血管内皮细胞生长因子及其受体在IgA肾病患者肾组织中表达的研究

目的 检测 2 4例不同病理改变的IgA肾病患者肾组织中血管内皮细胞生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及其受体VEGF R2 (flk 1)和Ⅳ型胶原的表达 ,并将其表达水平与临床病理改变进行相关分析。方法 应用免疫组织化学SP法。结果 VEGF主要表达于肾小球脏层上皮细胞 ,flk 1主要表达于肾小球和间质血管内皮细胞。肾小球内VEGF和flk 1表达呈正相关 (P <0 0 5 ) ,两者在中度病变组肾小球内表达最多 ,重度病变组表达最少 (P <0 0 5 )。随病理改变程度加重 ,患者 2 4h尿蛋白定量、血压、血肌酐水平均明显增高 (P <0 0 5 )。肾小球内VEGF表达在轻、中度病变组与尿蛋白水平呈正相关 (P <0 0 5 ) ;在重度病变组则无相关性 ,与患者血压、血肌酐水平也无明显相关性 (P >0 0 5 )。肾小球内Ⅳ型胶原随病变加重表达增多 ,在重度病变组表达最多 (P <0 0 1) ;在轻、中度病变组肾小球内VEGF表达与Ⅳ型胶原的表达呈正相关 (P <0 0 5 )。各组肾小球内VEGF表达与肾小球微血管密度呈正相关 (P <0 0 1) ,重度病变组肾小球微血管密度减少 (P <0 0 5 )。结论 这些结果说明VEGF在IgA肾病的病理进展过程中发挥重要作用 ,可能涉及内皮细胞通透性增强、细胞外基质合成增多。

巨噬细胞移动抑制因子在非IgA系膜增生性肾小球肾炎肾组织中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在非IgA系膜增生性肾小球肾炎患者肾组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学双标记技术检测正常对照组及不同病变程度非IgA系膜增生性肾小球肾炎患者肾组织内MIF和人巨噬细胞标记抗原CD68的表达。结果在正常对照组和IgA系膜增生性肾小球肾炎患者轻度组仅有少量MIF和CD68表达。随着非IgA系膜增生性肾小球肾炎病变程度的加重,MIF、CD68的表达逐渐增强,重度病变时,MIF、CD68的表达最强,且MIF表达水平与CD68表达呈正相关(r=0.87,P<0.01)。结论肾组织内MIF表达上调所导致的巨噬细胞浸润增加可能是非IgA系膜增生性肾小球肾炎进展的重要机制之一。

I型纤溶酶原激活物抑制物在紫癜肾炎肾组织中的表达

为研究 I型纤溶酶原激活物抑制物 (PAI- 1)在紫癜肾炎病理机制中的作用。采用免疫组织化学和原位杂交方法检测了 2 3例紫癜肾炎患者肾组织中的 PAI- 1。结果证实 :在正常肾组织内和紫癜肾炎肾组织内均可检测到 PAI- 1表达 ,PAI-1m RNA原位杂交阳性信号主要分布于血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞内 ,紫癜肾炎肾小球内有紫兰色阳性信号 。

IgA肾病患者肾间质T淋巴细胞亚群变化的意义

应用免疫组化及计算机图像分析技术检测了５６例ＩｇＡ肾病患者肾间质ＣＤ４＋ＣＤ８＋细胞（简称为ＣＤ４＋、ＣＤ８＋）及间质纤维化的变化。结果显示：ＩｇＡ肾病患者肾间质内ＣＤ４＋、ｃＤ８·增多，间质纤维化面积显著增大，ＣＤ４＋／ＣＤ８”的比值与正常对照组无差异；尿红细胞＞２００Ｘｌ０６／Ｌ组ＣＤ４＋计数增加更为显著；伴高血压的患者ＣＤ４＋、ＣＤ８＋计数增加也更显著；ＣＤ４＋、ＣＤ８＋计数与血肌酐和肾间质病理改变分级均显著正相关，而ＣＤ４＋／ＣＯ８＋随肾间质病理改变的加重而降低。结果提示细胞免疫可能通过损伤肾小管－间质参与了ＩｇＡ肾病的发病机制，并影响患者的预后。

MMP-9/IgA和TIMP-1/IgA在IgA肾病患者肾组织中的共表达及意义

目的观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)和免疫球蛋白A(IgA)在IgA肾病不同病变肾小球内共表达情况,探讨IgA沉积在IgA肾病进展中的作用。方法采用石蜡切片免疫荧光双标记技术,对56例不同病理分级IgA肾病(Lee氏分级Ⅰ-Ⅴ级)患者肾组织中MMP-9/IgA、TIMP-1/IgA共表达变化进行检测。结果在Lee氏分级Ⅰ-Ⅱ级肾小球中TIMP-1/IgA有少量表达,MMP-9/IgA表达最多。Lee氏分级Ⅲ级肾小球中TIMP-1/IgA表达增多,MMP-9/IgA表达减少,在Lee氏分级Ⅳ-Ⅴ级重度系膜病变肾小球内TIMP-1/IgA表达最多,MMP-9/IgA有少量表达,而在硬化肾小球内两者表达最少。结论在IgA肾病进展过程中随着肾小球内IgA沉积增多,肾小球内TIMP-1表达逐渐增高,MMP-9表达逐渐减少,提示IgA沉积引起的MMP-9/TIMP-1失衡参与了IgA肾病肾小球硬化过程。

整合素连接激酶在IgA肾病肾组织中的表达及其意义

目的探讨整合素连接激酶(ILK)在IgA肾病患者肾组织中的表达及其意义。方法采用间接免疫荧光双标记法检测不同病变程度IgA肾病患者肾组织ILK、纤维连接蛋白(Fn)和整合素(Integrin)的表达。结果在正常组肾组织,ILK主要表达于肾小球脏层上皮细胞。随着IgA肾病病变程度的加重,ILK的表达逐渐增强,Ⅳ级病变时,ILK的表达最强,正常组及IgA肾病Ⅰ-Ⅴ级的荧光强度分别为:11.67±4.82、12.39±7.71、19.50±7.79、26.26±9.27、35.83±7.01和15.40±5.80(P<0.01);Integrin的表达与ILK平行。Fn的表达随病变程度的加重进行性增强。双标记免疫荧光染色显示,Ⅰ-Ⅳ级,ILK与Fn的表达成正相关(r=0.85,P<0.01);ILK与Integrin的表达也呈正相关(r=0.89,P<0.01)。结论ILK可能通过介导Integrin参与IgA肾病的异常细胞外基质的沉积,尤其在IgA肾病早中期起着重要作用。

微波石蜡切片免疫荧光多重标记技术在肾活检病理诊断中的应用

目的:肾活检组织免疫荧光检查常规是在冰冻切片上进行。本研究探讨了甲醛固定的肾活检组织进行石蜡切片免疫荧光多重染色在病理诊断中应用的可行性。方法:采用微波修复抗原法,对5例膜性肾病、5例狼疮性肾炎、5例IgA肾病和5例乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾组织石蜡切片分别进行IgG/Fn/Hoechst、C3/Fn/Hoechst、IgA/Fn/Hoechst、HBsAg/Fn/Hoechst免疫荧光多重染色。利用免疫荧光显微镜观察并照相。结果:微波修复抗原的石蜡切片进行免疫荧光多重染色,显示IgG、C3、IgA与HBsAg染为绿色,FN为红色,两者共表达的部位为橙黄色,细胞核为蓝色。石蜡切片的免疫荧光染色与用于病理诊断的冰冻切片免疫荧光染色结果一致。且石蜡切片较冰冻切片薄,结构清楚,免疫沉积物定位更准确,易判断结果。结论:微波石蜡切片免疫荧光多重染色,能在一张切片上同时显示两种以上抗原的共表达,为病理诊断提供更加直观详实的依据,可用于肾组织分子免疫病理检查,为使用石蜡切片进行回顾性免疫荧光诊断和研究提供了技术保障。

细胞粘附分子在IgA肾病患者肾组织中的表达──定量免疫组织化学研究

本研究应用免疫组织化学方法及计算机图象分析系统，对４７例ＩｇＡ肾病患者肾组织中细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）的变化进行了定量研究。以此进一步探讨细胞粘附分子在ＩｇＡ肾病肾脏损伤中的作用变化机理。本文的结果显示：ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１在ＩｇＡ肾病肾小球内表达均增加，且与肾小球病变程度有密切关系。肾小球病变越重，上述粘附分子在肾小球内表达越强。重度ＩｇＡ肾病患者肾小球内ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１的表达最强。在伴有炎症细胞浸润的肾间质中ＩＣＡＭ－１也有存在。这一结果说明，ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１表达强度的变化与ＩｇＡ肾病的发展有密切的关系。

细胞间粘附分子－1在非IgA系膜增殖性肾小球肾炎病变中表达的定量分析

应用免疫组化方法及计算机图象分析系统，检测了非ＩｇＡ系膜增殖性肾小球肾炎患者肾组织病变过程中细胞间粘附分子－１的变化。结果显示：在系膜细胞增殖的肾小球内细胞间粘附分子－１含量增加，并随病变进展明显增加，且与系膜细胞增殖程度显著正相关。

纤维连接蛋白及其受体在IgA肾病患者肾组织中的表达

为探讨纤维连接蛋白（ＦＮ）及其受体（ＦＮＲ）与ＩｇＡ肾病的关系，利用免疫组织化学和计算机图像分析的方法对４１例ＩｇＡ肾病患者和６例正常人肾组织中的纤维连接蛋白及其受体进行定量研究。结果表明，正常肾组织肾小球ＦＮ分布于系膜区，ＦＮＲ在肾小球系膜区和毛细血管袢均有分布。ＩｇＡ肾病患者肾小球内ＦＮ、ＦＮＲ的相对含量高于正常肾，重度组ＩｇＡ肾病患者尤为显著（Ｐ＜０．０１），而且ＦＮ、ＦＮＲ的含量与ＩｇＡ肾病肾小球系膜细胞的增殖程度呈密切相关。提示ＦＮ、ＦＮＲ在ＩｇＡ肾病肾小球病变中可能起重要作用。

肾康注射液延缓5/6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭进展的机理探讨

目的 :探讨肾康注射液延 5/6肾切除 (5/6NX)大鼠延缓慢性肾功能衰竭的作用机理。方法 :采用苯那普利、来适可为实验对照组 ,研究了肾康注射液对 5/6NX大鼠肾小球硬化、肾功能、高脂血症及肾组织TGF-β1的影响。结果 :肾康注射液可以显著降低 5/6肾切除大鼠的血压、2 4 h尿蛋白定量、血尿素氮 (BUN)、血肌酐 (Scr)、胆固醇 (CH)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白 (LDL) ,明显减轻 5/6肾切除大鼠的肾脏病理损害 ,显著抑制肾组织 TGF-β1的表达。对以上指标的改善作用 ,与苯那普利、来适可无明显差异。结论 :肾康注射液可以减轻 5/6肾切除大鼠肾脏病理损害 ,改善肾功能 ,降低尿蛋白含量、高脂血症及肾组织 TGF- β1。

中药海乐得对部分肾切除大鼠残余肾脏表达PAI-1、TGFβ mRNA的影响

目的：观察中药制剂海乐得对５／６肾切除（５／６ＮＸ）大鼠残余肾组织表达纤溶酶原激活物抑制物－１（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－ｌ，ＰＡＩ－ｌ）、转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦβ）的影响。方法：海乐得治疗５／６肾切除大鼠６周后处死，检测尿蛋白排泄和血生化变化，制作残肾组织病理和冰冻切片，提取残余肾脏组织ＲＮＡ，分别采用组织原位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印记杂交方法观察ＰＡＩ－ｌ、ＴＧＦβ的基因表达。结果：中药治疗组残肾组织中ＰＡＩ－ｌ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达、尿蛋白排泄、血清尿素氮和肌酐均明显低于未治疗组，肾脏病理损害以及脂代谢紊乱亦有明显改善。结论：海乐得通过ＰＡＩ－ｌ和ＴＧＦβ途径，能明显改善慢性肾功能衰竭大鼠的肾功能和病理损伤。

复方肾华片对5/6肾切除大鼠的疗效观察

目的观察复方肾华片对大鼠残余肾功能的保护作用。方法以安博维为对照,复方肾华片治疗5/6肾切除大鼠12周后,观察血压、尿蛋白、血生化及肾脏病理变化情况。结果复方肾华片能降低5/6肾切除大鼠的血清肌酐、尿素氮(P<0.05),24h尿蛋白排泄(P<0.01),降低血清胆固醇浓度(P<0.05),升高血清白蛋白,减轻肾小球硬化及肾间质纤维化程度,但对大鼠血压没有影响。结论复方肾华片可以通过非血流动力学机制,减轻5/6肾切除大鼠的肾损害,延缓慢性肾功能不全的进展。

人钠/二羧酸协同转运蛋白1基因融合表达及其抗体制备

利用DNA重组技术 ,将编码人钠 羧酸协同转运蛋白 1(hNaDC1)抗原表位区 (W138 Q2 19)的cDNA克隆至融合表达载体pGEX 5X 1,构建重组质粒pGEX hNaDCL6 .在大肠杆菌BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,获得谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hNaDC1重组融合蛋白的表达 .以谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的GST hNaDC1.以此为免疫原制备的抗hNaDC1抗体可特异性识别人类和大鼠肾组织以及小肠组织中天然的钠 二羧酸协同转运蛋白 1.利用该抗体 ,首次证实了hNaDC1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘 ,与大鼠钠 二羧酸协同转运蛋白 1(SDCT1)分布一致 .

复方肾华片对5/6肾切除大鼠肾组织巨噬细胞移行抑制因子的影响

目的 观察复方肾华片(下称肾华片)对大鼠残余肾脏表达巨噬细胞移行抑制因子(macrophagemigration inhibition factor,MIF)的作用。方法 采用肾华片治疗5／6肾切除大鼠12周,观察血压、尿蛋白、血生化、肾脏病理改变以及MIF表达的情况。结果 肾华片能降低5／6肾切除大鼠血清肌酐水平(P<0.05)及24 h尿蛋白总量(P<0.01),减少肾小球及肾小管间质MIF表达和浸润的巨噬细胞数量,减轻肾小球硬化及肾间质纤维化程度。结论 抑制MIF的高表达,可能是肾华片抑制大鼠残余肾脏慢性炎症,延缓硬化、纤维化过程,保护肾功能的机制之一。

IgA肾病患者纤溶酶原激活物的变化及临床意义

目的 :探讨IgA肾病患者纤溶酶原激活物 (PA)的变化及临床意义。 方法 :以纤维蛋白平板法检测 1 0 8例IgA肾病及 34例健康自愿者尿PA活性 ,同时以免疫组化方法观察了 2 7例IgA肾病及 6例正常人肾组织t PA、u PA抗原表达 ,分析其与临床病理资料的关系。结果 :正常人肾组织t PA偶见少量表达于肾小球毛细血管袢 ,u PA则表达于所有节段的肾小管上皮细胞。IgA肾病肾组织t PA阳性率及单个肾小球t PA平均积分明显高于正常人。轻度增生的肾小球其t PA阳性率明显增高 ,中度增生的肾小球t PA阳性率明显高于轻度增生者 ,硬化的肾小球不表达t PA。u PA表达明显下调 ,尿PA活性下降。伴血肌酐升高、肾小管间质病变严重、肾小动脉病变较重或大量蛋白管型形成的患者尿PA活性下降更为明显。结论 :IgA肾病早期肾组织t PA表达增加 ,晚期下降。肾组织u PA表达减少。蛋白管型的形成可能与尿PA活性下调有关。尿PA活性的检测有助于判断IgA肾病的病情。

自发性狼疮小鼠明胶酶A、B的表达变化及肾乐的影响

为探讨MRL/lpr自发性狼疮小鼠肾脏明胶酶A(MMP 2 )与明胶酶B(MMP 9)的表达变化 ,明确中药复方肾乐的调节作用及机制 ,将 90只 8周龄狼疮小鼠随机分为肾乐治疗组、甲基强的松龙 (MPS)治疗组与对照组 ,肾乐治疗组经饲料服用肾乐 ( 4g·kg-1·d-1) ,MPS治疗组腹腔注射甲基强的松龙 2 5mg·kg-1·d-1,共 2 0周。观察 3组小鼠的存活率、蛋白尿、肾功能与肾脏病理改变。并利用免疫组化检测明胶酶A、B的表达变化 ,明胶酶谱法检测肾脏与尿液明胶酶A、B的活性变化。结果发现 ,肾乐、MPS与对照组相比均能够延长狼疮小鼠的存活率 ( 70 %∶80 %∶5 0 % )、减少蛋白尿的出现比率 ( 4 0 %∶33.3%∶80 % )并减轻肾脏病理改变 ;与 8周龄狼疮小鼠比较 ,2 8周龄狼疮小鼠肾小球内明胶酶A、B的表达明显增加 ,肾脏与尿液中明胶酶A、B的活性均明显增加 ,与狼疮性肾炎的病理损害密切相关。提示肾乐与MPS能够明显抑制肾小球明胶酶A、B的表达及活性变化 ,这可能是肾乐减轻MRL/lpr自发性狼疮小鼠肾脏病理损害的主要机制之一。

复方红景天胶囊对小鼠免疫调节作用的实验研究

本研究旨在观察复方红景天胶囊调节小鼠免疫功能的作用。昆明种小鼠分别灌胃给予复方红景天胶囊25,250,750 mg/kg,每天1次,连续30-38 g,对照组小鼠给予相应溶剂。给药结束,测定各组小鼠的免疫指标。结果表明,复方红景天胶囊可使小鼠迟发型变态反应增强,脾淋巴细胞增殖能力增高,脾IgM抗体形成细胞数增加。结论:复方红景天胶囊具有增加小鼠免疫功能的作用。