两种昆虫杆状病毒诱导的细胞凋亡

首次发现粉纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙ－ｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＴｎＭＮＰＶ）和中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａｓｉｎｇｌｅｃａｐ－ｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＨａＳＮＰＶ）分别诱导斜纹夜蛾细胞Ｓｌ－ｚｓｕ－１和粉纹夜蛾细胞Ｔｎ－５Ｂ１－４发生典型的细胞凋亡．Ｓｌ－ｚｓｕ－１和Ｔｎ－５Ｂ１－４的细胞凋亡分别开始于病毒感染后１０ｈ和２４ｈ左右，其高峰期细胞凋亡率分别为９５％～１００％和６０％左右．约１０％的Ｔｎ－５Ｂ１－４细胞产生病毒包涵体．感染复数为５的病毒可诱导２种细胞的凋亡率达到高峰．ＴｎＭＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶ的ＤＮＡ不能诱导细胞凋亡，只有用含芽生病毒的接种液攻击细胞才能诱导细胞凋亡．

Xenorhabdus nematophilus BP品系杀虫毒素基因的克隆与鉴别

构建了昆虫病原线虫共生菌XenorhabdusnematophilusBP品系的粘粒文库并用生物测定的方法从中筛选到 2个对棉铃虫初孵幼虫有口服抑杀作用的克隆cos83和cos76。为初步确定这两个克隆的毒素基因与已报道基因的差异程度 ,根据已发表的共生菌毒素基因序列资料设计了 7对引物对这两个克隆进行PCR扩增并对扩增产物进行测序和分析。从毒力较强的cos83中 ,7对引物均扩增出与目标片段大小一致的产物 ,而从cos76中只有 5对扩增到目标片段。测序结果显示 ,cos76的 5个PCR扩增产物与cos83的对应扩增产物DAN序列同源性为 10 0 %。以cos83的 7个PCR扩增产物所编码氨基酸序列进行BLAST分析 ,它们与X .nematophilusPMF12 96和PhotorhabdusluminencencW14毒素相应区间的平均同源性分别为 94%和 5 8% ,说明cos83毒素是共生菌口服毒素家族的一员但与同类的其它毒素有一定的差异 ,值得对其杀虫谱 ,作用机理等进行进一步的研究。

中国南方害虫生物防治50周年回顾

综述了中国南方 50年来害虫生物防治的研究与应用概况 ,特别是大卵 (蓖麻蚕卵 )繁殖赤眼蜂防治甘蔗螟虫的成功先例 ,为后来国内应用柞蚕卵繁殖赤眼蜂提供了宝贵经验。应用平腹小蜂防治荔枝蝽 ,解决了荔枝生产的主要害虫问题 ;引进澳洲瓢虫、孟氏隐唇瓢虫、松突圆蚧花角蚜小蜂均是我国生物防治成功的例证 ;以生物防治为主的水稻害虫综合防治研究坚持了 2 0多年 ,从生产实践和理论方面均取得显著的成绩 ;在昆虫病原微生物的研究与应用方面 ,利用苏云金杆菌以色列变种防治蚊虫、松毛虫质多角体病毒的发现和应用、斜纹夜蛾核多角体病毒的分离以及中试和工厂化生产、昆虫病原线虫的大量繁殖与应用 ,取得了一批有应用价值的成果 ;在分子生物学研究方面 ,利用基因重组扩大了病原微生物的毒力与杀虫谱。总结和继承我国乃至世界上最早的以虫治虫 (黄蚁防治柑桔害虫 )的经验 ,对促进我国生物防治事业的发展具有重要意义。

4株球孢白僵菌对红火蚁毒力的生物测定

在室内筛选了对红火蚁Solenopsis invicta敏感的4株球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株,分别为Bb1501,5974,pr1-6和prl::chi,通过生物测定研究了它们对红火蚁的毒力。实验采用喷雾法并在25±1℃和12L:12D条件下饲养观察10d。实验结果表明,所选的4株白僵菌对红火蚁都有较强的毒力,红火蚁的死亡率随着所用白僵菌浓度的加大而升高。所得实验数据输入时间-剂量-死亡率模型,模拟的模型均可通过Hosmer-Lemeshow拟合异质性检验,表明模型拟合良好。由模型得到各个菌株的时间效应和浓度效应互相相关,即菌株浓度越高,所用的杀虫时间就越短;而随时间的延长,所需要的致死中浓度(LC50)就越来越低。取模型输出的第10d的LC50值,将所选4株白僵菌的毒力由强到弱排序,依次为:pr1-6、pr1::chi、5974和Bb1501。它们的LC50分别为:3.16×105、8.01×105、2.4×106和1.57×107孢子/mL。这4株菌在红火蚁的生物防治中具有一定的潜力。其中,菌株5974的致死速度最快,综合考虑时间效应和浓度效应,该菌株值得进一步研究和开发为生物农药并用于红火蚁的防治。

粤产紫罗勒精油的化学成分研究

水蒸气蒸馏法提取粤产紫罗勒精油,利用气相色谱-质谱联用(GC MS)技术进行化学成分分析,分离鉴定出15种化学成分,其中主要成分有芳樟醇(6.46%)、龙蒿脑(66.81%)、榄香烯(2.31%)和δ 杜松烯醇(9.13%)。

昆虫杆状病毒表达载体系统的研究及应用

昆虫杆状病毒表达载体系统具有表达水平高、表达产物可进行翻译后加工,并可通过感染昆虫幼虫而实现大规模低成本生产基因工程产品,该系统的建立和发展,被誉为20世纪80年代真核表达研究领域的一个重大进展。文章介绍了该系统的产生、发展和技术原理,同时概述了该系统在基础研究、医药和农林业等领域的应用情况。

保幼激素类似物对斜纹夜蛾核多角体病毒增殖的影响

分别用5×106,1×107,5×107,1×108PIBs/mL4种浓度的斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltNPV)感染斜纹夜蛾末龄幼虫(第6龄),并于同龄期以10μg/头的保幼激素类似物(JHA)methoprene分别对各感染组进行点滴处理,以研究JHA对SpltNPV增殖的影响。研究表明,与对照组相比各不同浓度处理组病毒总产量分别提高227.06%、128.71%、52.62%、33.15%,平均单头病毒含量分别提高49.15%、48.40%、36.40%和31.11%,病毒感染死亡率分别提高119.21%、52.72%、12.64%和1.12%。其中以1×107PIBs/mL感染再经JHA处理的病毒总产量和平均单头病毒含量最高,分别为1701.8×108PIBs和60.1×108PIBs。各处理组的病毒总产量和平均单头病毒含量均显著高于其对照组。在此基础上,进一步研究了JHA对染毒与未染毒宿主消化生理的影响。结果表明,JHA处理不仅延长了6龄幼虫的寿命,增加了其取食量,而且还显著提高了幼虫的食物转化率和病毒产量。

甜菜夜蛾人工饲料的研究

研究了营养对甜菜夜蛾生长发育的影响，从２８种不同的人工饲料配方中，筛选出一种有利于甜菜夜蛾生长发育的人工饲料．饲养结果表明，该饲料具有饲养效率高、产卵量多、历期短等特点，并连续饲养１５代．同时还研究了胆固醇、氯化胆碱及复合维生素对甜菜夜蛾的生长发育的影响，实验表明，胆固醇、氯化胆碱对甜菜夜蛾卵的形成及发育起重要作用。

线虫共生菌对水稻纹枯病和稻瘟病的抑菌活性

用菌块移植法初步测定了38株昆虫病原线虫共生细菌对水稻纹枯病菌和稻瘟病菌的抑菌活性,从中选出9株对纹枯病菌,7株对稻瘟病菌有较强抑菌作用的菌株,再用稀释平板法分别测定了这2组菌株的发酵液对纹枯病菌和稻瘟病菌菌丝生长、菌核或分生孢子萌发的抑制活性,筛选出对纹枯病菌和稻瘟病菌都有较强抑菌活性的YNa111和YNd173等菌株。YNa111菌株的发酵液对纹枯病菌的生长有强烈的抑菌活性,稀释40倍的发酵液24h的抑菌率为100%,160倍时为82%。菌株YNd173的发酵液对稻瘟病菌的生长有较强的抑菌活性,稀释5倍和10倍时的抑制率分别为88%和76%。

昆虫病原线虫共生菌BP品系杀虫毒素基因簇中各基因与杀虫活性的关系

昆虫病原线虫共生菌XenorhabdusnematophilusBP的多个杀虫毒素基因集中在一起形成一个约 40kb的基因簇。为研究这个基因簇中各基因与杀虫活性的关系 ,对该共生菌粘粒文库中 5个粘粒克隆XnBP76、XnBP83、XnBP2 0 3、XnBPp378和XnBP41 4及XnBP83的 3个亚克隆插入DNA片段的基因结构和它们对棉铃虫的杀虫活性进行了比较 ,结果显示 ,xptB1 ,xptC1和xptA2 3个基因或后两者的联合表达产物具有最强的杀虫效果 ,缺失其中的任何 1个或 2个会使杀虫活力大幅度地下降或完全消失 ;而xptD1和xptA1的缺失对毒素基因簇的表达产物的杀虫活力影响很小 ;杀虫毒素的物理混合没有明显的增效作用。

Bt毒素蛋白基因的PCR鉴定及定位

利用合成的cryI、cryIII和cryV基因专一性引物 ,检测了从土壤中分离到的 56株苏云金芽孢杆菌菌株所含的晶体毒素蛋白基因。含有cryI基因的有 7株 ,含有cryIII基因的有 2株 ,同时含有cryI和cryV基因的有 2 1株。斑点杂交及Southern杂交分析表明 ,cryV基因定位于 1 50MD的大质粒上。

一种饲养效果更佳的甜菜夜蛾人工饲料

在已报道的一种甜菜夜蛾人工饲料配方基础上 ,通过进一步添加 5种微量营养成分和减少 50 %的干酪素用量 ,筛选出了另一个饲养效果更佳的甜菜夜蛾人工饲料配方。饲养结果表明 ,所选饲料配方不仅保持了原饲料配方饲养效率高、产卵量多、幼虫发育历期短的特点 ,而且克服了原饲料随继代数增加 ,卵孵化率下降的缺点 ,显著延缓了甜菜夜蛾室内种群的衰退。目前 ,该饲料已在甜菜夜蛾核多角体病毒杀虫剂工厂化生产中应用。

苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析

用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A

斜纹夜蛾核多角体病毒egt基因的核苷酸全序列分析及同源性比较

测定了斜纹夜蛾核多角体病毒（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＳｌＮＰＶ）中山大学分离株（ＺｈｏｎｇｓｈａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｉｓｏｌａｔｅ，ＺＳＵ）蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶（ＥｃｄｙｓｔｅｒｏｉｄＵＤＰｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＥＧＴ）基因的核苷酸全序列。该基因编码框包含１５３０个核苷酸，有５０９个氨基酸组成的蛋白质，分子量为５８．５ｋＤ，ＴＡＴＡ框位于ＡＴＧ上游４４处。在终止密码子ＴＡＡ下游１３位，有真核生物基因ｍＲＮＡ转录ｐｏｌｙ（Ａ）加尾酶信号序列：ＡＡＴＡＡＡ。同源性比较显示，ＳｌＮＰＶｅｇｔ基因推测的氨基酸序列与其它昆虫杆状核多角体病毒ＥＧＴ序列同源性很高，与海灰翅夜蛾核多角体病毒（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｏｒａｌｉｓｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＳｌｉＮＰＶ）同源性最高，核苷酸和氨基酸序列同源性分别为８４％和９１％，而且有一些与ＥＧＴ结构和功能密切相关的氨基酸是绝对保守的；根据ＥＧＴ蛋白进行分子进化树分析，把昆虫杆状病毒ＥＧＴ主要分成两大类。

麦麸饲料中细菌对家蝇幼虫生长发育的影响

从饲料用麦麸中分离出的12种细菌均能支持无菌家蝇Musca domesticaL.幼虫在胰化酪蛋白大豆卵黄琼脂(Trypticase Soy Egg Yolk Agar,TSEYA)培养基中完成整个生长发育过程。1)幼虫在接种香味类香味菌Myroides odoratimimus的TSEYA培养基中生长时间最短,仅需97.61±1.14h;2)幼虫在接种醋酸钙不动杆菌Acinetobacter calcoaceticus的TSEYA培养基中的化蛹率可达到86.81%;3)从接种嗜水汽单胞菌Aeromonas hydrophila的TSEYA培养基中得到的蝇蛹重量最高,达到20.15±0.23mg/个;4)除铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa饲养的家蝇羽化率较低(60.87%)外,其余各种细菌饲养的羽化率在84.33%～97.47%之间。此外,枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、香味类香味菌、聚团肠杆菌Enterobacter agglomerans以及成团肠杆菌Pantoea agglomerans可作为单一营养来源支持幼虫完成整个生长发育过程。对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aurous、成团肠杆菌、大肠杆菌Escherichia coli、奇异变形杆菌Proteus mirabilis以及香味类香味菌中各种营养成分进行分析,结果发现,6种细菌均能提供大量的维生素B3(0.105～1.08g/kg)。在氨基酸方面,香味类香味菌和枯草芽孢杆菌中的10种昆虫必需氨基酸含量与总氨基酸含量之比(Essential amino acid/Total amino acid,EAA/TAA)最高,而金黄色葡萄球菌最低。这个比例与蛹重呈正相关(p=0.031)。在脂肪酸相对含量方面,金黄色葡萄球菌具有最高的饱和脂肪酸含量(76.38%),香味类香味菌含有56.79%的不饱和脂肪酸,而枯草芽孢杆菌则具有最高的支链脂肪酸含量(42.16%)。

17400 鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化及生物学活性研究

采用盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、Sephadex-75柱层析和C_4反相高效液相色谱等分离步骤,从广东阳江鲨鱼软骨中纯化获得新的鲨鱼软骨血管生成抑制因子SCAI-c(Shark Cartilage Angiogenesis In-hibitor-c,SCAI-c);SDS-PAGE电泳银染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量为17 400;它对鸡胚绒毛尿囊膜血管的形成具有显著抑制效应,并有明显的浓度依赖关系.SCAI-c与SCAI-a具有类似的生物学特征.

苏云金杆菌营养期杀虫蛋白的研究

营养期杀虫蛋白 (vegetativeinsecticidalproteins ,VIPs)是苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白。VIPs主要分为VIP1、VIP2和VIP3三种。VIP1和VIP2构成二元毒素 ,对鞘翅目叶甲科的昆虫具有杀虫特异性 ;而VIP3对鳞翅目昆虫具有较广谱的杀虫活性。VIP1和VIP2的杀虫作用机理还不清楚 ;VIP3通过诱发细胞凋亡 ,最终导致昆虫死亡 ,这种作用机理与Bt杀虫晶体蛋白的作用机理完全不同 ,这为筛选新的杀虫活性物质提供了新的思路。vip基因现已被应用于转基因杀虫植物的构建 ,得到高效抗虫的多价转基因玉米。此外 ,VIPs嵌合蛋白的构建、vip及其融合基因导入其它许多宿主微生物等方面的研究也具有诱人的潜在应用前景。

苏云金芽胞杆菌肠毒素基因的PCR检测

采用多重引物PCR进行了 45株苏云金芽胞杆菌、2株蜡状芽胞杆菌和 2株球形芽胞杆菌溶血素BL ,肠毒素T和entS基因的检测 ,结果表明 95 6%苏云金芽胞杆菌含溶血素hblA基因 ,91 1 %含bceT基因 ,93 3%含entS基因。用两种商业化肠毒素检测试剂盒TECRA和RPLA进行所有菌株肠毒素的体外免疫测定 ,大部分苏云金芽胞杆菌和阳性蜡状芽胞杆菌都能产生不同水平的肠毒素活性 ,同hblA基因PCR检测结果基本相符。尽管DBT0 0 7和T2 4 0 0 1含有hblA基因 ,但用TECRA却检测不到肠毒素 ;Dmu39菌株不含肠毒素基因 ,但用TECRA却检测出高的肠毒素活性。苏云金芽胞杆菌BDT2 4 8和球性芽孢杆菌不含肠毒素基因和肠毒素。

长叶竹柏挥发油的化学成分研究

用水蒸气蒸馏法提取罗汉松科植物长叶竹柏(PodocarpusfleuryiHickel)叶片中的挥发油,得油率为0.5%,采用GC-MS方法进行化学成分分析,首次鉴定出24种化合物,占总离子流出峰面积的97.29%。长叶竹柏挥发油的主要成分为萜烯类和醇类物质,主要有α-蒎烯(8.67%)、(-)-β-榄香烯(2.68%)、β-石竹烯(3.97%)、(+)-喇叭烯(2.11%)、大根香叶烯(21.56%)、4-异亚丙烯基-1-乙烯基烯(45.13%)、β-杜松烯(2.02%)和(-)-斯巴醇(3.15%)。