N-乙酰-D-半乳糖胺修饰头孢克洛-壳聚糖纳米乳的制备及释药性能研究

采用低能乳化法制备了N-乙酰-D-半乳糖胺修饰头孢克洛-壳聚糖纳米乳,测定了纳米乳的粒径和Zeta电位,通过比较纳米乳和头孢克洛混悬液的累积释药率、考察释放介质和乳化剂用量对纳米乳累积释药率的影响初步研究了其释药性能。结果表明,纳米乳的粒径在60~250 nm范围内,Zeta电位为(3.63±0.32)mV;相较于头孢克洛混悬液,纳米乳的释药性能更优,但纳米乳不适合在偏碱性环境(pH≥7.3)中释药;在3~8 g范围内,随着乳化剂用量的增加,纳米乳的累积释药率逐渐升高,当乳化剂用量为8 g时,24 h累积释药率最高达到72.43%;纳米乳的释药行为符合一级释药模型。

基于高内相乳液模板法构筑的超疏水多孔泡沫

工业含油废水的排放和海洋溢油事故的发生导致水体区域环境遭到了严重破坏,为了实现高效且低成本的油水分离,本研究利用高内相乳液模板法构筑了一种超疏水多孔泡沫。利用扫描电子显微镜、压泵仪、傅里叶变换红外光谱、X射线光电子能谱对材料的物理、化学结构进行了表征,测试了材料的润湿性:水接触角达146.8°,水滚动角为6°,油接触角几乎为0°,显示出超疏水-超亲油特性,且材料的润湿性可通过调整单体之间的配比进行调控。材料对不同类型的油或有机试剂,吸收倍率在30.17~76.65g/g,显示出优异的吸油能力。材料能有效清理水面浮油和水下重油,并可循环利用,经历10次吸附-脱附实验后,油品的回收效率依然维持在90%左右。进一步研究了材料对油品的吸附过程,结果表明,其对柴油和乙醇的吸附过程更符合伪一阶吸附动力学模型(R^(2)>0.99)。综上表明,该材料是一种吸油倍率高、油回收效率良好且可重复利用的超疏水-超亲油多孔材料,在油水分离领域具有广阔的应用前景。

赤魟组织粗提物的抗肿瘤作用

采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检查赤魟三种组织(皮肤、软组织和软骨)粗提物对体外培养的人癌细胞生长的影响,用腹腔注射或灌胃法检查赤魟三种组织粗提物对小鼠移植性肉瘤180(S180)和肝癌(H22)生长的影响。结果表明,赤魟组织粗提物对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响,赤魟组织粗提物无论腹腔注射还是灌胃均显著抑制小鼠肉瘤和小鼠肝癌的生长,且对体重无明显影响;当三种组织粗提物以500mg/kg/d(相当生药量,下同)的剂量连续腹腔注射(ip)15d时,对S180的抑制率分别为63.9%、47.2%和80.3%;以3500mg/kg/d连续灌胃(ig)15d时,对S180的抑制率分别为66.9%、61.5%和66.9%;以500mg/kg/d连续腹腔注射15d时,对H22的抑制率分别为43.3%、43.3%和80.4%。

从赤魟组织中分离到的福安肽的抗血管生成作用

目的研究从赤魟组织中分离到的福安肽(FAT)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成、人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成和小鼠肝癌组织血管生成的影响。方法用CAM法检测FAT对CAM血管生成和CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成的影响;用免疫组化法检查FAT对小鼠肝癌组织内微血管密度(MVD)的影响。结果FAT显著抑制CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×3时,其抑制率分别为30.8%,50.1%,64.0%;CNE-2Z细胞明显诱导CAM血管生成,当CNE-2Z细胞的接种量为1.9×106细胞/胚时,其血管生成诱导率为30.1%;FAT明显抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×4时,其抑制率分别为35.8%,43.1%,51.3%。FAT明显降低小鼠肝癌组织的MVD,FAT平均微血管数为(8.2±1.3)与对照组的(21.3±2.8)相比,差异显著(P<0.05)。结论FAT有显著的抗血管生成作用,这可能是其抑制小鼠肿瘤生长的重要原因。

福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响

应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。

土贝母皂苷诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和细胞凋亡

【摘要】背景和目的:土贝母皂苷是由传统中药土贝母块茎中分离得到的,由土贝母苷甲(79%)和土贝母苷乙(21%)组成。本研究旨在探讨土贝母皂苷抗肿瘤作用的机制。方法:MTT法检测土贝母皂苷对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA电泳图谱的变化。结果:土贝母皂苷对人宫颈癌HeLa细胞的生长具有强抑制作用,且这种作用呈时间剂量依赖关系,处理24、48和72h的IC50值分别为20.0、18.8和8.8μmol/L。流式细胞术分析显示,15、30、35μmol/L土贝母皂苷处理5h,HeLa细胞G2/M期细胞数从9.80%分别增加到21.90%、25.92%和27.00%;处理12h,G2/M期细胞数增加更显著,从8.20%分别增加到21.40%、31.15%和34.55%。40μmol/L土贝母皂苷处理一定时间,形态学检查发现细胞核明显皱缩、核染色质凝集边聚等特征,流式细胞术检测发现凋亡峰,DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯形条带。结论:土贝母皂苷使细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡可能在其抗肿瘤作用中具有重要意义。

土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡(英文)

目的 :研究土贝母苷甲 (下称苷甲 )抗肿瘤作用的机制 ,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞术 ,光学、荧光和电子显微镜 ,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响 ;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2和bax表达的变化。结果 :苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用 ,其 2 4、4 8和 72h的IC50 值分别为 35 .7,2 3.6 ,17.4 μmol·L-1。在苷甲的作用下 ,细胞周期阻滞在G2 M期 ,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl 2下调 ,bax过表达。结论 :苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用 ,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl 2的下调及bax的过表达密切相关。

从赤组织中分离到的福安肽的抗肿瘤活性的初步研究

目的研究从赤组织中分离到的福安肽(Fuantai,FAT)的抗肿瘤活性及对促血管生成因子表达的影响。方法MTT法检测FAT对体外培养的人癌细胞生长的影响;小鼠移植性肝癌(H22)模型用于检查FAT对肿瘤生长的影响;免疫组化法检查福安肽对癌组织促血管生成因子表达的影响。结果FAT对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响;FAT无论腹腔注射还是灌胃都显著抑制小鼠移植性肝癌的生长,且对小鼠体重增长无明显影响。当FAT的用量为50.0 mg/(kg.d)(ip或ig)共21 d对H22的抑制率分别为67.5%和84.0%。免疫组化检测结果显示,FAT明显下调小鼠肝癌组织血管内皮细胞生长因子,碱性成纤维细胞因子和血小板衍生生长因子的表达。结论FAT的抗肿瘤活性可能与其抑制肿瘤血管生成有关。

福安泰-03对肿瘤血管生成的抑制作用

目的研究从赤魟组织中分离到的福安泰-03(Fuan-tai-03,FAT-03)对肿瘤血管生成的影响。方法鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法检测FAT-03对人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检查FAT-03对裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(MVD)和血管生成因子表达的影响。结果FAT-03抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为20、40、80、160μg/胚/d×5时,其抑制率分别为22.3%、34.3%、43.3%、46.2%。FAT-03降低小鼠Lewis肺癌组织的MVD,FAT-03组平均微血管数为9.1±1.5(对照组为18.2±3.2,P<0.05)。免疫组化检测结果显示,FAT-03明显下调小鼠Lewis肺癌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)的表达。结论FAT-03有抗肿瘤血管生成作用,其作用与它的下调VEGF、bFGF和PDGF的表达密切相关。

一种新的源自赤的强血管生成抑制剂福安泰-03的分离和鉴定

从赤软骨和去皮的软组织中分离并鉴定了一种新的强血管生成抑制剂福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03).利用组织匀浆、盐析、离子交换层析、疏水层析和反向层析等方法进行分离和纯化.鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验检测FAT-03对血管生成的影响.SDS-PAGE分析揭示,FAT-03为单一银染条带,分子量大约为43000.层析洗脱实验证实,这一分子量蛋白质具有强抗血管生成活性.FAT-03的纯度进一步因其独特的N末端氨基酸序列(PFGNTHNKWKLNYSAEQEFP)而肯定.每日20、40和80μgFAT-03给药组(每胚给药3d)对血管生成的抑制率分别为23.6%、33.1%和50.8%.本研究首次证实,赤产生上述强血管生成抑制剂.

中国枪乌贼墨汁提取物的抗肿瘤作用

目的:研究中国枪乌贼墨汁提取物(以下简称墨汁提取物)的抗肿瘤作用。方法:采用超声波处理、低温离心、过滤等方法制备墨汁提取物;台盼蓝染色法检测墨汁提取物对体外培养的人髓性白血病细胞(HL-60)、人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)和人子宫颈癌细胞(HeLa)生长的抑制作用;采用体内肿瘤实验技术研究墨汁提取物对小鼠移植性肉瘤180(S180)和肝癌(H22)生长的影响;用常规方法进行墨汁提取物的急性毒性试验。结果:提取物对HL-60,CNE-2Z和HeLa细胞都有明显的抑制效果,3种细胞中以HL-60细胞最敏感;墨汁提取物腹腔注射1.2g·kg-1和灌胃2.4g·kg-1共15d对S180的抑制率分别为70.8%和69.2%,对H22的抑制率分别为71.0%和58.0%;LD50测不出,最大耐受量>48g·kg-1。结论:中国枪乌贼墨汁提取物在体内外都有显著的抗肿瘤作用,且无明显的急性毒性。

土贝母苷甲对人脐静脉内皮细胞凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响

研究了土贝母苷甲(下称苷甲)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响。包括:MTT法检测苷甲对HUVECs生长的影响;荧光显微镜观察苷甲作用下HUVECs的形态变化;流式细胞术分析苷甲对HUVECs周期及凋亡的影响;聚碳酸酯膜小室(Transwell model)趋化运动模型检测苷甲对HUVECs运动能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane,CAM)试验检测苷甲对人鼻咽癌细胞(human nasopharyngeal carcinomaCNE-2Zcells,CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检测苷甲对BALB/c裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)表达的影响。苷甲明显抑制HUVECs的生长,其抑制效果与剂量和作用时间相关,苷甲作用HUVECs24、48、72h其IC50值分别为24.2、21.4、17.9μmol/L;苷甲作用下HUVECs发生周期阻滞,呈现典型的凋亡特征,20.0μmol/L苷甲作用12、24、36hHUVECs的凋亡率分别为11.4%、20.8%、25.3%;20.0μmol/L苷甲处理HUVECs24h,对细胞迁移抑制率为58.4%;苷甲抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,并与剂量相关;苷甲应用后瘤组织MVD明显减少,VEGF、bFGF、PDGF表达下调。苷甲有明显的抑制血管生成活性,其抑制血管生成作用与诱导血管内皮细胞凋亡,抑制其运动能力,下调VEGF、bFGF和PDGF的表达有关。

阿魏酸钠的抗抑郁作用研究

阿魏酸，化学名3-甲氧基4-羟基桂皮酸-3-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-2-propenoicacid，是植物界普遍存在的一种酚酸，在植物中主要与细胞壁多糖和木质素交联构成细胞壁的一部分，是阿魏、当归、川芎等中药的有效成分之一。中国学者对阿魏酸及其钠盐进行了广泛深入的研究。笔者以前的研究结果表明，妊娠晚期母小鼠谷氨酸单钠（MSG）的过量应用导致其所产仔鼠发生一系列行为障碍。笔者最近的研究证实，阿魏酸钠对小鼠胎脑MSG的兴奋性毒性具有强保护作用。

正交试验法优选水杨酸滴丸的制备工艺

目的:考察影响水杨酸滴丸制备的因素,确立其最佳成型工艺。方法:考察环境因素、加热温度、基质配比与试验步骤对滴丸制备工艺的影响。以丸重差异、溶出时限及外观质量为综合评价指标,通过正交试验进一步优化滴丸的制备工艺。结果:基质单独加热熔化后再与药液在避光密封的条件下进行混合,可防止药液迅速氧化变红。滴丸的最佳制备工艺为:聚乙二醇400与聚乙二醇6000的比例为1∶5,药液温度为50℃,滴距为8 cm,滴制速度为70滴·min-1。结论:该工艺简单可行,制得滴丸的丸重差异、溶出时限及外观质量均符合质量要求。

壳聚糖止血微球的制备优化及表征

以壳聚糖为原料,采用乳化交联技术制备壳聚糖止血微球。在单因素实验结果的基础上,采用响应面法优化壳聚糖止血微球的制备条件,通过体外凝血法对其止血活性进行评价。结果表明,最优制备工艺条件为:壳聚糖浓度1.4%,壳聚糖分子量600 k Da和戊二醛与壳聚糖质量比1∶1。在此条件下,微球平均溶胀率为346.56%,与理论预测相当吻合;止血微球具有良好的外观形貌,分散性好;红外分析表明,壳聚糖止血微球已经成功地进行了化学交联,具有稳定的空间结构;壳聚糖微球具有显著的促凝血活性,呈现剂量相关性。将为开发新型壳聚糖高效止血材料奠定基础。

重组福安泰-03抑制人脐静脉血管内皮细胞的迁移和增殖

研究重组福安泰-03(recombinant Fuantai-03,rFAT-03)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移和增殖的影响.聚碳酸酯膜小室趋化运动模型(transwell model)检测rFAT-03对HUVECs迁移能力的影响;MTT法检测rFAT-03对HUVECs和多种人癌细胞生长的影响;荧光显微镜观察rFAT-03作用下HUVECs的形态变化;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-fluorescein isothiocyanate,annexinV-FITC)双染检测rFAT-03对HUVECs早期凋亡的影响;流式细胞术分析rFAT-03对HUVECs周期及凋亡的影响;Western印迹检查rFAT-03对HUVECs血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Bax和Bcl-2表达的影响.结果显示,rFAT-03明显抑制HUVECs细胞的迁移和增殖,其抑制效果与剂量和作用时间相关.0.20mg/mL恩度(endostar),0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用HUVECs24h,对细胞迁移的抑制率分别为32.0%、32.6%、57.1%(P<0.01).0.20mg/mL恩度,0.05、0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用HUVECs72h,其对细胞生长的抑制率分别为40.9%、63.7%、69.3%、87.0%.但rFAT-03对多种人癌细胞株的生长却无明显影响.rFAT-03处理HUVECs24h,细胞的早期凋亡率增加(P<0.05).rFAT-03阻滞HUVECs于G0/G1期,并呈现典型的凋亡峰.终浓度为0.05、0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用于HUVECs24h,G0/G1期细胞指数分别为63.4%、67.5%和75.7%(对照组为62.1%),凋亡指数分别为4.2%、8.5%和10.3%.rFAT-03下调HUVECs的VEGF和抑调亡基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因Bax的表达,其效果与剂量相关.结果提示,rFAT-03明显抑制HUVECs细胞的迁移和增殖,诱导其凋亡,它的这些作用与其下调VEGF、Bcl-2表达,上调Bax表达密切相关.

阿魏酸钠的镇静催眠作用

目的:研究阿魏酸钠对小鼠自主活动和睡眠的影响。方法:观察阿魏酸钠对小鼠自主活动的影响;观察阿魏酸钠对戊巴比妥钠诱导下小鼠入睡时间和睡眠持续时间的影响;观察阿魏酸钠对急性酒精中毒小鼠入睡时间及醒酒时间的影响。结果:阿魏酸钠对正常小鼠自主活动和谷氨酸单钠诱导的小鼠自主活动增加都有显著减少作用;阿魏酸钠显著延长戊巴比妥钠诱导下小鼠睡眠的持续时间;非常显著缩短急性酒精中毒小鼠的入睡时间和延长其睡眠持续时间。结论:阿魏酸钠具有镇静催眠作用。

福安肽-03的分离纯化及其一级结构解析

通过盐析、离子交换、凝胶过滤和疏水层析等分离纯化,同步进行抗血管生成和抗肿瘤生长检测,从赤魟(Dasyatis akajei)组织获得强抗血管生成成分福安肽-03(Fuantai-03,FAT-03)的纯品(纯度>95%);使用Edman降解法测定FAT-03 N-末端氨基酸组成和序列,RACE系统技术解析FAT-03的一级结构。结果表明:FAT-03明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成和BALB/c裸小鼠Lewis肺癌的生长及肝转移,且其效果与剂量相关。FAT-03分子的一级结构即其氨基酸组成和序列已被确定。

壳聚糖/海藻酸钠/活性肽复合膜的制备与性能研究

以壳聚糖和海藻酸钠高分子为基质原料,采用层层自组装技术形成聚电解质复合多层膜,并包裹深海鱼蛋白活性肽,考察复合膜的厚度、溶胀度、透气性、抗拉伸强度、累积释放度等基本性能。结果表明,制备复合膜的最佳条件为壳聚糖(分子量50kDa)与海藻酸钠的质量分数比2∶1。在此条件下,制备复合膜层数为7层时,其厚度为0.041mm、透气性63.96%、溶胀度为179.92%,断裂拉伸率为12.45%,3h累计释放度为11.58%,显示出优越的生物医用膜性能,这将为开发一种新型的生物创伤医用膜提供参考。