tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达△

目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性。方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化。结果ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.0695±0.0009、1.0662±0.0007,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.0185±0.0024、1.0167±0.0012;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异(P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN22组间无显著性差异(P>0.05)。结论tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用。

地塞米松对牛眼小梁水通道蛋白表达的影响

目的观察地塞米松对牛眼小梁细胞的损伤使其水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)表达的影响。方法体外培养牛眼小梁细胞,取第4代细胞鉴定后用于实验。应用浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天,通过WesternBlot方法检测培养的牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平。结果牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白条带表达,未经地塞米松作用的AQP-1蛋白条带表达灰度值为102.87±11.73。在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天后AQP-1蛋白条带表达灰度值分别为111.64±13.32,115.31±9.41,121.39±9.81,129.42±13.52。当地塞米松浓度≥25μg/L时,AQP-1表达出现抑制作用(P<0.05)。结论地塞米松使培养的牛眼小梁细胞AQP-1的表达减少,这可能是皮质类固醇性青光眼房水流出阻力增加的原因之一。

水通道蛋白与青光眼

水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是一种广泛分布于机体内的跨膜转运蛋白,它主要参与液体的分泌和吸收,在机体组织细胞液体的转运中起着至关重要的作用。目前已发现眼组织中液体的分泌和吸收与AQPs 分布具有密切的相关性。本文就 AQPs 在眼组织的分布、与青光眼的可能关系以及某些抗青光眼药物的作用机制等方面进行综述。

地塞米松对体外培养的晶状体上皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的观察体外培养的人眼晶状体上皮细胞(LECs)水通道蛋白-1(AQP-1)的表达;研究地塞米松对其表达水平的影响。方法运用免疫组织化学法测定人眼LECs AQP-1的表达;用含0、1×10-8、5×10-8、10×10-8、50×10-8mol/L地塞米松的DMEM培养液培养人眼LECs7d,采用RT-PCR检测地塞米松对LECs AQP-1表达的影响。结果免疫组织化学检测示体外培养的正常人眼LECs胞膜和胞浆中可见AQP-1的表达;RT-PCR示正常人眼LECs AQP-1/β-actin吸光度比值为1·43±0·12;4种浓度地塞米松处理7d后其比值分别为1·32±0·09、1·27±0·08、1·01±0·09、0·67±0·10,当地塞米松浓度≥5×10-8mol/L时有抑制作用(P<0·05),且抑制作用随地塞米松浓度的增加逐渐增强。结论体外培养的人眼LECs中可见AQP-1的表达,AQP-1可能参与维持晶状体的脱水状态及其透明性;地塞米松抑制体外培养的人眼LECs AQP-1的表达,AQP-1可能在皮质类固醇性白内障的发生发展中起重要作用。

水通道蛋白-1在小梁切除术之切除组织中的表达

目的观察青光眼患者小梁和虹膜组织与正常眼组织水通道蛋白-1(AQP-1)的表达差异。方法收集开角型和闭角型青光眼小梁切除术时切除的小梁和虹膜组织,免疫组织化学法检测AQP-1的表达,并与正常眼相应组织对照。结果正常眼小梁网组织、Schlemm’s管内皮细胞、周边虹膜组织中上皮和基质组织可见AQP-1呈强阳性着色,开角型青光眼和闭角型青光眼组织标本小梁网AQP-1阳性染色较正常弱;部分急性闭角型青光眼患者周边虹膜组织标本上皮层较基质组织染色明显弱。结论开角型青光眼小梁网AQP-1的表达减少可能与小梁网的发育有关,闭角型青光眼虹膜上皮和小梁网AQP-1的表达减少可能与虹膜萎缩或高眼压有关。

Ahmed青光眼阀盘周纤维包裹二次手术后的临床分析

目的分析Ahmed青光眼阀盘周纤维包裹二次手术切除后的效果和并发症。方法回顾分析在我院行全视网膜冷凝后Ahmed青光眼阀植入后因Ahmed阀的盘和引流管周围形成包裹、眼压超过30mmHg导致手术失败的患者共11例，进行二次纤维包裹切除后，分析其眼压、视力的变化和发生并发症的原因。结果11例患者术后进行1～12月的随访，远期成功率为72．7％。术前和术后眼压平均为（40．72±9．05）mmHg和（17．36±8．09）mmHg，术后较术前显著下降（t=6．38，P〈0．001）。主要并发症为Ahmed阀盘和引流管的暴露。结论二次选择性的瘢痕切除辅以抗增殖药物的应用，能够进一步提高Ahmed青光眼阀植入术的成功率。

β-肌动蛋白作为糖皮质激素作用后晶状体上皮细胞定量mRNA表达的内部参照标准

目的观察糖皮质激素作用体外培养的晶状体上皮细胞时,看家基因β肌动蛋白(βactin)mRNA表达的稳定性,建立该细胞定量mRNA研究的内部参照标准。方法采用含0、1×10-8、5×10-8、10×10-8、50×10-8mol/L不同浓度的地塞米松培养液体外培养晶状体上皮细胞,RTPCR测定β肌动蛋白(βactin)mRNA,并进行半定量灰度分析。结果各组均有明显表达,对照组晶状体上皮细胞β肌动蛋白表达(平均灰度值)为52.99±6.66,1×10-8、5×10-8、10×10-8、50×10-8mol/L地塞米松处理组分别为51.65±4.24、48.85±5.42、50.46±4.89和49.52±3.91,统计学分析各组间平均灰度值差异无显著性。结论体外培养的晶状体上皮细胞经0、1×10-8、5×10-8、10×10-8、50×10-8mol/L地塞米松作用后βactinmRNA表达稳定,是研究糖皮质激素作用于该细胞时可靠的内部参照标准。

晶状体上皮细胞mRNA定量分析中内部参照标准β-肌动蛋白RT-PCR反应条件的研究

目的 探讨晶状体上皮细胞mRNA定量分析中内部参照标准β-肌动蛋白RT-PC反应条件。方法 从培养的人晶状体上皮细胞中提取mRNA，应用设计的引物RT-PCR检测β-肌动蛋白，电泳分析53.2℃、53.9℃、55℃、56.2℃、57.4℃、58.6℃、59.8℃、60℃、62℃、62.7℃不同的退火温度的扩增产物。结果 各退火温度条件下，β-actin扩增产物均形成长度为302bp片段，且未见非特异性扩增产物条带。退火温度为58.6℃时，β-actin扩增产物的条带最清晰。结论 采用本实验中所设计的引物联合58.6℃退火温度等实验条件所扩增的长度为302bp片段，清晰稳定，是晶状体上皮细胞mRNA定量分析中良好的内部参照标准。

体外培养的兔睫状体色素上皮细胞表达转化生长因子-β_1

目的研究体外培养条件下兔睫状体色素上皮(ciliarypigmentepithelium,CPE)细胞是否表达转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1),探讨TGFβ1在增殖性玻璃体视网膜病变中的作用。方法体外培养兔眼CPE细胞,取第3代细胞应用免疫组织化学Supervision染色方法检测TGFβ1的表达,用PBS代替第1抗体作为阴性对照。结果与正常活体组织不同,体外培养的兔CPE细胞经免疫组织化学染色,其细胞膜和细胞浆呈棕黄色阳性着色,阴性对照组未见明显棕黄色阳性着色。结论CPE细胞具有合成和表达TGFβ1潜能,为进一步研究增殖性玻璃体视网膜病变、房水形成和睫状体炎症奠定了基础。

体外培养的小梁细胞表达水通道蛋白-1

目的观察体外培养条件下的牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)是否表达水通道蛋白-1(Aquaporin-1,AQP-1)。方法采用免疫组织化学方法检测AQP-1在BTMC上的表达,并进行半定量分析。结果正常BTMC可见AQP-1蛋白表达,其灰度值为:167.94±1.18;阴性对照为:195.64±1.62,统计学分析其差异具有显著性(P<0.05)。结论在体外培养条件下,BTMC表达AQP-1,这有助于在体外条件下研究房水流出阻力、并探讨青光眼的药物治疗。

地塞米松对小梁细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的 观察地塞米松对培养的牛眼小梁细胞水通道蛋白-1（AQP-1）表达的影响.方法 应用含浓度为5,25,50,250μg/L的地塞米松培养液作用体外培养的第3～4代牛眼小梁细胞.7d后,免疫组织化学方法检测牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平,与正常体外培养的细胞进行对照并进行定量分析.结果 正常牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白表达,其灰度值为184.83±1.52,在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松作用7d后,AQP-1蛋白表达灰度值分别为185.95±1.49,193.25±1.18,196.88±0.91,204.26±1.64.当地塞米松浓度≥25μg/L时出现抑制作用（P〈0.05）.结论 在体外培养条件下,地塞米松可抑制牛眼小梁细胞AQP-1的表达,这可能与糖皮质激素应用后房水流出阻力增加、眼压升高所继发的青光眼有关.

湖北海棠叶水煎剂对HSV-1病毒性结膜炎治疗作用

目的研究湖北海棠叶水煎剂对I型单纯疱疹病毒(HSV-1)所致结膜炎的治疗作用。方法采用湖北海棠叶水煎剂作为实验样品,用利巴韦林滴眼剂作对照。分别以HSV-1感染Vero细胞和家兔眼结膜,通过观察细胞病变效应判断药物抑制病毒复制的环节。对家兔眼结膜炎疾病模型进行眼结膜组织病理学检查,观察低、中、高浓度湖北海棠叶水煎剂对HSV-1兔眼结膜炎的治疗作用。结果体外实验中,湖北海棠叶水煎剂对HSV-1增殖无抑制作用。整体动物实验中,眼部给予湖北海棠叶水煎剂3,6 kg·L-1,连续给药7 d,家兔眼结膜病理性炎症反应明显减弱甚至消失,与0.9%氯化钠溶液对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。中、高剂量组家兔眼结膜炎治疗有效率分别为83.3%和100.0%。结论湖北海棠叶水煎剂可减轻HSV-1所致家兔结膜炎炎性反应。

蛹虫草提取物抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的研究蛹虫草提取物(cordyceps militaris extract,CME)对碱烧伤所致大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用。方法采用碱烧伤法制作大鼠CNV模型,75只大鼠随机分为5组:A组为模型对照组,B组为阳性对照组,C组、D组、E组分别为高、中、低剂量CME治疗组,造模后每组均隔日给药,A组给予生理盐水结膜下注射,B组给予0.5g·L-1地塞米松结膜下注射,C组、D组、E组分别给予10.0mg、5.0mg、2.5mg CME结膜下注射。于造模后第4天、第8天、第14天测量CNV的生长面积,并检测角膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)蛋白及其mRNA的表达情况。结果造模后第4天,C组、D组、E组的CNV面积分别为(4.23±1.62)mm2、(6.15±3.52)mm2、(7.78±1.33)mm2,第8天分别为(6.89±1.93)mm2、(10.19±3.37)mm2、(11.51±3.70)mm2,第14天分别为(12.55±3.96)mm2、(17.14±2.71)mm2、(19.77±5.75)mm2,均较A组(12.03±2.09)mm2、(22.09±4.24)mm2、(25.19±2.22)mm2明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组与B组表达水平相当,差异无统计学意义(P>0.05)。C组、D组、E组角膜组织中VEGF蛋白及其mRNA的表达较A组明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组与B组表达水平相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CME能有效抑制碱烧伤所致大鼠CNV的形成,抑制角膜组织中VEGF的表达可能是其抑制CNV生长的机制之一。

虫草素对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的:研究虫草素对大鼠角膜新生血管的作用及其对角膜组织血管内皮生长因子(VEGF)和其受体VEGFR2表达的影响。方法:48只SD大鼠右眼采用1 mol/L氢氧化钠(Na OH)角膜贴纸方法灼伤角膜制备角膜新生血管模型,造模后隔日随机给予生理盐水0.1 m L(模型对照组)、地塞米松0.6 mg/kg(阳性对照组)、虫草素4 mg/kg(高剂量组)、虫草素2 mg/k(低剂量组)球结膜下注射,每组12只,另取4只未造模大鼠对侧健康眼球为正常对照组;于造模成功后第4、8及14天时分次处死大鼠取角膜组织,HE染色观察各组大鼠角膜组织学改变,测量各组角膜新生血管面积,夹心法ELISA检测角膜VEGF的表达,SP法检测VEGFR2的表达。结果:48只模型大鼠右眼角膜烧灼区域呈灰白色混浊,与正常对照组比较,造模后各组角膜均有新生血管生成,提示造模成功;与正常对照组比较,高剂量组和造模第8天后的低剂量组角膜新生血管生长面积较小,高剂量组角膜组织中VEGF、VEGFR2表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05);与高剂量组比较,低剂量组角膜新生血管生长面积更大,且VEGF、VEGFR2表达较多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:较大剂量虫草素能有效抑制Na OH所致大鼠角膜新生血管的形成,其机制可能与虫草素抑制灼伤角膜组织中VEGF表达有关。

抗菌药物使用强度对半年后医院感染金黄色葡萄球菌耐药率的影响

目的探讨抗菌药物使用强度(AUD)对半年后耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率及医院感染金黄色葡萄球菌(HA-SA)耐药率的影响。方法以半年为单位,统计2012—2015年各类AUD、MRSA检出率和HA-SA对各类抗菌药物的耐药率,采用相关分析和多元线性回归,分析HA-SA对各类抗菌药物的耐药率与同期上半年度各类AUD的相关性。结果 2012年上半年—2015年下半年,总AUD从128.2下降至49.0,除碳青霉烯类AUD上升外,其他类别AUD均下降。2012年下半年—2015年下半年,收治住院患者104 249例,从40 884份病原学标本中分离金黄色葡萄球菌(SA)1 008株,其中社区感染857株(85.02%),医院感染151株(14.98%)。HA-MRSA分离率从2012年下半年的31.25%下降至2015年下半年的12.50%;社区感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)分离率从7.08%上升至16.08%,HA-SA的耐药率普遍高于CA-SA。HA-SA对环丙沙星的耐药率持平,对左氧氟沙星的耐药率上升,对其他8种抗菌药物的耐药率均下降;CA-SA对苯唑西林、环丙沙星、克林霉素、庆大霉素和左氧氟沙星的耐药率上升,对其他药物的耐药率下降;未检出耐万古霉素和利奈唑胺的SA。HA-SA对阿奇霉素和红霉素的耐药率与大环内酯类AUD相关,对克林霉素的耐药率与氨基糖苷类AUD相关,对庆大霉素的耐药率与大环内酯类AUD和总AUD相关。结论抗菌药物选择性压力仍然是细菌产生耐药性的重要原因,降低AUD可减少HA-MRSA检出,降低HA-SA耐药率。

抗菌药使用强度对远期医院获得性金黄色葡萄球菌耐药率的影响

目的：探讨抗菌药使用强度（AUD）对远期（下一季度）医院获得性金黄色葡萄球菌（HA-SAU）耐药率的影响。方法：统计2012年第2季度～2015年第2季度AUD及2012年第3季度～2015年第3季度HA-SAU对10种抗菌药的耐药率,采用相关分析和多重线性回归,分析两者的相关性。结果：2012年第2季度～2015年第2季度AUD从122.69降至58.30。2012年第3季度～2015年第3季度,共分离金黄色葡萄球菌（SAU）935株,其中HA-SAU154株（16.47%）;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）总分离率和社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（CA-MRSA）分离率呈上升趋势,医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（HA-MRSA）分离率呈下降趋势;未检出对万古霉素和利奈唑胺耐药的SAU。HA-SAU耐药率普遍高于CA-SAU,但HA-SAU仅对左氧氟沙星的耐药率上升,对其他9种抗菌药的耐药率下降;CA-SAU对苯唑西林、环丙沙星、克林霉素、青霉素和庆大霉素等5种抗菌药的耐药率上升,对其他5种抗菌药的耐药率下降。HA-SAU对大环内酯类药物的耐药率与庆大霉素的AUD、对苯唑西林的耐药率与阿莫西林/克拉维酸钾的AUD、对氯霉素的耐药率与青霉素和头孢他啶的AUD、对青霉素的耐药率与左氧氟沙星的AUD均呈正相关。结论：降低AUD,有助于减轻远期HA-SAU的耐药率。

人眼结膜吸吮线虫病1例

1病历资料 患儿,男,5岁,先天聋哑。因右眼有异物感、畏光、流泪、分泌物增多1周来本院就诊。眼部检查：左、右眼视力均0.6,右上睑轻度水肿,颞侧及上方结膜囊充血,轻度水肿,结膜囊内较多黏性分泌物;于颞上方结膜囊见灰白色蠕动活虫体,受刺激后迅速向穹窿部蠕动;角膜正常。患眼用0.5%地卡因表面麻醉后取出虫体8条,肉眼见虫体呈线状,灰白色,长约8～14 mm左右,两端稍细,一端圆钝,部分虫体一端弯曲。