NtSKP1-GFP植物表达载体的构建及亚细胞定位

用PCR技术扩增NtSKP1基因的编码区,定向克隆至表达载体pCAMBIA1302上构建用于瞬时表达NtSKP1蛋白的重组质粒。重组质粒经PCR和测序鉴定后用冻融法转入农杆菌LBA4404,进而经农杆菌LBA4404介导转入烟草悬浮细胞,激光共聚焦显微镜观察确定其亚细胞定位。测序结果表明,插入片段与预期序列完全一致,与载体形成了一个完整的基因表达盒;亚细胞定位结果表明NtSKP1蛋白在胞浆和核部位均有分布。

壳寡糖诱导植物抗病性研究进展

壳寡糖是由2-10个氨基葡糖通过β-1,4-糖苷键连接而成的低聚糖,具有多种生物学活性。本文对壳寡糖诱导的植物抗病性及其诱导植物抗性机理进行了评述。

烟草SKP1基因cDNA的克隆分析及原核表达

应用DDRT-PCR法获得可被壳寡糖诱导的枯斑三生烟SKP1基因cDNA的3′端序列,通过5′RACE扩增该基因cDNA的5′端,进而扩增此基因cDNA的全长,通过同源性比较分析表明,与本塞姆氏烟草的SKP1基因同源性达81%,其cDNA全长653bp(GenBank登录号:AY702087),其中编码区位于73～540bp,编码一条155个氨基酸的多肽。经预测该多肽的分子量为17527.78Da,等电点为4.57,定位于细胞质,功能结构域分析结果显示在4～105位氨基酸有一明显的Skp1结构域,其E值为1.25e-52,因此推断该基因为枯斑三生烟的SKP1基因。将该基因编码区亚克隆到原核表达载体pET23b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达出与预测分子量一致的蛋白。为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

NtSKP1基因的RNAi载体构建及对烟草的转化

根据枯斑三生烟草SKP1基因(NtSKP1)的序列,设计二对分别含有特定酶切位点的特异引物,以重组质粒pMD18-SKP1为模板,分别扩增目的基因的正反向片段(约473 bp)。将反向目的片段插入中间载体pHANNIBAL内含子右侧,正向目的片段插入该载体内含子左侧,再经NotⅠ酶切回收约3 916 bp目的片段,插入到双元载体质粒pART27中,成功构建了含NtSKP1基因片段正反向重复序列的植物表达载体pART27-skp1sa。将pART27-skp1sa质粒导人根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得转基因烟草。

壳寡糖诱导的烟草SKP1基因表达

壳寡糖是一种高效的植物抗性诱导剂,应用mRNA差异显示技术从经过壳寡糖诱导的枯斑三生烟草叶片中分离到了编号为5、31、37和46的4个基因片段。4个基因片段与本塞姆氏烟草(Nicotianabenthamiana)SKP1基因的mRNA同源性都达到82%,据此推断这4个片段是感病烟草品种枯斑三生烟草的SKP1基因。质粒双酶切及反向Northern分析结果表明,该基因表达在壳寡糖诱导下增强。由于SKP1基因与植物的抗病毒病相关,从而在mRNA水平上验证了壳寡糖的诱导抗性效应。

丝状真菌胞外多糖的研究进展

丝状真菌胞外多糖是丝状真菌生长过程中代谢到细胞壁外的一种天然高分子聚合物,具有分子量大、结构复杂多样等特点。从丝状真菌胞外多糖的分离纯化、结构表征及其抑菌抗氧化等生物活性方面进行综述,以期为丝状真菌胞外多糖的深入研究、开发和应用提供参考。

用螠蛏贝壳制备乳酸菌富集钙的工艺

为了充分利用螠蛏贝壳资源开发新型生态补钙制剂,用两种乳酸菌发酵螠蛏贝壳粉,以发酵结束后乳酸菌的活菌数和游离钙转化率为指标,优选出最佳发酵工艺。研究结果表明,最佳发酵条件为300目粒度的螠蛏贝壳粉15%,蔗糖8%,1∶1混合的保加利亚杆菌和嗜热链球菌接种量7%,发酵30 h。

风味紫菜饮料的研制

紫菜具有很高的营养价值和多种生物活性。为研制风味紫菜饮料,以干紫菜为主要原料,通过设计正交试验优化出紫菜的浸提条件和紫菜汁与柠檬汁及蔗糖的配比,并对产品的理化指标、感官指标等指标进行检测。试验结果表明,浸提条件为加入40倍于紫菜的水在pH5和温度为25℃条件下浸提8h;最佳配方是白砂糖5%,柠檬汁与紫菜汁比例为1∶3。理化指标检测结果表明该饮料碘含量为2.92mg/100g,氨基酸含量为14.5mg/100g,含糖量8.9%。

烟草SKP1基因的原核表达

为获取大量高纯度的枯斑三生烟SKP1蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-SKP1质粒为模板,PCR扩增枯斑三生烟的SKP1基因的cDNA编码区,经酶切后构建表达载体pET23b-SKP1,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并考察不同的IPTG诱导终浓度、表达时间和表达温度对目的蛋白His-SKP1表达量的影响。SDS-PAGE分析结果表明:最佳表达条件为不加诱导剂的情况下,37℃表达8 h。

NtSKP1基因的反义载体构建及转基因烟草的产生

根据枯斑三生烟SKP1基因(NtSKP1)的序列,设计一对分别含有特定酶切位点的特异引物,以重组质粒pMD18-SKP1为模板,扩增目的基因(约473bp)片段。将反向目的片段插入中间载体pHANNIBAL的内含子右侧,再经NotⅠ酶切回收约3443bp的目的片段,插入到双元载体质粒pART27中,成功构建了含NtSKP1基因片段反向序列的植物表达载体pART27-skp1a,其转录产物能减弱目的基因的表达。将pART27-skp1a质粒导人根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得转基因烟草。

海带内生芽胞杆菌DNN7和HSN2胞外蛋白抗肿瘤活性初步研究

为检测海带内生芽胞杆菌DNN7和HSN2胞外蛋白的抗肿瘤活性,用0.22μm滤膜过滤将海带内生芽胞杆菌DNN7和HSN2的菌体和发酵液分开,用硫酸铵沉淀发酵液的蛋白组分并用SDS-PAGE检测,用海虾毒性法和MTT法检测胞外蛋白的抗肿瘤活性。结果表明,海带内生芽胞杆菌DNN7的粗蛋白主要由分子量约为66×103、52×103和34×103的3条带组成,HSN2的粗蛋白主要由分子量约为44×103和52×103的2条带组成。DNN7胞外蛋白对体外慢性粒细胞白血病癌细胞K562、肝肿瘤细胞HepG2和乳腺癌细胞MDA-MB-231均具有较好的抑制活性,其抑制率分别高达96.46%、42.99%和85.70%;HSN2胞外蛋白对体外慢性粒细胞白血病癌细胞K562、肝肿瘤细胞HepG2和乳腺癌细胞MDA-MB-231也具有较好的抑制活性,其抑制率分别为92.65%、66.80%、88.48%。

多粘类芽孢杆菌的研究进展

多粘类芽孢杆菌对人和动植物无致病性,同时具有诱导植物抗性、抗病毒和抗肿瘤等作用。该研究对多粘类芽孢杆菌菌株来源及其生物活性的应用研究进展进行综述。

地衣芽胞杆菌生物活性物质应用研究进展

地衣芽胞杆菌是一种常见革兰氏阳性菌,具有耐热、酶系丰富、产酶量高和安全等优良特性,同时在代谢过程中还可产生多种活性物质,例如多糖、脂肽类生物表面活性剂、杆菌肽及小分子等活性物质。本文对地衣芽胞杆菌的活性物质及其生物活性的应用研究进展进行概括,并且对其通过基因工程手段开发新型菌种的发展方向进行了展望,以期为地衣芽胞杆菌的利用提供参考。

螠蛏的营养及活性成分研究进展

螠蛏作为一种海洋双贝壳类软体动物具有较高的营养价值和许多功能性成分。这些活性物质成为了功能性食品、保健品等的开发热点。对螠蛏的营养和功能性成分的研究现状及其前景进行概述。

海带内生菌DNN6蛋白对小黄鱼保鲜作用的研究

为了探究海带内生菌DNN6蛋白对水产品保鲜的效果,本文利用250μg/mL和500μg/mL的该蛋白对小黄鱼冷藏保鲜效果进行研究,以感官评分、细菌总数(TVC)、pH、挥发性盐基氮(TVB-N)和硫代巴比妥酸(TBA)等为鲜度指标来测定小黄鱼在冷藏过程中各种品质的变化。结果表明,在4℃冷藏条件下,当海带内生菌DNN6蛋白浓度为500μg/mL时,具有良好的抑菌效果,明显抑制细菌的生长繁殖,延缓挥发性盐基氮和TBA值的上升,延缓了小黄鱼的腐败。因此,海带内生菌DNN6蛋白在水产品保鲜领域具有一定应用前景。

乳牙托槽在矫治乳牙反(牙合)中的应用

乳牙反(牙合)是临床上最常见的牙颌畸形之一.绝大多数学者主张在乳牙期给予矫治.在以往文献报道中,大多数反(牙合)矫治采用活动矫治器,也有报告采用下颌斜面导板矫治器;活动矫治器联合面部正中前牵引矫治和单纯头帽-颏兜矫治装置等,均取得了不同程度的疗效.我们报告的15例乳牙反(牙合)病例,均使用特制的乳牙托槽,应用固定矫治技术配合面部前方牵引进行矫治,疗程短,固位佳,效果好.

C语言教学中多媒体与板书设计的有机结合

本文对当前C语言教学中板书设计的地位与作用被弱化和忽略的现象进行探讨,研究C语言教学中多媒体教学资源和板书设计应该如何有机结合,并提出多媒体教学环境下C语言教学的板书设计原则。

海带内生菌HSN2胞外蛋白对粉红单端孢霉的影响

HSN2是分离自海带的具有抑菌活性的内生细菌,其蛋白具有抑菌活性。为确定该胞外蛋白对粉红单端孢霉的抑制效果,采用体外拮抗法检测其对粉红单端孢霉菌丝生长和孢子萌发的影响,并研究在苹果伤口中注入的蛋白对粉红单端孢霉的抑制作用和预防效果。结果表明:HSN2胞外蛋白对粉红单端孢霉菌丝生长和孢子萌发具有抑制效果;苹果体内研究表明,HSN2胞外蛋白浓度越大,伤口腐烂直径越小,浓度达1 000μg/m L时,对粉红单端孢霉引起的腐烂抑制效果最佳;越早接入胞外蛋白的苹果,其腐烂程度越小。该试验结果为将HSN2胞外蛋白开发为新型抗菌剂提供了试验依据。

海胆及其共附微生物的活性物质研究进展

海胆是一种不可多得的的海珍品,其不仅具有较高的营养价值和食用价值,而且具有极高的药用价值,这些药用价值主要是由于其含有的一些活性物质所致。对海胆及其共附微生物的活性物质及其生物活性研究进展进行综述。

海参及其共附生微生物的生物活性研究进展

海参(sea cucumber)具有多种生物活性物质,与其共附生的微生物也是一种潜在的资源。对海参及其共附生微生物的生物活性研究进展进行综述。