PinX1的原核表达、纯化及其与hTERT的相互作用

目的:原核表达人Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1),确定该蛋白与人端粒酶逆转录酶(hTERT)催化亚基的相互作用。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增PinX1基因的编码序列,克隆至pET-32a载体构建重组质粒pHisPinX1,经双酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹检测His-PinX1的表达;用His磁珠纯化His-PinX1,在人肾胚细胞293T内检测His-PinX1与hTERT的相互作用。结果:扩增得到980 bp的PinX1基因;Western印迹检测表明,相对分子质量约57×103的His-PinX1获得表达,且纯化的His-PinX1与hTERT具有相互作用。结论:表达并纯化得到了与hTERT相互作用的His-PinX1,为深入研究PinX1的功能奠定了基础。

正颌外科技术治疗牙颌面畸形的临床观察

目的探讨各种先天和后天患者牙颌面畸形的诊断和正颌外科治疗方法。方法利用影像学和模型外科技术,对牙颌面畸形分类诊断,选择正颌外科技术进行手术修复,恢复正常牙颌面关系和面部外形。结果分析牙颌面畸形患者的影像学资料,明确诊断畸形类型,通过模型外科设计手术方案,进行正颌外科技术治疗,对比手术前后效果,手术安全,达到预期效果。结论正颌和牵张成骨技术对牙颌面畸形的治疗十分有效。

改良带蒂胸大肌肌皮瓣修复口腔颌面肿瘤术后缺损的临床分析

目的：探讨只带血管蒂的改良胸大肌皮瓣转移修复口腔颌面部组织缺损的临床效果。方法：取胸大肌皮瓣时蒂部只保留血管,利用改良只带血管蒂的胸大肌皮瓣对6例不同口腔颌面部组织缺损进行修复,包括舌癌3例、舌咽癌1例、牙龈癌1例、颊癌1例。结果：术后皮瓣血供良好,完整成活,成活率100%;所有患者获得3~18个月随访,在随访期内均存活;重建的舌外形良好,虽然味觉功能无法恢复,运动功能随切除范围增加而降低,但均能满足发音、吞咽和咀嚼功能需要。结论：只带血管蒂的改良胸大肌皮瓣是修复口腔颌面部组织缺损有效而可靠的方法,为恶性肿瘤根治术后造成的缺损提供了有力修复保障。

神经生长因子复合锶磷灰石在即刻种植周围骨缺损修复中的动物实验

目的探讨神经生长因子复合锶磷灰石在即刻种植周围骨缺损的修复效果。方法 6只实验健康成年杂种犬,微创拔除双侧下颌第2、3、4前磨牙,同时即刻植入种植体共36枚,每只6枚。在每只实验犬的每枚种植体的近中制备4mm×5 mm×6 mm大小的骨缺损,随机分为实验组、阳性对照组和空白对照组,每组2处,给予不同方法处理。实验组缺损处植入神经生长因子复合锶磷灰石;阳性对照组缺损处植入锶磷灰石;空白对照组缺损处不植入任何材料。术后4、8周各处死3只实验犬,取得相应标本,分别行大体解剖观察,Micro CT观察,组织形态学观察。结果术后4、8周各组缺损处均有不同程度的骨组织再生,实验组新生骨密度及骨小梁较其他组明显增高和增多,阳性对照组组次之,空白对照组最差,且3组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论神经生长因子复合锶磷灰石是一种良好的骨修复材料,可促进即刻种植周围骨缺损的骨生成,提高骨结合率。

乳腺癌雌激素受体β不同亚型表达载体的构建及其转录活性分析

目的:构建人乳腺癌中雌激素受体β(ERβ)3种亚型ERβ1、ERβ2和ERβ5的真核表达载体,测定不同亚型ERβ的转录活性。方法:以乳腺癌细胞MCF7的cDNA为模板,PCR扩增ERβ1、ERβ2和ERβ5基因,分别克隆到pXJ40-Myc载体,Western印迹检测克隆载体在293T细胞内的表达;将上述载体与含雌激素应答元件(ERE)的萤光素酶(Luc)报告基因载体(ERE-luc)共转293T细胞,测定各亚型ERβ的转录活性。结果:构建了Myc-ERβ1、Myc-ERβ2和Myc-ERβ5表达载体,转录活性结果显示上述表达载体均具有活性,雌激素可升高ERβ1的转录活性,不能升高ERβ2和ERβ5的转录活性。结论:该研究为进一步探讨不同亚型ERβ在乳腺癌中的功能奠定了基础。

补钙与大鼠龋病发生的相关性实验

目的观察不同生长发育时期补钙对大鼠龋病发生的影响。方法对三十例大鼠在不同生长发育时期进行补钙复制龋齿模型,观察其相关性的研究。A组(10只)胚胎期补钙组:母鼠从受孕3 d开始补钙,断奶后给幼鼠口服补钙,同时复制龋齿模型;B组(10只)出生后补钙组:哺乳期间给母鼠补钙,断奶后处理同胚胎期补钙组;C组(10只)单纯龋齿对照组:不进行额外补钙,复制龋齿模型。结果胚胎期补钙组预防龋齿的效果最好,出生后补钙组次之,单纯龋齿对照组多发龋齿。结论早期补钙对预防龋齿的发生有一定作用。

E4F1真核表达载体的构建及与p53的相互作用

目的：构建E4 F1野生型及缺失32～81位氨基酸的真核表达载体，检测其与p53的相互作用及对下游基因p53的调节。方法分别用普通PCR和重组PCR方法从乳腺文库中扩增E4F1野生型编码序列及缺失32～81位氨基酸的突变型序列，分别将其以正确相位构建到pXJ40-MYC载体中，得到重组质粒MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81），分别转化大肠杆菌DH5α，重组质粒经酶切鉴定并转染293 T细胞， Western印迹检测蛋白的表达。将MYC-E4F1和MYC-E4F1（Δ32-81）质粒与FLAG-p53质粒共转染293T 细胞，免疫共沉淀实验检测其相互作用，野生型及缺失突变型表达载体共转染骨肉瘤细胞U2OS，检测其对下游基因p53的调节。结果 E4F1重组质粒及其突变型构建成功，在293 T细胞中鉴定表达正确，野生型及突变型E4 F1均与p53存在相互作用，突变型的结合能力增强，野生型E4F1升高p21蛋白表达水平，而突变型不改变p21蛋白水平。结论成功构建E4F1野生型及缺失32～81位氨基酸的突变型真核表达载体，二者都能与p53相互作用且突变型结合能力更强，野生型E4F1升高基因p53的靶基因p21的蛋白表达水平，而突变型不改变靶基因p21的蛋白水平。该研究为进一步研究E4 F1对p53的调节及其机制奠定了基础。

神经生长因子复合支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的观察外源性神经生长因子负载于明胶海绵并与生物支架材料CERASORB骨粉形成复合体,对兔下颌骨缺损修复的作用。方法成年新西兰兔18只,制备大小为15×8mm2的骨缺损,实验组植入适量的CERASORB骨粉后用NGF明胶海绵覆盖。对照组植入适量的CERASORB骨粉后用滴加等量生理盐水的明胶海绵覆盖。比较组不植入任何材料。分别于术后2周、4周、8周处死6只动物获取标本,行大体观察,影像学观察,并对观察结果进行统计学分析。结果神经生长因子明胶海绵复合CERASORB骨粉修复兔下颌骨缺损修复时间明显短于两组对照组,术后8周得到基本完全的骨修复。结论以明胶海绵为载体的NGF复合CERASORB骨粉支架材料明显促进骨缺损修复,具有良好的生物相容性和可操作性。