大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC的结构特性及刺激Caco-2细胞作用的研究

试验旨在分析大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC(FliC_(EcN))的结构特征及其对Caco-2细胞的刺激作用。试验通过大肠杆菌BL21(DE3)表达FliCEcN蛋白、经NTA柱纯化FliC_(EcN)蛋白并通过SDS-PAGE和Westernblot验证,利用SOPMA和Alphofold2预测FliC_(EcN)蛋白的结构模型、表面增强拉曼光谱和圆二色谱解析FliC_(EcN)蛋白的结构,使用FliC_(EcN)蛋白刺激Caco-2细胞后,检测免疫相关因子的分泌水平。结果显示,FliC_(EcN)蛋白的大小为64kDa,能够被抗His单克隆抗体特异识别;FliC_(EcN)蛋白的氨基和羧基末端主要由α-螺旋组成,中间结构域主要由β-折叠组成。FliC_(EcN)蛋白酰胺Ⅰ区最大吸收峰均位于1656 cm^(-1)处,主要二级结构为α-螺旋和β-折叠;FliC_(EcN)的α-螺旋占比44.4%,β-折叠占比23.4%,β-转角占比13.5%,无规则卷曲占比19.0%;FliC_(EcN)蛋白能够有效刺激Caco-2细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10);随着刺激时间延长,IL-6的分泌水平呈下降趋势,IL-10和TNF-α的分泌水平呈增加趋势。研究表明,α-螺旋和β-折叠是构成FliC_(EcN)的主要结构,可促进其构象的正确折叠和维持其三维结构稳定,FliC_(EcN)蛋白刺激Caco-2细胞分泌IL-6、IL-10、TNF-α的水平存在差异。

1株关岭黄牛瘤胃源发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

为了分离具有优良益生特性的牛源乳酸菌,探究其用于畜牧微生态制剂研发的潜力,试验采集健康关岭黄牛瘤胃液,接种于MRS肉汤培养基富集后分离乳酸菌,使用含0.3%胆盐的无菌PBS初步筛选耐胆盐乳酸菌,通过革兰氏染色镜检和16S rRNA测序进行鉴定,并对分离菌的生长特性、产酸能力、耐受特性、药物敏感性、抑菌特性及细胞黏附性进行分析。结果表明:经筛选分离得到1株菌,命名为NCO,经革兰氏染色、镜检和16S rRNA测序鉴定为发酵乳杆菌;该菌具有良好的生长和产酸能力,培养4 h后进入对数生长期,16 h后达到稳定期,培养28 h的菌液pH值为4.43;对低pH值、胆盐、胃液和肠液环境具有耐受能力;该分离菌对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素耐药;其培养上清液对金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌具有极强的抑制作用;该分离菌对Caco-2细胞的黏附数量为43.5 cfu/个,具有一定黏附性。说明分离菌NCO具有优良的生物学特性,有潜力作为优良微生态制剂的候选菌株。

饲料中添加益生菌对鲤鱼生长性能、消化酶、抗氧化能力和非特异性免疫的影响

为探究益生菌对鲤鱼生长性能、消化酶、抗氧化能力和非特异性免疫的影响,选取120尾健康鲤鱼,随机分为4组(P0、P1、P2、P3组),每组3个重复,每个重复10尾鲤鱼,试验为期42 d。P0组为对照组,投喂基础饲料;P1、P2和P3组添加益生菌,分别投喂含1×108CFU/g枯草芽孢杆菌、1×108CFU/g乳酸乳球菌、2×108CFU/g枯草芽孢杆菌与乳酸乳球菌复合的饲料,试验结束时称重,并采集血液、肠道和头肾样本进行相关指标测定。结果显示:4组鲤鱼存活率(SGR)均为100%,添加益生菌的鲤鱼组增重率(WGR)高于对照组,但未达到显著水平(P> 0.05);试验组鲤鱼肠道消化酶活性(PTS、ASM和LIP)均有不同程度变化,其中P3组的PTS与对照组相比,活性极显著升高(P <0.01),P2组的PTS活性显著性升高(P <0.05);试验组的鲤鱼肝脏和头肾抗氧化指标(SOD、CAT和GSH-Px)活性均有不同程度的提高,其中P2组肝脏SOD活性、P3组头肾SOD活性和P1组头肾GSH-Px活性均显著高于对照组(P <0.05);益生菌添加组的鲤鱼血清LZM活性和IgM含量有一定程度的增加(除P1组LZM外),其中P3组血清IgM含量显著高于对照组(P <0.05)。综上,添加益生菌在不同程度上可促进鲤鱼生长,提高鲤鱼肠道消化酶活性、抗氧化能力和非特异性免疫功能。

鞭毛蛋白诱导表达差异基因的分析

试验旨在分析鞭毛蛋白刺激机体基因表达谱的特征,揭示鞭毛蛋白佐剂的作用机制。从GEO数据库筛选目标微阵列GSE46421和GSE72016及其差异表达基因(DEGs),经DAVID分析DEGs参与的GO功能注释和KEGG信号通路、String构建DEGs的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、Cytoscape可视化PPI网络并筛选高连通度的PPI子模块和hub基因。结果显示,共筛选出182个DEGs,包含上调基因161个、下调基因121个。DEGs参与GO生物过程主要有信号转导、免疫应答、炎症反应、细胞凋亡等,参与分子功能包含激酶激活、受体结合、细胞因子激活、膜信号转导。DEGs参与KEGG通路涵盖细胞因子-细胞因子受体相互作用、TNF信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等免疫相关途径。分析DEGs的PPI网络发现,2个重要的PPI子模块和10个关键基因(IL-10、IL-6、CCL2、CXCL2、NFKBIA、MyD88等)。研究表明,鞭毛蛋白通过识别TLR5和NOD样受体,触发MyD88依赖性和MyD88非依赖性途径发出信号,激活转录因子NF-κB,这些信号通过级联反应激活机体免疫系统、诱导机体产生多种细胞因子和趋化因子,发挥佐剂效应。

牛至油-青蒿素复方纳米乳制备及治疗鸡球虫病效果评价

制备牛至油-青蒿素复方纳米乳(OANE)并验证其治疗鸡球虫病的效果。自乳化法制备OANE,表征并考察其动力学、热力学稳定性;选取海兰褐蛋公雏400只,分为健康对照组、辅料对照组、感染组、OANE低剂量组、OANE中剂量组、OANE高剂量组、球虫散对照组和磺胺喹噁啉钠对照组8组。16日龄时,除A组外,其他各组均经口接种孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊(8×10^(4)个/只);感染后第5天,各组给予相应处理至第9天试验结束。以抗球虫指数(ACI)等综合评价治疗效果。结果显示,成功制备OANE,粒径分布、Zeta电位、稳定性等良好。试验期间,OANE中剂量组、高剂量组血便记分显著低于球虫散对照组(P<0.05),与磺胺喹噁啉钠对照组差异不显著(P>0.05);饲料转化率极显著高于感染组(P<0.01),与阴性对照组差异不显著(P>0.05);卵囊排出率显著低于感染组和鸡球虫散组(P<0.05或P<0.01),与磺胺喹噁啉钠组差异不显著(P>0.05),ACI达170以上;感染后第6天,血清丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平极显著低于(P<0.01)其余药物组,而总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)相当或显著高于阳性药物对照组(P>0.05或P<0.05)。说明OANE中剂量、高剂量治疗鸡球虫病效果良好。

1株鲤鱼源植物乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源,采用MRS培养基进行菌株分离纯化,经16S rRNA测序鉴定后,对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌,将其命名为YY001,该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色,革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌;4 h后进入对数期生长,12 h后生长达到稳定期;具有较强的产酸能力,产酸曲线显示,0~12 h pH迅速下降,培养16 h的菌液pH达3.8;在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性;该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果,且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著,抑菌圈直径达34.19 mm;药物敏感性试验结果显示,分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药;每天一次连续1周灌胃10^(8)CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性,可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株,为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。