基于UPLC-Q-Exactive MS技术的宣白承气汤加味治疗流感病毒与肺炎链球菌共感染小鼠肺炎代谢组学研究

目的基于超高效液相-四级杆-轨道阱高分辨质谱联用(Ultrahigh-performance liquid chromatography-quadrupole exactive mass spectrometry, UPLC-Q-Exactive MS)技术探究宣白承气汤加味对流感病毒/肺炎链球菌(Influenza virus/Streptococcus pneumoniae,Ⅳ/Spn)共感染小鼠肺脏组织中内源性代谢产物的影响,旨在阐明宣白承气汤加味治疗共感染小鼠肺炎的作用机制。方法将36只小鼠随机分为3组,即正常组、模型组和宣白承气汤加味组,每组12只。除正常组外,其余两组小鼠在造模成功6 h后开始灌胃给药,1次/d,连续1周。给药结束后,取小鼠肺脏组织,利用UPLC-Q-Exactive MS技术进行非靶向代谢组学研究,结合主成分分析(Principal component analysis, PCA)和正交偏最小二乘判别分析法(Orthogonal partial least-squares discrimination analysis, OPLS-DA)分析并筛选潜在的代谢产物,并基于R语言对已鉴定的差异性代谢产物进行通路分析。结果在正负离子模式下,共筛选和鉴定出36个潜在的代谢产物,与正常组相比,模型组有27个代谢产物含量显著上升,有9个代谢产物含量显著下降。宣白承气汤加味干预后,36个代谢产物的含量均呈现明显的回调趋势,主要影响亚油酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢、核黄素代谢等通路。结论宣白承气汤加味对Ⅳ/Spn共感染小鼠肺炎的治疗作用可能与其调节体内代谢产物失调,恢复体内正常生命活动有关。

小儿呼吸道感染后咳嗽常见病原分析及养阴清肺合剂对感染后咳嗽(肺阴亏虚证)疗效评价

目的观察呼吸道感染后咳嗽(肺阴亏虚证)患儿病原感染情况及养阴清肺合剂治疗本病的疗效。方法选择2017年6月—2020年6月辽宁中医药大学附属医院儿科门诊及病房呼吸道感染后咳嗽(肺阴亏虚证)患儿662例,观察其病原染情况。并将662例患儿根据随机数字表随机分成两组,每组331例,对照组采用西医对症治疗,治疗组在对照组的基础上予养阴清肺合剂口服。比较治疗前后两组患儿咳嗽评分、咳嗽程度、临床症状消失时间,生活质量评价、临床疗效。结果662例感染后咳嗽(肺阴亏虚证)患儿肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇B组病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、单纯疱疹病毒、EB病毒九种病原总阳性率为65.3%(432/662),其中肺炎支原体阳性率为46.7%(309/662),病毒感染占39.6%(262/662);治疗组愈显率分别为92.15%、对照组71.00%(P<0.05);治疗组治疗后咳嗽、痰少、手足心热、夜寐盗汗、大便干症状积分及总积分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组的日间咳嗽、夜间咳嗽、明显降低(P<0.05),咳嗽消失时间与咳痰消失时间也明显减少(P<0.05)。治疗后两组生理状况、心理健康、社会功能及总分均较治疗前显著升高(P<0.05)。结论肺炎支原体感染是所观察病原中最易引起感染后咳嗽(肺阴亏虚证)的原因;在西医对症治疗的基础上加用养阴清肺合剂可以明显改善患儿感染后咳嗽(肺阴亏虚证)的临床症状,在具有较好的临床疗效的同时良好改善患儿生活质量。

小儿肺系病证核心信息特征的研究

探讨小儿肺系病证核心信息特征的表征及分析方法。“同病异证”与“异病同证”一直以来是中医学所独有的特色理念,以小儿肺炎证候学为例,“同病异证”体现为风寒闭肺证、风热闭肺证、痰热闭肺证、湿热闭肺证、毒热闭肺证、阴虚肺热证等,以上证型的病理机制中存在着递进与关联。同时,在病证的演变过程中患者的病理生理指标也会相应地发生变化,能够客观反映这些变化的临床常用指标则可以用来构造该病证知识模型的应用域和客观观察域。根据这些信息特征建立的数学模型可以展现此种变化内外机制,揭示中医病机证候特征从量变到质变的复杂关系。按照这一理论,针对儿童肺系疾病中常见的“异病同证”:上呼吸道感染、支气管炎、支气管肺炎,将此3种疾病同在风热证阶段的核心指标组合在病证指标矩阵中,并以此设计出同证病种同心环图,确立不同的疾病之间核心指标的分布,进而设计了病证指标耦合图,用来分析同证不同病种的核心信息指标的耦合情况,探究病证指标分析与图论计算相关联的研究方法。阐明针对此种信息特征指标计算所需要的核心信息病例报告表的定义及设计理念。

大柴胡汤干预高脂高胆固醇大鼠模型量效关系研究

目的:观察不同剂量大柴胡汤对高脂高胆固醇大鼠血脂的调节,探讨大柴胡汤对大鼠高血脂高胆固醇的作用机制。方法:建立对照组,正常饮食并每日给予生理盐水灌胃;高脂组与模型组以高脂饲料喂饲大鼠造模;治疗组在高脂饲喂同时予大柴胡汤制剂,并根据给药剂量分为低剂量组(1.5 g/10 m L)、中剂量组(3 g/10 m L)、高剂量组(6 g/10 m L)干预。每日观察大鼠的生存状态,分别在造模后10、20、30 d,测量体重并统计,并于实验后第30天取血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。结果:治疗组在高脂造模后第10、20、30天体重增加;治疗组与高血脂模型组对比,大柴胡汤的高、中、低剂量均能显著降低高血脂模型大鼠血清中TC、TG和LDL-C水平,作用效果呈剂量依赖关系。结论:大柴胡汤对高血脂模型大鼠具有较好的降血脂治疗作用,有望进一步应用于临床试验。

大柴胡汤对高脂高胆固醇大鼠TNF-α、IL-6表达水平的影响

目的通过研究大柴胡汤对高脂高胆固醇大鼠模型心肌组织内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达的影响,进一步阐明大柴胡汤治疗高脂高胆固醇疾病的作用机制。方法将45只幼龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、大柴胡汤组3组。正常对照组正常饮食并每日给予生理盐水灌胃;大柴胡汤组、模型组以高脂饲料喂饲大鼠造模;连续10d;实验第11天,大柴胡汤组根据给药剂含生药量为0.3g/mL干预。每日观察大鼠的生存状态,分别在造模后10、20、30d,测量体质量并统计。实验第30天,采用免疫组化法检测各组大鼠心肌组织内TNF-α、IL-6蛋白的表达。结果与正常对照组比较,高脂高胆固醇模型组心肌组织内TNF-α、IL-6蛋白表达均显著上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,大柴胡汤组心肌组织内TNF-α、IL-6蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高脂高胆固醇能刺激机体内TNF-α、IL-6细胞因子的大量释放,大柴胡汤能较好的抑制TNF-α、IL-6蛋白表达,对高脂高胆固醇疾病有一定的防治效果。

基于网络药理学和分子对接探讨胆木浸膏糖浆治疗流行性感冒的作用机制

目的 运用网络药理学方法和分子对接技术探究胆木浸膏糖浆治疗流感可能的作用机制。方法 通过文献查找胆木浸膏活性成分,根据Swiss Target Prediction数据平台对胆木浸膏糖浆的活性成分的作用靶点进行预测,采用Cytoscape 3.6.1软件构建化合物-靶点网络。通过GeneCard数据库查找流感相关基因,通过Venny图将胆木浸膏糖浆活性成分靶点与流感疾病靶点取交集,得到胆木浸膏糖浆有效活性成分治疗流感的关键靶点,构建药物-活性成分-关键靶点-疾病网络。通过STRING数据库对共有靶点进行蛋白质相互作用分析。运用Cytoscape 3.6.1进行可视化,利用插件CytoNCA分析蛋白互作网络(PPI)中度中心性(DC)、中间中心性(BC)、紧密中心性(CC)、特征向量中心性(EC)、网络中心性(NC)和局部平均连通性(LAC)参数,筛选核心靶基因;通过R语言对共有靶点进行基因本体(GO)和基因组数据库(KEGG)通路富集分析。运用AutoDock vina 1.1.2软件对选取的胆木浸膏糖浆主要活性成分与靶点进行分子对接。结果 获得胆木浸膏糖浆对应靶点的活性成分28个,预测作用靶点544个,流感相关基因2 574个,胆木浸膏糖浆治疗流感的关键靶点189个,PPI分析筛选出54个关键靶点,包括苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、信号转导及转录激活因子(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、表皮生长因子受体(EGFR)等;富集分析显示胆木浸膏糖浆和流感的共同生物学过程与炎症反应、细胞增殖与凋亡等相关,作用的主要通路为病毒感染通路、凋亡通路、Th17通路、肿瘤坏死因子通路、T细胞受体信号通路等。分子对接的结果显示主要活性成分与流感病毒神经氨酸酶具有较好结合活性。结论 胆木浸膏糖浆可能主要通过抑制神经氨酸酶活性、炎症反应及凋亡相关因子和通路,抗流感,减轻流感引起的炎症反应,从而达到治疗流感的目的。

宣白承气汤调控巨噬细胞极化在IV/SPN共感染所致肺肠损伤中的机制研究

目的探讨宣白承气汤通过IRE1-XBP1信号通路调控巨噬细胞极化对IV/SPN共感染所致肺肠损伤的作用机制。方法随机将96只小鼠分为正常组、模型组、宣白承气汤组、奥司他韦+头孢组四组,实验采用流感病毒、肺炎链球菌共感染小鼠模型,经给药治疗后,苏木素-伊红(HE)染色观察肺、肠组织病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应RT-PCR法检测小鼠肺肠组织X盒连接蛋白-1(XBP1)、一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平;采用蛋白免疫印迹法Western blot法检测肺肠组织中肌醇需要酶-1(IRE1α),磷酸化(p)-IRE1α、XBP1、iNOS蛋白的表达。结果模型组肺组织中肺泡间隔破裂,大范围肺泡融合,大量炎性细胞聚集,肠组织中单层柱状上皮细胞间紧密连接破坏,数量减少相比,且XBP1、iNOS、TNF-α、IL-6mRNA的水平与p-IRE1α、XBP1、iNOS蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01);宣白承气汤在体内实验中对小鼠的肺泡结构、炎性细胞的浸润有明显改善,肠道病理损伤有明显好转,在3、5、7d的治疗中进一步下调肺肠组织中XBP1、iNOS、TNF-α、IL-6mRNA的水平与p-IRE1α、XBP1、iNOS蛋白水平,且均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论宣白承气汤能调控IRE1-XBP1信号通路,降低炎性因子、M1型关键标志蛋白表达,抑制下游巨噬细胞极化,对IV/SPN所致肺肠损伤有改善作用。

宣白承气汤加味联合西药改善流感病毒与肺炎链球菌共感染小鼠肺炎作用机制

目的 基于TMT(tandem mass tag)标记定量蛋白质组学技术探究流感病毒/肺炎链球菌(IV/Spn)共感染肺炎小鼠的发病机制及中药复方宣白承气汤加味对其的改善作用。方法 选用幼龄健康雄性SPF级Balb/c小鼠40只,分别设置正常组、模型组、中药组、西药组、中西医结合组,每组8只。造膜成功后,分别给予小鼠宣白承气汤加味(0.15 g/mL)、奥司他韦(0.25 mg/mL)/头孢克洛干(0.48 g/mL)及中西药联合干预治疗,正常组与模型组予以等体积的生理盐水灌胃,7天后进行取材,分离各组小鼠肺部组织样品。所有样本经TMT 10标试剂进行标记定量、蛋白酶解、TMT肽段标记与肽段分级、LC-MS/MS分析后,用数据库检索方法确定差异蛋白,并进行生信分析。结果 与正常组比较,模型组小鼠的肺指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组小鼠肺指数明显降低(P<0.05,P<0.01),中药组、西药组及中西结合组的肺指数抑制率分别为68.66%、77.61%、85.07%。与正常组比较,IV/Spn共感染肺炎小鼠共导致259个蛋白的表达变化,涉及补体和凝血级联、氨基糖和核糖代谢、Fcγ介导的吞噬作用等信号通路;宣白承气汤加味干预后共涉及了13个蛋白的表达变化,主要富集于丙酸、丁酸、半乳糖代谢等通路;西药组干预后共涉97个蛋白的表达变化,主要富集于补体和凝血级联、氨基糖和核糖代谢、视黄酸诱导基因蛋白1样受体等通路;中西医结合组干预后共涉144个差异蛋白,主要富集于细胞外基质相互作用、小细胞肺癌、视黄酸诱导基因蛋白1样受体等通路。结论 小鼠肺脏组织中发生的免疫炎性反应是导致IV/Spn共感染肺炎发病的主要原因;宣白承气汤加味可以通过调节肠道菌群失调及物质能量代谢对IV/Spn共感染肺炎起到纠正作用;西药组可以通过免疫调控缓解IV/Spn共感染后的肺部炎症;中西医结合组可以在调节机体免疫、炎症反应的同时为机体提供物质能量。

基于网络药理学和分子对接探讨复方双花口服液治疗流感的作用机制

目的:运用网络药理学方法和分子对接技术探究复方双花口服液治疗流感可能的作用机制。方法:通过文献查找复方双花口服液活性成分,根据数据平台对复方双花口服液的活性成分的作用靶点进行预测,构建化合物-靶点网络。将复方双花口服液活性成分靶点与流感疾病靶点取交集,得到关键靶点,构建药物-活性成分-关键靶点-疾病网络。通过对共有核心靶点进行蛋白质相互作用分析,分析蛋白相互作用(PPI)中度中心度(DC)、中间性中心性(BC)、紧密性中心性(CC)、特征向量中心性(EC)、网络中心性(NC)和局部平均连通性(LAC)参数,筛选核心靶基因;选取的复方双花口服液主要活性成分与流感病毒神经氨酸酶靶点进行分子对接。结果:获得复方双花口服液对应靶点的活性成分80个,预测作用靶点616个,流感相关基因2 574个,复方双花口服液治疗流感的关键靶点243个,PPI分析筛选出23个关键核心靶点,包括原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(SRC)、酪氨酸蛋白激酶JAK1(JAK1)等;富集分析显示复方双花口服液和流感的共同生物学过程与炎症反应、细胞增殖及凋亡等相关,作用的主要通路为肿瘤坏死因子信号通路、白细胞介素-17信号通路、凋亡信号通路、Toll样受体信号通路、C型凝集素受体信号通路等。分子对接的结果显示主要活性成分与流感病毒神经氨酸酶具有较好结合活性。结论:复方双花口服液可能主要通过抑制神经氨酸酶活性、炎症反应及凋亡相关因子和通路抗流感,减轻流感引起的炎症反应,从而达到治疗流感的目的。