隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1信号通路的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA/ROCK1信号通路的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法将雄性新西兰大耳白兔随机分为空白组和手术组,手术组采用高脂饲料喂养联合腹主动脉球囊损伤法建立AS易损斑块兔模型。将成模兔随机分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组和抑制剂组,分别给予相应干预,连续8周。ELISA检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白(APO)-A、APO-B含量,HE染色观察腹主动脉血管损伤程度,Western blot检测腹主动脉组织Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)蛋白表达,RT-PCR检测腹主动脉组织RhoA和ROCK1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组兔血清TC、TG、LDL-C、APO-B含量显著增加,HDL-C、APO-A含量显著减少(P<0.01);腹主动脉内膜增厚,有斑块形成,斑块内可见多处出血,纤维帽薄,管腔狭窄,管腔内可见血栓;腹主动脉组织RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和西药组兔血清TC、TG、LDL-C、APO-B含量显著减少,HDL-C、APO-A含量显著增加(P<0.01,P<0.05);HE染色显示,直接灸组兔血管损伤程度未改善,隔药饼灸组和西药组兔血管中膜损伤程度稍减轻,3组均未见血栓形成,斑块稳定性较模型组增加;腹主动脉组织RhoA和ROCK1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论隔药饼灸能稳定AS易损斑块,其机制可能与抑制RhoA/ROCK1信号通路有关。

RhoA/ROCK-p38/ERK通路参与血管平滑肌表型转换与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种以动脉内膜斑块为特征的血管类疾病。据统计,AS是导致我国严重心血管疾病的常见病理因素之一[1]。对于AS的发病机制,动脉内膜内皮细胞损伤是导致AS的始动环节,因此对与内皮细胞相关物质参与AS机制的研究较多。而研究发现AS与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型变化亦存在密切关系[2]。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉TNF-α、p38MAPK及eNOS蛋白表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法将58只普通级新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组和西药组。通过高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤术+基因转染+触发斑块破裂建立AS易损斑块兔模型。直接灸组和隔药饼灸组分别直接灸及隔药饼灸“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”或双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,每日1次,连续8周。ELISA检测兔血清载脂蛋白A(apo-A)、载脂蛋白B(apo-B)含量,透射电镜观察腹主动脉超微结构,免疫组化法检测腹主动脉组织TNF-α、p38MAPK、eNOS蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔血清apo-A含量显著减少(P<0.01),apo-B含量显著增加(P<0.01),腹主动脉血管壁严重破坏,有大量泡沫细胞聚集和脂滴沉积,TNF-α、p38MAPK蛋白表达显著升高(Ρ<0.01),eNOS蛋白表达显著降低(Ρ<0.01);与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和西药组兔血清apo-A含量显著增加(P<0.05,P<0.01),apo-B含量显著减少(P<0.05,P<0.01),直接灸组兔腹主动脉内皮细胞损伤,脂滴散在分布于泡沫池中,隔药饼灸组及西药组兔腹主动脉内皮细胞损伤程度较轻,各干预组兔腹主动脉组织TNF-α、p38MAPK蛋白表达均显著降低(Ρ<0.05,Ρ<0.01),eNOS蛋白表达显著升高(Ρ<0.05,Ρ<0.01);与直接灸组比较,隔药饼灸组兔血清apo-B含量显减少(P<0.01),腹主动脉组织TNF-α蛋白表达显著降低(Ρ<0.05),eNOS蛋白表达显著升高(Ρ<0.05,Ρ<0.01);与西药组比较,隔药饼灸组兔血清apo-B含量明显减少(P<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制TNF-α、p38MAPK蛋白表达,促进eNOS蛋白表达,保护血管内皮功能,稳定AS易损斑块。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1信号通路及PI3K、Akt、mTOR表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔腹主动脉RhoA/ROCK1信号通路及PI3K、Akt、mTOR蛋白表达的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法70只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组、西药组和抑制剂组。采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发斑块破裂制备AS易损斑块模型。各组分别给予相应干预,连续8周。采用ELISA检测血清载脂蛋白A(APO-A)、载脂蛋白B(APO-B)含量,HE染色观察腹主动脉内膜、中膜增生情况并测量内膜、内膜-中膜厚度,免疫组化染色检测Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho同源物相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)蛋白表达,Western blot检测腹主动脉磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔血清APO-A含量显著减少(P<0.01),APO-B含量显著增加(P<0.01),内膜、内膜-中膜厚度增加,腹主动脉RhoA、ROCK1、PI3K、Akt、mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,隔药饼灸组兔血清APO-A含量显著增加(P<0.01),APO-B含量显著减少(P<0.01),内膜、内膜-中膜厚度减少,腹主动脉RhoA、ROCK1、Akt、mTOR蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与直接灸组比较,隔药饼灸组兔血清APO-B含量显著减少(P<0.01);与隔药饼灸组比较,抑制剂组兔腹主动脉PI3K蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制RhoA/ROCK1信号通路,降低Akt、mTOR蛋白表达,促进细胞自噬,稳定AS易损斑块。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响,探讨其稳定AS易损斑块可能的作用机制。方法70只新西兰大耳白兔随机分为空白组(10只)和手术组(60只),采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发建立AS易损斑块兔模型。将手术组兔随机分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组和抑制剂组,直接灸组和隔药饼灸组取“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”和双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,2组穴位隔日交替施灸,西药组予阿托伐他汀1.96 mg/(kg·d)口服,抑制剂组耳缘静脉注射盐酸法舒地尔10 mg/(kg·d),空白组和模型组只捆绑不干预,连续8周。ELISA检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色观察兔腹主动脉内膜和中膜形态,免疫组化染色检测腹主动脉Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho相关卷曲形成蛋白激酶1(ROCK1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,天狼猩红染色测定胶原纤维含量。结果与空白组比较,模型组兔血清HDL-C含量显著减少(P<0.01),LDL-C含量显著增加(P<0.01);腹主动脉结构紊乱,内膜增厚;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01),胶原纤维含量显著减少(P<0.01)。与模型组比较,隔药饼灸组兔血清HDL-C含量显著增加(P<0.05),LDL-C含量显著减少(P<0.01);斑块中细胞形态较模型组更为完整,内膜、中膜界限明显;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01),胶原纤维含量显著增加(P<0.01)。结论隔药饼灸可调节AS易损斑块兔HDL-C、LDL-C含量,稳定易损斑块,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路、增加胶原纤维含量,进而增加纤维帽厚度有关。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔Beclin1、LC3蛋白表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔Beclin1、LC3蛋白表达的影响,探究隔药饼灸稳定AS易损斑块的作用机制。方法将58只雄性新西兰大耳白兔随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组和西药组。采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发斑块破裂制备AS易损斑块兔模型,分别予相应干预8周。采用ELISA检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量,透射电镜观察腹主动脉超微结构及自噬体形成情况,Westernblot检测腹主动脉Beclin1、LC3蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔血清TC、TG含量显著增加,腹主动脉组织Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,隔药饼灸组和西药组兔血清TC和TG含量显著减少(P<0.01,P<0.05),腹主动脉组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P<0.01,P<0.05);与直接灸组比较,西药组兔腹主动脉组织Beclin1蛋白表达显著降低(P<0.01)。透射电镜结果显示,模型组兔腹主动脉泡沫细胞增多,核膜、细胞器严重损伤,未见自噬体形成;直接灸组、隔药饼灸组兔腹主动脉泡沫细胞增多,核膜边界不清,细胞器损坏程度未见明显改变,可见自噬体形成;西药组兔腹主动脉泡沫细细胞损伤程度减轻,部分细胞器及胶原纤维保留,未见自噬体形成。结论隔药饼灸可能通过上调Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,提高细胞自噬水平,促进自噬体形成,稳定AS易损斑块。

RhoA/ROCK信号通路与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化是一种常见的全身性血管疾病,同时也是多种急性心血管疾病的病理基础。而急性心血管疾病的死亡率高,严重危害人们的生命健康。近年来,越来越多的研究表明RhoA/ROCK信号通路与动脉粥样硬化的形成有密切联系。抑制RhoA/ROCK信号通路可以通过稳定血管内皮功能、抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移、抑制血管钙化、调控炎症细胞聚集以及抑制血小板增殖变形来延缓或抑制动脉粥样硬化的形成。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉平滑肌表型转换的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉平滑肌表型转换的影响,探讨隔药饼灸稳定易损斑块的可能效应机制。方法将58只新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组。除空白组外各组高脂饲料喂养、腹主动脉球囊损伤术、基因转染及药物触发方法建立腹主动脉粥样硬化易损斑块模型。各组采取相应干预措施。采用ELISA法检测兔血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量;HE染色观察兔腹主动脉血管结构;免疫组化法检测兔腹主动脉细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的阳性表达。结果与空白组比较,模型组血清TC、TG升高(P<0.01);与模型组比较,三组血清TC、TG降低(P<0.05或P<0.01);三组间无差异。与空白组比较,模型组ERK1/2平均光密度值升高(P<0.01);与模型组比较,三组ERK1/2平均光密度值降低(P<0.05);三组间无差异。与空白组比较,模型组α-SMA平均光密度值降低(P<0.05);与模型组比较,隔药饼灸组及西药组α-SMA平均光密度值升高(P<0.05);三组间无差异。结论隔药饼灸可稳定动脉粥样硬化易损斑块模型兔易损斑块,其机制可能与抑制血管平滑肌表型转换有关。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块模型兔腹主动脉RhoA/Rock信号通路的影响

目的探讨隔药饼灸稳定动脉粥样硬化(AS)易损斑块的可能作用机制。方法将50只新西兰兔随机分为空白组8只,模型组9只,直接灸组9只,隔药饼灸组7只,阿托伐他汀钙组9只,抑制剂组8只。除空白组外,其余各组通过"高脂饲养喂养+腹主动脉球囊损伤术+基因转染+触发斑块破裂"制作AS易损斑块兔模型。空白组、模型组不予操作;阿托伐他汀钙组给予阿托伐他汀钙片1.96 mg/(kg·d)喂养;抑制剂组予盐酸法舒地尔10 mg/(kg·d)沿耳缘静脉缓慢注射;直接灸组及隔药饼灸组分别直接灸及隔药饼灸,穴选Ⅰ组("巨阙"及双侧"天枢""丰隆")或Ⅱ组(双侧"心俞""肝俞""脾俞"),每日一组交替使用,每穴连续灸3壮。各组干预时间均为8周。13周实验结束后采用ELISA法测定血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL),并计算HDL/LDL;HE染色观察腹主动脉斑块组织结构,测量血管内膜厚度、内膜-中膜厚度(IMT);免疫组化法观察腹主动脉Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Ras同源物相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rock)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)的抗原活性。结果与空白组比较,模型组实验兔血清TC、TG、LDL含量显著升高,HDL含量及HDL/LDL值显著降低,腹主动脉血管内膜厚度及IMT显著增加,腹主动脉中RhoA、RocK、TLR4、NF-κB灰度值显著升高(Ρ<0.01)。与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组、阿托伐他汀钙组TC、TG、LDL明显降低,HDL含量及HDL/LDL值明显升高,内膜厚度、IMT、RhoA、RocK、TLR4、NF-κB灰度值明显下降(P<0.05或P<0.01)。与直接灸组比较,隔药饼灸组与阿托伐他汀钙组NF-κB灰度值降低(Ρ<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制RhoA/RocK信号通路下调TLR4、NF-κB表达,从而保护血管内皮功能、稳定AS易损斑块。

隔药饼灸保护动脉粥样硬化血管内皮功能的机制研究进展

血管内皮功能障碍是动脉粥样硬化(AS)的始动环节,并参与其各个阶段的进展,从起始到斑块、血栓形成都起着关键作用。近年来临床研究发现隔药饼灸具有保护血管内皮功能、减轻AS、稳定易损斑块的作用。鉴于其机制尚未明确,因而从作用机制及隔药饼灸应用等方面进行概述,归纳总结隔药饼灸保护AS血管内皮功能的最新机制研究成果,为深入研究提供参考。