miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

miR-217靶向PI3K/Akt通路增强阿霉素对急性髓系白血病的敏感性

目的:探讨miR-217对急性髓系白血病细胞增殖及阿霉素敏感性的影响。方法:构建mimic NC和mi R-217 mimic载体转染至HL-60细胞中,q PCR检测转染效率。不同浓度的阿霉素处理细胞24和48 h,CCK-8法检测阿霉素化学敏感性并筛选阿霉素的最佳处理浓度和时间。将细胞分为对照、mimic NC、mi R-217 mimic、阿霉素和mi R-217 mimic+阿霉素共5组,流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR检测miR-217、PI3K和Akt3的表达,Western blot检测PI3K/Akt通路蛋白PI3K、Akt3和凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶验证mi R-217和Akt3的关系。结果:mi R-217 mimic能够增强HL-60细胞对阿霉素的敏感性,阿霉素的最佳处理浓度和时间为160 ng/ml、48 h。与对照组相比,mi R-217 mimic组和阿霉素组细胞凋亡率、mi R-217和Bax蛋白水平显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白和PI3K、Akt3 m RNA和蛋白水平显著降低(P<0.01);与阿霉素组相比,mi R-217 mimic+阿霉素组细胞凋亡率、mi R-217和Bax蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白和PI3K、Akt3 m RNA和蛋白水平显著降低(P<0.01)。双荧光素酶实验表明mi R-217与Akt3之间存在靶向调控关系。结论:mi R-217靶向Akt3调控PI3K/Akt通路,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡并增强阿霉素对急性髓系白血病细胞的敏感性。

宁胃胶囊联合奥美拉唑治疗消化性溃疡临床观察

目的探讨宁胃胶囊联合奥美拉唑治疗消化性溃疡的临床疗效。方法选取医院2021年1月至2023年1月收治的消化性溃疡患者120例,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各60例。两组患者均口服奥美拉唑肠溶胶囊,观察组患者加服宁胃胶囊。两组均持续治疗4周。结果观察组总有效率为95.00%,显著高于对照组的83.33%(P<0.05)。两组患者治疗后的中医证候(脘胁胀满、泛吐酸水、情志抑郁、胃脘嘈杂、脉弦、胸闷食少)积分,基础胃酸分泌量、最大胃酸分泌量、高峰胃酸分泌量均显著减少,血清血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平均显著升高(P<0.05),且观察组上述指标改善更显著(P<0.05)。观察组与对照组不良反应发生率相当(16.67%比13.33%,P>0.05)。结论宁胃胶囊联合奥美拉唑治疗消化性溃疡,可有效改善患者中医症状,减少胃酸分泌,并提高血清VEGF、bFGF水平。

miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中HGF、GLUT4表达及GLUT4分布的影响

目的探讨miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达及GLUT4分布的影响。方法将细胞分为对照组、模型组、miR-93-5p inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-93-5p mimics组和mimics-NC组。对照组细胞正常培养,模型组构建胰岛素抵抗细胞模型,其余组分别转染miR-93-5p inhibitor、inhibitor-NC、miR-93-5p mimics、mimics-NC,转染完成后构建胰岛素抵抗模型。CCK-8检测细胞存活率;试剂盒检测细胞上清液中葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量;qPCR检测miR-93-5p、HGF、GLUT4的mRNA表达水平;Western blot检测HGF、GLUT4蛋白表达水平;免疫荧光检测GLUT4的表达和分布。结果与对照组相比,模型组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01),miR-93-5p水平显著升高(P<0.01),GLUT4膜分布减少。与模型组相比,miR-93-5p inhibitor组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),miR-93-5p水平显著降低(P<0.01),GLUT4膜分布增多;mimics组结果相反。结论miR-93-5p能够抑制胰岛素抵抗细胞模型中HGF和GLUT4的表达,并减少GLUT4的膜分布,具有促进胰岛素抵抗的功能。

慢性粒细胞白血病分子靶向治疗的新进展

近年来，随着分子生物学、免疫学及细胞遗传学等学科的飞速发展，人们对慢性粒细胞白血病（CML）的发病机制有了更深入的了解，并在此基础上探索了许多新的治疗方法。其中，分子靶向治疗成为当前研究的热点。本文就此方面的研究进展作一简要综述。

运用Cox模型和Sokal,Hasford积分系统对慢性髓细胞白血病患者的预后分析

本研究分析影响慢性髓细胞白血病(CML)患者预后的危险因素。采用回顾性研究分析204例CML患者的临床及实验室检查资料,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,用Logrank检验比较生存率,运用Cox回归模型进行单因素及多因素分析,并分别计算Sokal,Hasford积分。结果表明204例患者中位生存时间为50(32-65)月,5年生存率32.3%(95%CI,23.7%-42.6%)。干扰素组与羟基脲组的中位生存时间分别为56(41-67)月和41(19-56)月,5年生存率分别为45.4%(95%CI,37.5%-54.2%)和26.8%(95%CI,21.6%-33.3%)(P<0·001)。经Cox回归分析,Ph染色体阴性、乳酸脱氢酶含量增高、外周血嗜碱性粒细胞≥10%、出现有核红细胞、骨髓原粒细胞≥4%、骨髓原始+早幼粒细胞≥10%和红细胞压积降低是CML预后不良的危险因素,而治疗方法也是影响CML预后的重要因素。羟基脲组经Sokal积分检验,高危组占72.9%,中危组占21.5%,而低危组占5·6%,中位生存时间分别为34(23-49)月、43(32-58)月、50(38-62)月;干扰素组经Hasford积分检验,高危组占17.6%,中危组占25.1%,低危组占57.3%,中位生存时间分别为44(33-57)月、56(45-70)月和66(52-76)月。结论Ph染色体、乳酸脱氢酶含量、红细胞压积、外周血嗜碱性粒细胞、出现有核红细胞、骨髓原始和早幼粒细胞以及治疗方法是影响CML预后的重要因素。以Sokal积分系统评价羟基脲组患者不能很好区分危险组,而Has-ford积分系统评价干扰素组患者,能够区分危险组。

姜黄素联合STI571对K562细胞的作用及其对组蛋白去乙酰化酶8的影响

目的研究姜黄素单用及联合STI571对K562细胞增殖与凋亡的影响,及其对组蛋白去乙酰化酶8(histonedeacetylase 8,HDAC8)的作用,探讨其克服STI571耐药的可能机制。方法四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-ⅤFITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;SABC法检测细胞HDAC8的表达。结果①姜黄素和STI571分别以时间和浓度依赖的方式抑制K562细胞增殖,其36 h的IC50分别为(22.23±2.15)μmol/L和(0.21±0.03)μmol/L,而联用后对K562细胞增殖的抑制作用更为显著。STI571 0.2μmol/L与姜黄素15、30μmol/L联用36 h后的增殖抑制率分别为(72.59±2.81)%和(88.93±1.58)%。②联用姜黄素与STI571能显著增强其诱导K562细胞凋亡的能力。STI571 0.2μmol/L与姜黄素10、30μmol/L联合作用18 h后的凋亡率分别为(15.44±2.92)%和(28.16±3.22)%。③姜黄素能明显抑制K562细胞HDAC8的表达。结论姜黄素与STI571联合能明显增强其抑制K562细胞增殖、诱导凋亡的能力;抑制HDAC8的活性可能是其机制之一。

锰对人脐静脉内皮细胞及半胱天冬酶表达影响

目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系HUVEC-304细胞生长周期及半胱天冬酶-3（caspas-3）、半胱天冬酶-8（caspase-8）表达的影响。方法以100～800μmoml／L）的氯化锰分别处理HUVEC-304细胞24～72h后，四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测EVC-304细胞的生长活性；流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡情况；蛋白印迹法（Western blot）检捌HUVEC-304细胞在，氯化锰半数抑制浓度（IC50）400μmol／L作用24h时caspase．8、caspase-3的表达。结果氯化锰可呈时间及剂量依赖性抑制HUVEC-304细胞的增殖和诱导细胞凋亡，抑制率为22．34％～90．94％，凋亡率为10．20％～98．73％。氯化锰24hIC50约为400μmol／L，在此浓度下。HUVEC-304细胞caspase-8、caspase-3表达显著增高。（P〈0．05）。结论氯化锰能够抑制HUVEC-304细胞的增殖。星明显的时效和量效关系。caspase-8、cas-pase-3表达增高在细胞增殖和凋亡中起重要的作用，可能是其作用机制之一。

皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤1例

我院于2005年3月收治皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤1例，因此病国内罕见报道，且临床表现及病理学表现较为特殊，现报告如下。

长链非编码RNA LINC01268对急性髓系白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA LINC01268对急性髓系白血病(AML)细胞凋亡的影响及其相关机制。方法:采用q RT-PCR检测AML患者外周血样本及AML细胞系HL-60、KG-1中LINC01268和miR-217的表达水平;将HL-60细胞分为pc DNA3.1-NC、pc DNA3.1-LINC01268、si-NC、si-LINC01268、miR-NC、miR-217 mimics、si-LINC01268+inhibitorNC和si-LINC01268+miR-217 inhibitor共8组。采用q RT-PCR检测转染后细胞中LINC01268和miR-217 mRNA的表达;双荧光素酶报告实验检测LINC01268与miR-217的靶向关系;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡;Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白p21、Bcl-2、Bax、caspase-3及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果:LINC01268在AML患者外周血样本、AML细胞系HL-60和KG-1中表达量均明显升高(P<0.05),miR-217表达量明显降低(P<0.05)。与si-NC组和miR-NC组相比,si-LINC01268组和miR-217 mimics组HL-60细胞活力下降(P<0.05)、G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P<0.05),p21、Bax和caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05)。LINC01268靶向结合并负向调控miR-217的表达,抑制miR-217的表达可部分逆转干扰LINC01268对HL-60细胞活力、细胞周期和凋亡的影响;干扰LINC01268可抑制PI3K/AKT信号通路活性,抑制miR-217的表达能部分逆转干扰LINC01268对PI3K/AKT信号通路的抑制作用。结论:AML细胞中LINC01268呈高表达,miR-217呈低表达。LINC01268可通过靶向miR-217表达,促进PI3K/AKT信号通路活性,升高急性髓系白血病细胞存活率,抑制其凋亡。

PD-L1和sIL-2R在滤泡性淋巴瘤患者中的表达及其临床意义

目的:探讨程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)和可溶性白细胞介素2受体(soluble interleukin-2 receptor,sIL-2R)在滤泡性淋巴瘤患者中的表达及其临床意义。方法:选取2017年01月至2019年04月期间我院收治的82例滤泡性淋巴瘤患者(42例Ⅰ-Ⅱ期,40例Ⅲ期)作为观察组和10例健康受试者作为对照组。对比观察两组受试者PD-L1、sIL-2R水平改变,并对影响滤泡性淋巴瘤患者预后的相关因素进行单因素和多因素分析。结果:观察组患者的血清sIL-2R水平和病理组织PD-L1阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),观察组Ⅲ期患者的血清sIL-2R水平和病理组织PD-L1阳性表达率明显高于观察组Ⅰ-Ⅱ期患者(P<0.05);观察组Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ期患者和对照组PD-L1阳性表达的患者分别为13例(30.95%)、17例(42.50%)、1例(10.00%)。单因素分析结果显示滤泡性淋巴瘤患者年龄、国际预后指数、PD-L1蛋白以及sIL-2R蛋白表达水平与患者预后相关(P<0.05),而性别、临床分期、Karnofsky评分及有无症状与患者预后无相关性(P>0.05)。Cox多因素分析结果显示PD-L1和sIL-2R蛋白表达水平是滤泡性淋巴瘤患者独立的预后危险因素(P<0.05)。结论:PD-L1在病理组织和sIL-2R在血清中高表达是滤泡性淋巴瘤患者的预后危险因素,具有临床指导价值。

miRNA-192-5p对多发性骨髓瘤的诊断效能及其与相关临床参数的关联性

目的:分析miRNA-192-5p对多发性骨髓瘤的诊断效能,并进一步分析与患者相关临床参数的关系.方法:选取2016年5月至2019年5月在我院血液及肿瘤科治疗的多发性骨髓瘤患者90例为骨髓瘤组,同时设立正常对照组60 例为同期来我院体检的健康人群,荧光定量PCR 法对多发性骨髓瘤患者及正常人群血清中的miRNA-192-5p 含量进行检测,采用ROC 曲线分析miRNA-192-5p 对多发性骨髓瘤的诊断效能;采用Pearson 相关性分析miRNA-192-5p 与多发性骨髓瘤患者相关临床参数的关联性.结果:在多发性骨髓瘤患者血清中miRNA-192-5p 表达水平为0.72±0.11,在正常对照组血清中miRNA-192-5p 表达水平为1.08±0.15,两组比较具有统计学差异(P<0.05);ROC 曲线分析结果显示,miRNA-192-5p 诊断多发性骨髓瘤的曲线下面积为0.653,截断值为0.68,敏感性为77%,特异度为56%,P =0.023;在β2-MG 含量高的多发性骨髓瘤患者血清中miRNA-192-5p 的含量明显低于β2-MG 含量正常的患者血清中水平(P<0.05),在肌酐水平高的患者血清中miRNA-192-5p 的含量也明显低于肌酐水平正常的患者(P<0.05);miRNA-192-5p 的含量在血红蛋白及白蛋白低下的患者血清中明显低于血红蛋白及白蛋白正常的患者( P<0.05).多发性骨髓瘤患者miRNA-192-5p 的含量分别与IgG 和IgA 含量呈明显负相关(r=-0.457,-0.615,P<0.05).结论:miRNA-192-5p 在多发性骨髓瘤患者血清中存在异常低表达,在多发性骨髓瘤的诊断中只可作为一个辅助诊断标准,其与疾病分期和预后相关指标具有一定相关性,在多发性骨髓瘤疾病进展监测中是一个较好的标志物.

2型糖尿病患者主客观睡眠质量与血糖控制的相关性分析

目的:探究2型糖尿病(T2DM)患者主客观睡眠质量与血糖控制的相关性并加以分析。方法:本次研究按照回顾性分析法将医院近2年来收诊的T2DM共80例作为实验研究对象,随后对这80例患者的病历资料进行整理,叮嘱患者定期到院接受2~4次的HbA1c(糖化血红蛋白)检测,观察患者的血糖水平稳定情况,利用Logistic回归性分析T2DM患者主客观睡眠质量与血糖控制的相关性。结果:当患者自觉睡眠效率≥85%者时HbA1c低于<85%者,而不服用安眠药的患者HbA1c水平显著低于>1次/周,且(P<0.05),而不同客观睡眠质量HbA1c水平之间有可比性,且(P>0.05);HbA1c水平与自觉睡眠效率为负相关,与安眠药使用、PAQI总分呈正相关,且(P<0.05);与客观睡眠质量各变量无相关性(P>0.05);变量安眠药使用、PSQI总分、年龄、自觉睡眠效率、病程以及BMI等均为HbA1c水平的重要影响因素。结论:T2DM患者血糖控制与观察睡眠质量无明显相关性,但是与主客观睡眠质量之间存在相关性,当患者的自觉睡眠效率在85%以下是血糖控制较差的危险因素。

Sokal和Hasford积分系统在慢性粒细胞白血病研究中的临床意义比较

目的比较Sokal和Hasford积分系统在研究慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义。方法204例患者按治疗方案与两种积分系统分别进行分组,比较干扰素两种积分系统对慢性期CML患者生存期的影响,并在不同危险度组内观察干扰素对患者生存期的影响。结果干扰素、Sokal和Hasford积分系统对CML患者的预后均有显著影响(P均<0.001),但多变量分析发现仅有Hasford积分是影响预后的独立因素。在Hasford中高危组与Sokal高危组内,干扰素并不能明显延长患者的生存时间。结论Sokal和Hasford积分系统能较好地预测CML患者的预后,对确定高危组患者后者更为准确。按预后评分系统将患者分组,有利于治疗方案的合理选择。

α硫辛酸抑制miR-29 b表达抗氧化应激促进小鼠糖尿病足愈合的实验研究

目的探讨α硫辛酸对糖尿病足小鼠创面组织氧化应激和创面愈合的影响。方法取60只雄性C 57 BL/6 J小鼠,体质量200~300 g,随机分为糖尿病足组（对照组）、α硫辛酸组、mi R-29 b mimic组及mi R-29 b mimic阴性对照组（NC组）,每组15只。各组采用多次连续腹腔注射链脲佐菌素缓冲液制备2型糖尿病模型,4周后确定模型制备成功后于小鼠后背作大小为5 mm×2 mm的全层创面。之后各组均给予高脂高糖饮食;创面制备当天（第0天）,α硫辛酸组开始尾静脉注射α硫辛酸（100 mg/kg）,连续14 d;mi R-29 b mimic组及NC组在注射α硫辛酸基础上,于第0天分别注射慢病毒包装的mi R-29 b mimic及其阴性对照,病毒注射量为2×107 TU。术后观察各组创面愈合情况,于第7、14天测量并计算相对创面面积;第14天,取各组创面组织采用黄嘌呤氧化酶法和二硫代硝基苯甲酸（5,5-dithiobis-2-nitrobenzoic acid,DTNB）染色法分别测定组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量;第0、7、14天,对照组以及α硫辛酸组取创面组织行实时荧光定量PCR检测mi R-29 b相对表达量。结果各组小鼠均存活至实验完成。α硫辛酸组创面愈合速度快于对照组,其中第7、14天相对创面面积和mi R-29 b相对表达量显著低于对照组,而SOD和GSH含量显著高于对照组（P〈0.05）。mi R-29 b mimic组第7、14天相对创面面积较NC组显著增加,而创面组织中SOD和GSH含量显著低于NC组,比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论α硫辛酸通过抑制mi R-29 b表达进而抑制氧化应激,促进小鼠糖尿病足创面愈合。

α硫辛酸通过抑制miR-29b表达保护成纤维细胞避免氧化损伤

目的探讨α硫辛酸（ALA）保护成纤维细胞避免氧化损伤的作用机制。方法将成纤维细胞经过ALA（200μmol／L）预处理2h后，再用H2O2（50μmol／L）孵育12h。应用噻唑蓝（MTT）法观察细胞存活率，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Caspase-3活性，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定miR-29b表达，Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果ALA显著逆转H2O2诱导的成纤维细胞活性下降、细胞凋亡增加和Caspase-3活性上升（P〈0．05），同时显著下调H2O2处理细胞的miR-29b表达水平。miR-29bmimic转染细胞可逆转ALA对H2O2诱导的成纤维细胞的保护作用，引起细胞活性下降、凋亡增加和Bcl-2蛋白表达上调（P〈0．05）。结论ALA通过抑制miR-29b表达保护成纤维细胞避免氧化损伤。

应用负压封闭引流技术治疗糖尿病足溃疡的临床疗效观察

目的 探讨应用负压封闭引流（VSD）技术治疗糖尿病足溃疡的临床疗效.方法 将58例2型糖尿病足溃疡患者分为非缺血性组和缺血性组,均进行有效清创,应用负压封闭引流治疗,同时进行全身有针对性的综合治疗.结果 非缺血性组患者30例,其中显效26例,有效4例,总有效率100.00％,其中显效率86.70％.创面平均愈合时间为（65.63±14.53）天.缺血性组患者28例,其中显效17例,有效9例,无效2例,总有效率92.86％,其中显效率60.71％.创面平均愈合时间为（93.65±18.67）天.两组之间疗效比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,创面愈合时间比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 负压封闭引流能有效控制感染,促进创面肉芽生长,改善微循环,促进创面愈合,对非缺血性和缺血性足溃疡治疗均有效,非缺血性组优于缺血性组;非缺血性组创面愈合时间比缺血性组明显缩短.