虫细胞中的表达及其抗原性检测

利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒(AIV)的 HA1基因。Western-blotting证明HA1在昆虫细胞中得到了表达,其产物具有抗原性;且不与 H7、H9 AIV的抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示,表达蛋白可以在非变性条件下与相应抗体作用,同样具有良好的抗原性。试验结果证明,表达的H5亚型AIV的 HA1蛋白,为检测禽类体内是否感染H5亚型AIV和监测免疫禽类血清H5抗体水平提供了优良的检测抗原。

猪轮状病毒地方株JL94株VP6基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以猪轮状病毒地方分离株JL94株病毒核酸为模板,通过RT-PCR扩增内衣壳蛋白基因VP6cDNA,将其插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行测序。从T载体上将VP6基因亚克隆到表达载体质粒pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并利用Ni2+金属螯合亲合层析纯化融合蛋白。结果表明,VP6基因全长1356bp,并在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量可占菌体蛋白的26.5%,在表达的蛋白中,除45ku主要蛋白外,还有几条分子量较小的蛋白表达出来,这些融合蛋白经纯化后均具有良好的反应特异性。