短链脂肪酸通过抑制白细胞介素17A和NF-κB信号通路减轻γδT细胞介导的炎症反应

目的 探究短链脂肪酸减轻γδT细胞介导炎症反应的作用机制。方法 使用一定浓度的短链脂肪酸干预大鼠肠道来源的γδT细胞,CCK-8检测短链脂肪酸对γδT活性的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素17A(IL-17A)因子含量,实时荧光定量(RT-q PCR)检测IL-17A因子的表达水平,流式细胞仪分析IL-17+γδT细胞的比例,Western blot研究γδT细胞IL-17A和核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。结果 CCK-8结果提示乙酸钠的浓度≤0.5 mmol/L,丙酸钠、丁酸钠和混合短链脂肪酸的浓度≤0.25 mmol/L对γδT细胞的增殖无抑制作用(P> 0.05);ELISA和RT-q PCR结果显示,丙酸钠、丁酸钠及混合短链脂肪酸处理的γδT细胞IL-17A的含量较Control组均显著降低。流式细胞检测结果示IL-17+γδT细胞的比例在丙酸钠、丁酸钠、混合短链脂肪酸及TSA干预下均明显下降(P <0.001);Western blot检测发现丙酸钠、丁酸钠和混合短链脂肪酸可抑制IL-17A、IKK的表达及NF-κB磷酸化水平(P <0.05)。结论 短链脂肪酸能抑制γδT细胞IL-17A和NF-κB信号通路的激活,从而减轻机体的炎症反应。

铜死亡相关lncRNA预测骨肉瘤患者预后及免疫途径

目的:鉴定铜死亡相关的lncRNAs,并利用其构建模型预测骨肉瘤(OS)患者的生存状况。方法:从TARGET数据库下载OS患者的RNA-seq数据以及相关临床资料。从相关研究报告中获取铜死亡相关基因集。使用共表达分析以及单因素Cox回归,筛选出OS生存相关的铜死亡相关lncRNA。在LASSO-Cox回归构建OS预后模型,并通过受试者工作特征曲线(ROC)和Kaplan-Meier(K-M)生存分析评估模型效能。利用单样本基因集富集分析(ssGSEA),探讨铜死亡相关的lncRNAs模型评分与OS中信号通路的关系。通过基因本体(GO)和京都基因组百科全书(KEGG)进行不同风险组OS患者的功能与通路富集分析。通过ESTIMATE算法,推测OS患者肿瘤样本中免疫细胞浸润水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验验证4个铜死亡相关的lncRNAs在不同细胞系中的表达情况。结果:在85例OS患者中,与10个铜死亡相关RNA共表达的lncRNA共有374个。根据Cox回归分析结果,鉴定出62个与OS患者预后相关的铜死亡相关的lncRNAs。共识聚类分析发现OS患者具有2种铜死亡相关的lncRNAs表达模式,并且2种铜死亡相关的lncRNAs表达模式的患者预后有显著差异。采用LASSO-Cox回归分析构建铜死亡相关的lncRNAs预后模型。t-ROC曲线评估模型效能,结果显示,1年、3年和5年的AUC值分别为0.78、0.83和0.85,并且高、低风险组间的K-M生存分析结果具有显著差异(P<0.05)。GSEA功能富集分析显示,抗原受体介导的信号传导途径、B淋巴细胞活化以及阳性T淋巴细胞选择在高风险组中富集。GO与KEGG富集分析发现,不同风险组中肿瘤相关通路在呈现差异。在3种铜死亡相关的lncRNAs细胞系中验证了预后模型中的铜死亡相关的lncRNAs表达水平。结论:铜死亡相关lncRNA与OS患者预后密切相关;基于铜死亡相关的lncRNAs构建的预后模型能够准确预测OS患者的预后,进一步深入研究铜死亡相关的lncRNAs在OS中的作用可能有助于开发更可靠的个性化治疗方案。

吲哚丙酸抑制小胶质细胞M1极化治疗脊髓损伤

背景:吲哚丙酸被证明可减轻糖尿病所致的中枢神经系统炎症,但其能否抑制小胶质细胞M1极化治疗脊髓损伤,目前仍缺乏相关研究。目的:通过细胞实验及动物实验探究吲哚丙酸抑制小胶质细胞M1极化治疗脊髓损伤的机制。方法:①体外实验:CCK8法检测BV2细胞活性并筛选最佳的吲哚丙酸使用浓度;然后将BV2细胞分为对照组、单纯给药组(50μmol/L吲哚丙酸)、脂多糖组(100 ng/mL脂多糖)、治疗组(100 ng/mL脂多糖+50μmol/L吲哚丙酸),采用Griess法检测一氧化氮含量;实时荧光定量PCR、Western Blot检测促炎相关因子的mRNA和蛋白的表达;细胞免疫荧光染色检测诱导型一氧化氮合酶的表达;Seahorse实验检测BV2细胞糖酵解压力水平。②体内实验:将30只SD大鼠随机分成3组:假手术组、脊髓损伤组、吲哚丙酸组。采用BBB评分与斜板实验评估大鼠脊髓损伤后功能恢复情况;免疫荧光染色检测脊髓组织中小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶的表达情况;ELISA检测脊髓组织中促炎因子白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α蛋白表达水平。结果与结论:①体外实验:当吲哚丙酸浓度>50μmol/L时明显抑制BV2细胞活性;吲哚丙酸可通过抑制核因子κB信号通路的激活,进而抑制促炎因子(白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α)及BV2细胞M1极化标志物诱导型一氧化氮合酶的mRNA及蛋白表达水平;吲哚丙酸能明显降低脂多糖诱导BV2细胞的糖酵解水平。②体内实验:脊髓损伤大鼠给予吲哚丙酸干预后,BBB评分与斜板实验角度明显增加;脊髓组织中M1极化小胶质细胞的数量显著下降及促炎因子(白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α)蛋白表达水平明显降低。③结果说明,吲哚丙酸可通过抑制小胶质细胞M1极化改善炎症微环境促进脊髓损伤后功能恢复。

成年斑马鱼脊髓损伤模型的制备和评估

目的:建立一种成年斑马鱼脊髓损伤(SCI)模型。方法:将成年斑马鱼随机分为正常组、假手术组和SCI组。SCI组进行脊髓完全横断手术,假手术组对斑马鱼的脊髓只暴露而不切断,正常组不做特殊处理。通过测试处理后斑马鱼的自由游泳能力和顺行轴突追踪来评估神经再生的情况。结果:假手术组与正常组斑马鱼5 min游泳路径的平均距离比较,差异无统计学意义(P>0.05),与第1周相比,SCI组斑马鱼第6周的5 min游泳路径的平均距离显著增加(P<0.05)。顺行神经示踪显示SCI组斑马鱼在损伤后2周出现可观察的轴突恢复。结论:成年斑马鱼具有显著的SCI恢复能力,本实验建立的成年斑马鱼SCI模型技术成熟、容易复制,可应用于SCI的相关研究。

膳食纤维摄入情况对骨质疏松症患者肠道菌群的影响

目的探讨骨质疏松症患者膳食纤维摄入量对肠道菌群组成和结构变化的影响。方法选取2022年9月至12月于广西医科大学第一附属医院72例初诊骨质疏松症的患者。通过半定量食物频率调查问卷和中国营养食物成分表第六版获取膳食纤维摄入量信息。根据膳食纤维中位摄入量分为:高膳食纤维组(≥11.92 g/d,n=36)及低膳食纤维组(<11.92 g/d,n=36)。使用Illumina MiSeq测序平台进行16S rRNA基因高通量测序,运用R语言和Qiime程序对测序结果进行物种注释和菌群结构差异分析。结果两组样本Beta多样性差异有统计学意义(P=0.007)。LefSe分析结果显示,变形菌门、γ-变形菌纲、肠杆菌目、肠杆菌科是低膳食纤维组相对丰度显著增加的菌群,Agathobacter和缠结真杆菌是高膳食纤维组相对丰度显著增加的菌群。广义线性回归模型结果显示,与膳食纤维摄入水平正相关的肠道菌群包括厚壁菌门、疣微菌门、梭杆菌门、疣微菌纲、疣微菌目、梭杆菌目、阿克曼氏菌科、乳酸乳球菌、Agathobacter、阿克曼氏菌属、脆弱类杆菌和梭杆菌属;与膳食纤维摄入水平负相关的属或种水平的肠道菌群包括变形菌门、γ-变形菌纲、乳杆菌目、鞘氨醇杆菌目、气球菌科和大肠埃希氏菌。肠道菌群与血清骨代谢标志物的相关性分析显示β-CTx与疣微菌门、疣微菌纲、疣微菌目、阿克曼氏菌科和阿克曼氏菌属呈显著负相关(P<0.05),与大肠杆菌呈显著正相关(P<0.05)。PINP与埃氏拟杆菌呈显著正相关(P=0.030)。结论较高的膳食纤维摄入量可能通过改变肠道菌群的结构组成从而对骨质疏松症的疾病进程产生积极影响,适量补充膳食纤维可能是未来营养干预防治骨质疏松的潜在途经之一。

肺鳞状细胞癌中甲基化调控基因及其临床意义

目的筛选肺鳞状细胞癌(LUSC)中受甲基化调控的基因,并分析其临床意义。方法从癌症和肿瘤基因图谱数据库中,下载338例LUSC组织和38例正常肺组织mRNA测序数据及DNA甲基化数据。采用R语言软件处理mRNA表达数据,筛选出差异表达基因(DEG),再运用受试者工作特征(ROC)曲线评估DEG鉴别LUSC组织和正常肺组织的效能,筛选出候选基因。使用minfi软件包分析TCGA数据库中甲基化数据,筛选出差异甲基化位点。利用MEXPRESS数据可视化工具,分析候选基因表达与其启动子区域DNA甲基化位点之间的相关性,筛选出与甲基化相关的目的基因及其位点。应用实时荧光定量PCR,检测21例LUSC患者癌组织及相应癌旁正常肺组织中目的基因的表达水平。结果筛选出目的基因SOX15及其cg01029592与cg13159929两位点。338例LUSC患者组织中SOX15mRNA相对表达量高于38例正常肺组织中的表达量(log2FC=4.758,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,SOX15高表达对鉴别LUSC组织和正常肺组织具有较高效能(曲线下面积为0.910,P<0.001)。位点cg01029592、cg13159929在LUSC组织中甲基化水平均低于正常肺组织(P<0.05)。在LUSC组织中SOX15的表达与cg01029592及cg13159929位点的甲基化水平呈负相关(均P<0.05)。位点cg01029592、cg12615880高甲基化水平者的总体生存率均高于低甲基化水平者(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,LUSC组织的SOX15mRNA的相对表达量高于癌旁正常组织(P<0.05)。结论SOX15或可成为LUSC肿瘤特异性标志物。SOX15启动子区低甲基化可能导致其mRNA高表达,并且与LUSC预后相关。