G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。绘制病毒生长动力学曲线。结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

干扰素作用机制的研究进展

干扰素是具有抗病毒、抗增殖和免疫调节功能的糖蛋白。被广泛用于治疗许多疾病,如丙型肝炎、癌症和免疫介导的疾病,如多发性硬化症。本文回顾了干扰素作用机制,从干扰素抗病毒作用机制、病毒拮抗干扰素反应、干扰素抗增殖作用机制以及免疫调节作用等方面进行了综述。干扰素激活分子在病毒复制周期的许多阶段表现出抗病毒活性。同时,病毒已进化出多种策略逃逸或抑制天然免疫系统。补充外源性干扰素可以增强机体抵抗病毒感染。

数字时代下高职教师数字素养的现状及培养路径

数字时代下高职教师数字素养内涵包括在教育教学方面的数字化意识素养、数字化技能素养、数字化应用素养、数字化道德素养。在调查、分析高职教师数字素养现状及成因的基础上,提出高职教师数字素养的培养路径:更新观念,树立数字化教育理念;终身学习,提高数字化应用能力;综合谋划,建立数字素养系统培训体系;完善政策,健全数字素养管理机制;加大投入,保障数字校园环境建设。

Photoshop在室内效果图后期处理中的应用

Photoshop是一款功能及其强大的应用软件,广泛应用于平面设计、包装设计、室内设计等领域。本文从室内效果图后期处理的角度出发,结合一卧室空间案例,充分表现Photoshop在室内效果图后期处理中的作用和方法。

浅谈网页界面设计中的色彩运用

目前,网络已经成为信息交流的一个重要的途径。网页界面作为视觉表现的一种形式,极大地拓展了视觉传达设计的范围。文章以网页界面设计中的色彩为分析对象,探讨了在设计中如何运用色调,创造出和谐、生动、独特的网页界面设计作品。

浅谈VRay光在室内渲染中的应用

VRay是目前世界上最受欢迎的一款主流渲染器,广泛应用于建筑、室内设计、工业产品、影视动画等领域。本文从室内空间布置光的角度出发,结合具体案例,充分表现VRay光在室内渲染中的作用和布置方法。

现代卧室空间计算机效果图表现

3ds Max是一款功能强大、易学易用的三维软件,广泛应用于建筑、室内设计、工业产品、影视动画等领域。本文从室内空间场景的创建出发,结合具体卧室案例,充分表现材质和光在室内效果图中的制作方法和作用。

浅谈室内空间手绘表现中的图片写生

图片写生在室内空间手绘表现中是重要的一个练习环节。本文以一点透视的客厅为例，探讨了图片写生要注意使用概括的处理方法简化图片，主观地对画面进行处理；采用取舍和对比的手法，使画面具有新的视觉效果。同时，总结了关于一点透视客厅空间的画法和步骤。

结合岗位需求的高素质“双师”导师团队组建探析

在高职院校发展的过程中，双师型师资队伍建设是高职教育教师队伍建设的特色和重点．也是高职院校发展的生命线。本文主要结合广告与会展行业的岗位需求，通过一系列的调研和整理，探析双师内涵，探索培养组建高素质、结构合理的“双师型”的导师团队，为社会培养高素质专业技术技能人才。

我国罕见G9P[8]-A2基因型重配株轮状病毒全基因组分子特征分析

目的 了解我国1株G9P[8]基因型A组轮状病毒(RVA)JL18221140的全基因组分子特征。方法 对我国吉林省1例G9P[8]基因型RVA(JL18221140)原始粪便标本采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)一步法扩增11个基因节段,并通过DNAStar, MEGA 11.0等生物信息分析软件进行同源性及进化分析。结果 JL18221140的全基因组11个节段的基因型为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A2-N1-T1-E1-H1,NSP1基因型呈现DS-1样特征。系统发育分析显示VP7和VP4分别聚集在谱系G9-Ⅵ和P[8]-Ⅲ中。结论 JL18221140为G9P[8]基因型中罕见的G9P[8]-A2重配株,该基因型可能是由中国流行的G9P[8]-A1和G2P[4]-A2毒株共感染过程中基因组间重配产生的。表明对RVA持续监测并对全基因组测序的重要性,有利于了解我国RVA毒株的遗传变异情况,为今后病毒的防控和疫苗的研发提供更有效的基础数据。

重组呼吸道合胞病毒G蛋白保守域的腺病毒载体疫苗的研究

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守域(Gbcc和Gacc)的重组Ad5载体质粒(Ad5-Gbcc-Gacc)并转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gbcc-Gacc;通过多酶切鉴定病毒Ad5-Gbcc-Gacc的基因组,用Western blot验证Gbcc-Gacc基因的表达水平;重组腺病毒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠1次,在第6周用RSV Long毒株对小鼠以滴鼻的方式进行攻毒。用酶联免疫吸附试验(Elisa)检测和评价免疫小鼠血清IgG及抗体亚型,用微中和检测的方法测定中和抗体水平,同时每天记录小鼠攻毒前后的体重,并检测小鼠肺组织的病理变化、肺和鼻组织中RSV病毒拷贝数。结果Western blot及多酶切鉴定结果与预期相符,表明重组腺病毒拯救成功。Ad5-Gbcc-Gacc在小鼠体内可以诱导较高滴度的特异性IgG、中和抗体水平及Th1/Th2平衡的免疫反应。与未免疫小鼠比较,经Ad5-Gbcc-Gacc免疫小鼠攻毒后肺部只有轻微病理损伤,且肺部及鼻甲的病毒拷贝数降低。结论Ad5-Gbcc-Gacc具备良好的免疫原性,并能对RSV感染小鼠有一定的保护作用,为进一步研制基于G蛋白的RSV疫苗奠定了基础。

一株罕见G4P[6]-I5-A8基因型人轮状病毒全基因组序列分析

目的研究一株G4P[6]基因型A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)CZ079的全基因组特征及进化规律.方法利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)对CZ079的VP7、VP4、VP6、NSP1节段分别进行RT-PCR扩增,通过在线RVA自动分型工具对其分型,采用DNAstar5.1和Mega 11.0软件对各节段进行同源性及遗传进化分析.结果CZ079毒株基因型为G4-P[6]-I5-R 1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1.VP6为I5型,NSP1为A8型.CZ079与LLR^(TM)、RotaTeq^(TM)和Rotarix^(TM)三种疫苗株在VP7的抗原表位中7-1b区域均存在氨基酸差异;VP4蛋白裂解后的VP8*抗原表位中8-1、8-2、8-3、8-4、5-1区域存在较大差异.结论2022年RVA毒株CZ079为罕见的G4P[6]-I5-A8型,推测该基因型RVA是由越南等东南亚地区传入中国,与中国RVA发生重配产生的新型重配毒株.

人肠道类器官培养在诺如病毒和轮状病毒感染研究中的应用

人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)和轮状病毒(human rotavirus,HRV)感染是引起人类急性胃肠炎的主要病因,为全球造成巨大的疾病负担.病毒的分离培养对研究病毒感染特性、与宿主免疫反应相互作用机制和制定防治策略至关重要.人肠道类器官(human intestinal enteroids,HIEs/human intesinal organoids,HIOs)体外三维培养体系的建立与发展为HuNoV和HRV的分子生物学机制研究提供了重要的平台.本文综述了HIEs/HIOs培养在HuNoV和HRV感染研究中的应用,为利用肠道类器官对胃肠炎病毒的深入研究提供参考.

鼠诺如病毒感染RAW264.7细胞中干扰素和干扰素激活基因转录水平研究

诺如病毒（Norovirus,NoV）是全球急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要致病原。鼠诺如病毒（Murine norovirus,MNV）是研究诺如病毒的理想研究模型。本研究通过实时定量荧光PCR检测急性感染毒株MNV-CW1和持续性感染毒株MNV-SH1603感染Balb/c小鼠后的排毒情况以及感染RAW264.7细胞后不同时间点病毒RNA扩增、干扰素（Interferon,IFN）和干扰素激活基因（Interferon-stimulated gene,ISG）转录水平,以探讨不同的MNV毒株感染诱导IFNs和ISGs基因表达的特征。研究显示MNV-CW1和MNV-SH1603病毒感染Balb/c小鼠后排毒时间不同。MNV-CW1和MNV-SH1603病毒感染RAW264.7细胞后,6h后出现明显扩增,48h达到病毒复制高峰,随后复制速度减慢。MNV-SH1603增殖比MNV-CW1快。两种病毒感染RAW264.7细胞后能上调IFN-β,IFN-λ2,ISG15和ISG54转录水平。MNV-CW1感染后,诱导IFN-β,IFN-λ2和ISG15基因表达上调,而ISG54在感染24h后转录水平下降。MNV-SH1603感染初期IFN-β,IFN-λ2,ISG15和ISG54基因转录水平持续增高,感染24h后IFN-β和ISG54的转录水平明显降低,IFN-λ2和ISG15转录水平峰值在感染后72h。研究揭示MNV病毒感染RAW264.7细胞后能上调IFN和ISG基因表达,但是MNV-CW1和MNV-SH1603诱导的基因表达特征有异同。

白细胞介素-6基因启动子区-572位点多态性与EV71感染疾病严重程度的相关性分析

目的探讨白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）基因启动子区-572位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与儿童肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）感染疾病严重程度的相关性。方法提取87份EV71重症感染患者和57份无症状隐性感染儿童血液样本基因组DNA,进行PCR扩增及测序,检测IL-6基因启动子区-572位点多态性,利用Logistic回归分析基因型频率。结果 EV71重症感染患者IL-6基因型频率与对照组相比,差异有统计学意义（OR=2.605,95%CI：1.117～6.074,P=0.027）。IL-6多态性与EV71感染严重程度有关（OR=2.411,95%CI：1.236-4.706,P=0.010）。结论 IL-6多态性与中国儿童EV71重症感染可能具有相关性,对确定影响疾病严重程度的宿主遗传因素和增强治疗效果具有重要意义。

人干扰素λ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及其转录活性分析

目的构建人干扰素λ1(interferonλ1,IFNλ1)基因启动子荧光素酶报告基因载体,并探讨仙台病毒及质粒IRF3-5D和HA-IRF7对其转录活性的影响。方法提取BEAS-2B细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增IFNλ1基因启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-enhancer,构建IFNλ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc,将其转染293T细胞,同时用质粒IFNβ-luc和pGL3-enhancer转染作为对照。转染24 h后感染仙台病毒,于感染前和感染后4、12、18和24 h收集细胞,进行双荧光素酶活性检测;用质粒IRF3-5D或HA-IRF7与质粒IFNL1-luc共转染,36 h后收集细胞,进行双荧光素酶活性检测。结果 IFNλ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;分别转染质粒IFNL1-luc和IFNβ-luc的细胞感染仙台病毒后,荧光素酶活性倍数均随时间延长呈明显上升趋势,至18 h达到峰值(分别为1 000倍和2 300倍),转染质粒pGL3-enhancer的细胞感染仙台病毒后,不同时间点收集的细胞,荧光素酶活性倍数一直处于较低水平;质粒HA-IRF7或IRF3-5D对IFNL1-luc的活化倍数明显高于pGL3-enhancer(P<0.05)。结论成功构建了IFNλ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc,仙台病毒及质粒IRF3-5D和HA-IRF7均能激活IFNL1-luc的转录,为进一步研究调控IFNλ1表达的信号转导通路奠定了基础。

鼠诺如病毒MNV—CW1感染C57BL／6小鼠的特点

目的 探讨鼠诺如病毒（Murinenoroviurs，MNV）感染C57BL／6小鼠后临床及生物学特征，了解MNV的感染特点。方法将MNV—CWI毒株以高剂量（10^4PFU／只）和低剂量（102PFU／只）分别灌胃到C57BL／6小鼠体内，建立MNV感染小鼠模型。对感染小鼠进行体征观察和体温检测，检测粪便和血液排毒情况、组织中病毒的分布情况以及十二指肠病理切片检查。结果感染的小鼠没有明显的体表变化，没有腹泻、发热等临床症状和病理改变。粪便检测感染后1～2d排毒。在感染后第3天部分血液中检测到MNVRNA。主要感染部位为消化系统和脾脏。结论本研究建立的MNV—CW1感染C57BL／6小鼠模型为MNV感染小鼠致病机制进一步研究提供实验信息和技术支撑。

2008～2009年度济南市流感病原学监测资料分析

[目的]了解济南市流行性感冒(流感)流行动态及病毒变化情况,为进一步做好流感预防控制工作提供科学依据。[方法]对2008～2009年度济南市流感监测资料进行分析。[结果]2008年10月至2009年3月,2所监测哨点医院合计报告内科、儿内科门诊急诊病例100706例,其中流感样病例1920例,占1.91%。检测咽拭子标本388份,分离到流感病毒61株,分离率为15.72%。61株流感病毒中,季节性流感H1N1亚型占72.31%,季节性流感H3N2亚型占9.84%,B(Victoria)亚型占13.11%,B(Yamagata)亚型占1.64%,未定型占3.28%。[结论]2008～2009年度流感流行季节流感优势毒株为季节性A/H1N1亚型,并逐渐过渡为A/H3N2亚型与B型。

聚肌苷酸胞苷酸在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活干扰素β荧光素酶报告基因系统实验条件的优化

目的优化不同长度聚肌苷酸胞苷酸[polyinosinic acid:polycytidylic acid,poly(I∶C)]在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活Ⅰ型干扰素(IFNβ)荧光素酶报告基因系统的实验条件。方法将质粒IFN-β-luc分别转染HEK293T及BEAS-2B细胞后,HEK293T细胞转染不同浓度(0.25、0.5、1.0、1.5和2.0μg/孔)的高分子量(HMW)poly(I∶C)和低分子量(LMW)poly(I∶C),检测其对HEK293T细胞中IFNβ启动子激活的影响;BEAS-2B细胞直接加入不同浓度(0.1、1.0、10.0、20.0和50.0μg/孔)及转染不同浓度(同HEK293T细胞)的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C),检测其对BEAS-2B细胞中IFNβ启动子激活的影响。结果 poly(I∶C)转染HEK293T细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.5μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)转染24 h。poly(I∶C)直接加入BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:50μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)作用6 h;poly(I∶C)转染BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.25μg/孔的HMW poly(I∶C)转染12 h,0.5μg/孔的LMW poly(I∶C)转染12 h。结论成功优化了poly(I∶C)在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活IFNβ启动子的实验条件,为poly(I∶C)激活免疫反应机制的研究提供了实验依据。