α-三联噻吩致斜纹夜蛾SL细胞氧化损伤的研究

【目的】研究光敏剂α-三联噻吩（α-terthienyl，α-T）对斜纹夜蛾（Spodoptera litura，SL）细胞的毒杀活性及其机理。【方法】MTT法测定α-T对离体培养的SL细胞的细胞毒力，并与鱼藤酮进行比较。用硫代巴比妥酸（TBA）法测定细胞内丙二醛（MDA）的生成量，5，5′-二硫代双-（2-硝基）苯甲酸（DTNB）法测定细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的相对含量，通过透射电子显微镜观察α-T对SL生物膜及细胞器的影响。【结果】光活化后的α-T对SL细胞48h的IC50值为0.21μg·ml-1，而鱼藤酮为12.25μg·ml-1。同时发现α-T光照处理后细胞内MDA生成量与药剂浓度呈正相关，表明细胞受到α-T的氧化损伤，而GSH相对含量与α-T浓度呈负相关。透射电镜显示，α-T光照处理后SL细胞膜和核膜缺损、肿胀，内容物外泻，胞内出现不明深色颗粒，线粒体膨大，膜和亚细胞器结构受到严重破坏。【结论】SL细胞受到α-T的氧化损伤后，MDA生成量显著增加，GSH含量下降，细胞的抗氧化能力减弱，透射电镜结果显示SL细胞在α-T的试验剂量下受到了严重的氧化损伤。

印楝素A对粉纹夜蛾Hi-5细胞的毒性机理

利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni Hbner卵细胞系（Hi-5细胞系）在细胞水平研究了印楝素（azadirachtin）A杀卵活性的毒性机理。以MTT法研究了印楝素A对粉纹夜蛾Hi-5细胞的生长抑制率,结果表明最初两天印楝素A对Hi-5细胞无较明显活性,但随后几天抑制率显著增加。用Giemsa染色法对细胞进行染色,观察细胞形态发生的变化,发现：1.25μg/mL印楝素A处理Hi-5细胞1d后,细胞已无法贴壁,形状变圆,接着细胞形态变得极不规则,有凋亡小体出现。用Ho33342染料对Hi-5细胞核DNA染色,通过荧光显微镜观察发现：经印楝素A处理后第1天,部分细胞核染色体发生异常凝聚,此后异常细胞核比例增多,核膜严重破损。以异硫氰酸荧光素（FITC）荧光染料研究了Hi-5细胞的蛋白质含量变化,发现1.25μg/mL印楝素A处理Hi-5细胞1d后,细胞蛋白质指数（DI）为1.070±0.018,至第3dDI值上升到1.912±0.019。分析了印楝素A处理后Hi-5的还原性谷胱甘肽（GSH）的相对含量变化,发现1.25μg/mL处理浓度下,各天处理组GSH抑制率有显著差异。结果显示印楝素A能够抑制Hi-5细胞增殖,影响细胞骨架正常功能,降低细胞活力。

血啉甲醚对斜纹夜蛾SL细胞的氧化损伤

通过研究血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）对斜纹夜蛾Spodoptera litura（SL）细胞的增殖抑制率IC50、处理后细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）的生成量、细胞内还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平和细胞器超微结构的变化,明确血啉甲醚对SL细胞的氧化损伤,并探讨将血啉甲醚及其衍生物拓展应用到农业害虫防治领域的可行性。用MTT法测定血啉甲醚光照处理下对SL细胞24h和48h的IC50值分别为8.35μg/mL和7.66μg/mL。硫代巴比妥酸（TBA）法测定表明,血啉甲醚光活化后能导致胞内MDA含量明显升高,且MDA的生成量与其浓度呈正相关;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,光照处理48h时,细胞内MDA生成量达到173.08±3.51nmol/L。5,5′-二硫代双-（2-硝基）苯甲酸（DTNB）法对处理后细胞内GSH水平测定结果表明,光活化后的血啉甲醚处理SL细胞能导致细胞内还原型GSH相对含量随血啉甲醚浓度升高而显著降低;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,处理48h时,光照处理组细胞内GSH相对含量较之同浓度黑暗处理下降了39.59%。扫描电镜观察显示,6.250μg/mL的HMME处理细胞并光照后,细胞膜表面出现了明显的孔洞,有的细胞出现了花样皱褶和内陷。这些结果表明在血啉甲醚的试验剂量下,SL细胞受到了氧化损伤。

芳基丁二炔类化合物的合成与光活化杀虫活性

通过钯催化偶联-消去反应合成了芳基端炔，随后通过Glazer反应合成了7个对称性芳基丁二炔，并就各化合物的杀虫活性进行了研究．结果表明，各化合物对白纹伊蚊表现出光活化杀虫活性．1，4-二噻吩-2-基丁二炔的活性最高，供试最低质量浓度下（1μg/mL）死亡率为100％．而6个取代苯基T-炔在100μg／mL下表现出一定的活性，但在1和10μg／mL下几乎无活性．化合物的芳基中，噻吩环比苯环具有更高的活性，而随着苯环上取代基的延长，活性有下降的趋势．