表达猪流行性腹泻病毒变异株S基因重组伪狂犬病病毒的构建与鉴定

为研制预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株感染的重组伪狂犬病病毒(PRV)活载体疫苗,本研究应用PRV变异株的细菌人工染色体和同源重组技术,将PEDV流行株的S基因表达盒插入PRV基因组UL40与UL41之间的非编码区,构建重组病毒rPRV-S(UL40-41),该毒株还缺失了TK和gE基因。生长动力学显示该毒株在猪睾丸(ST)细胞的增殖效率与亲本毒株相似,表明S基因表达盒的插入对病毒生长性能无显著影响。重组病毒在ST细胞传至15代,PCR和测序鉴定S基因未发生碱基的丢失和变异,间接免疫荧光显示重组病毒感染鸡胚成纤维细胞后可稳定表达S蛋白。应用该毒株接种断奶仔猪,产生低水平的针对PEDV的抗体。该研究为PRV活载体疫苗的构建奠定了基础。

铺设排水板的水工隧洞组合衬砌受力特性研究

为研究铺设排水板的水工隧洞组合衬砌结构受力特性,基于有限元软件ABAQUS建立围岩-组合衬砌整体三维数值模型,考虑围岩的约束作用、结构交界面接触非线性和自密实混凝土开裂非线性,研究内水压作用下组合衬砌钢管、自密实混凝土、管片、螺栓等结构的受力特征以及排水板材料属性对组合衬砌结构承载性能的影响。研究结果表明:衬砌充水运行时,钢管发生“横椭圆”膨胀变形,整体出现上抬趋势,排水板端部钢管处于弯剪受力状态,整体应力水平较低;自密实混凝土在排水板端部开裂后发生错动,环向分布多条贯穿裂缝;管片变形主要发生在无排水板铺设区域,环向以受拉为主,而环向螺栓有较大的安全裕度;排水板材料属性对组合衬砌承载性能影响显著,随着其弹性模量略微增加,钢管各部位内水压承载比明显降低,自密实混凝土底部发生开裂,管片环向拉应力持续增大,组合衬砌出现整体联合承载趋势,对管片受力较为不利,后期优化设计应以控制排水板弹性模量为主,建议其弹性模量取值不超过10 MPa,以保证衬砌结构安全运行。研究成果可为水工隧洞组合衬砌结构设计提供参考。

应用荧光定量PCR方法检测伪狂犬病病毒弱毒株在猪体组织中的分布

为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株免疫仔猪后可少量存在于大脑、小脑、肝脏、脾脏、肺脏、扁桃体和颌下淋巴结中,部分仔猪鼻甲骨病毒含量较高。应用本研究建立的荧光定量PCR方法阳性检出率为79.2%,而常规PCR方法阳性检出率仅为45.8%。结果表明,本研究建立的荧光定量PCR方法为了解弱毒株在猪体的分布提供了快速、敏感的检测手段。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪组织中的分布情况为进一步揭示其组织嗜性、安全性和免疫机制提供了数据。

伪狂犬病病毒TK、gE双基因缺失传代致弱株的安全性及免疫效力研究

为获得安全、有效的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株弱毒疫苗,在前期研究的基础上,对PRV变异株TK、gE双基因缺失株(PRV LA1206株)进行传代致弱,在鸡胚成纤维细胞上连续传代75次,后经连续5代挑取单个病毒蚀斑克隆而得F_(80)代,毒种命名为PRV LA1206-80株,并对其进行安全性及免疫效力评价。生长动力学试验结果显示,PRV LA1206-80株与PRV LA1206株生长动力学相似。仔猪安全性试验结果显示,滴鼻接种1日龄PRV抗体阴性仔猪后所有仔猪均未出现发热及临床症状,表明该毒株对1日龄仔猪安全。攻毒保护试验结果显示,28~35日龄仔猪肌肉注射接种PRV LA1206-80株或PRV LA1206株7 d后进行变异株PRV AH02LA株滴鼻攻毒,可产生良好保护,所有仔猪均未出现体温反应、临床症状和排毒。而PRV Bartha K61株免疫猪7 d后攻毒,均出现了体温反应,其中1头发病,且鼻拭子样品均检出病毒。综上所述,相较于PRV LA1206株,在鸡胚成纤维细胞上连续传代后获得的PRV LA1206-80株已进一步致弱,对1日龄PRV抗体阴性仔猪安全,且该PRV TK、gE双基因缺失传代致弱株对PRV变异株的保护效果显著优于PRV Bartha K61株,是极具应用价值的PRV弱毒疫苗候选株。

南水北调中线穿黄隧洞结构设计研究

穿黄隧洞是南水北调中线总干渠上建设规模最大,施工技术最复杂,是控制工期的关键性工程。隧洞内径7.0 m,最大内水压力达0.51 MPa。多年来,长江水利委员会长江勘测规划设计研究院在对大量穿黄隧洞结构型式进行研究、分析的基础上,确定集中精力对3种较优的隧洞衬砌结构方案进行比选。在从施工技术、经济投入等方面进行综合比较之后,最后推荐采用结构受力明确,且安全度很高的方案3。主要介绍隧洞结构型式的比选、隧洞纵向变形及抗震等设计研究成果。

重组伪狂犬病病毒的研究进展

伪狂犬病病毒(PRV)属于疱疹病毒,含有多个复制非必需区,可以通过基因缺失研制弱毒疫苗,也可以通过异源基因的插入或替换构建活载体疫苗。目前构建重组PRV的技术方法包括传统同源重组技术、细菌人工染色体技术(BAC)、CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术。2011以来,一种毒力更强的变异株在我国暴发流行,应用变异株构建的基因缺失活疫苗(gE/gI、gE/TK或者TK/gE/gI)能对变异株提供完全的保护,为PRV在我国的净化和PRV变异株活载体疫苗的构建奠定了基础。研究发现以PRV基因缺失株为载体,与其他病原的抗原编码基因共同构建重组病毒,能快速地诱导细胞免疫和体液免疫,达到一针多防的效果,应用前景广阔。适合的插入位点选择、外源基因高效表达和克服PRV母源抗体干扰等是提高活载体效果的关键。

鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定

为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli DH10B中,对获得的克隆用酶切、PCR方法进行鉴定并测序。提取阳性克隆的DNA转染CEF,以拯救重组病毒。再通过将带有相同同源臂和UL44(糖蛋白质C,gC)基因的片段和阳性克隆的DNA共转染鸡胚成纤维细胞进行重组,以获得gC恢复病毒。采用0.01感染复数(MOI)感染CEF对亲本病毒、恢复病毒进行多步法生长曲线测定,比较其有无差异。结果显示:成功获得了DEV的mini-F重组病毒,命名为DEV(atten)-mini-F,获得2个阳性克隆S1、S2,将S1命名为pDEV(atten),应用pDEV(atten)拯救重组病毒获得gC恢复病毒DEV(atten)ΔgC-R,生长特性的结果显示亲本病毒与恢复病毒间无显著性差异。表明成功构建的DEV(atten)的细菌人工染色体为全基因组的感染性克隆。

高地应力下深埋隧洞软岩段围岩时效特征研究

"引大济湟"调水总干渠输水隧洞埋深大,地应力较高,其中穿越的洞段Ⅳ、Ⅴ类围岩占有较大的比例,在高地应力作用下围岩开挖卸荷后极可能出现大变形失稳、垮塌等,这些都极大地影响着TBM的掘进效率及施工进度。根据洞室开挖过程中实际揭示的围岩地质条件及变形特征,采用三维黏弹塑性数值方法,对围岩的流变特性与时效变形进行研究;在对实测地应力场进行分析基础上,结合围岩现场变形规律,对围岩蠕变力学参数进行了反演,进而对隧洞开挖区域的软弱围岩进行黏弹塑性数值分析,获得了规律性认识,为动态调整设计提供科学依据。

改良单开门椎板成形术与椎板减压融合内固定术治疗多节段脊髓型颈椎病的效果比较

目的比较改良单开门椎板成形术（MOLP）与椎板减压融合内固定术（LIF）治疗多节段脊髓型颈椎病的临床效果,并比较术后并发症的差异。方法 选择2009年6月~2013年6月在西京医院诊治的245例多节段（≥3节）脊髓型颈椎病患者,分别采用MOLP（A组,118例）及LIF（B组,127例）治疗。回顾性观察并比较手术时间及术中出血量,和术前及术后神经功能恢复情况（JOA评分）、颈椎功能障碍指数（NDI）、视觉模拟评分（VAS）、颈椎曲率指数（CCI）、颈椎的活动度（ROM）及术后并发症等指标评价两组手术疗效。结果 两组手术时间、术中出血量相比差异无统计学意义。两组患者术前JOA、ROM、NDI、VAS、CCI比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。两组术后6月及1年JOA、NDI及VAS较术前显著改善（P〈0.05）,CCI与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）,ROM与术前相比明显下降（P〈0.05）。两组术后6月及1年JOA、CCI比较差异无统计学意义（P〉0.05）,术后6月及1年A组NDI及VAS均明显低于B组,而ROM均明显高于B组,差异有统计学意义（P〈0.05）。除A组ROM明显降低（P〈0.05）外,其余各组各指标术后6月与术后1年比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 两种术式在治疗多节段脊髓型颈椎病时临床疗效相似,MOLP能够保留颈椎活动度,并发症发生率低,是治疗MCSM的理想手术方式。

大型“U”型薄壳预应力渡槽仿真结构试验

东深供水改造工程是向香港、深圳以及工程沿线城镇提供饮用源水及农田灌溉用水的跨流域大型调水工程。渡槽长度为 5 811m ,渡槽设计过流量为 90m3 s ,纵坡 1∶10 0 0 ,槽壳内径 7m ,设计水深 4.7m ,满槽水深5 .3 5m ,为一级建筑物。大型“U”型薄壳渡槽采用预应力在国内尚属首例 ,为确保工程成功应用 ,2 0 0 1年进行了1∶1仿真结构和生产性试验。测试内容包括预应力锚索锚固力、摩阻系数、混凝土和钢筋应力以及结构变形。经对试验结果整理分析 ,①用于试验的钢绞线力学指标达到规范要求 ;②锚索与孔道之间的摩阻系数小于0 .1,较规范推荐值为小 ;③锚索锚固力已趋稳定 ,纵向锚索的锚固回缩应力损失、钢绞线松弛应力损失与混凝土徐变应力损失的总和未超出规范公式的计量范围 ;④各阶段混凝土应力分布规律与三维有限元计算结果基本一致 ,预应力达到设计预期效果 ,渡槽结构是安全的 ;⑤渡槽挠度较小 ,槽身刚度较大。

浅埋式压力管道后张法预应力结构方案研究

对东深供水改造工程浅埋式压力管道的各种后张法预应力结构方案进行了研究,分析了结构体型及预应力施加方式对结构应力的影响,研究成果已应用于该工程实践中。

猪源伪狂犬病病毒传代致弱LA2017株的安全性和免疫效力研究

为检测猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株作为疫苗后选株的安全性及免疫效力。本研究对4日龄初生仔猪和产前1个月妊娠母猪免疫LA2017株后的安全性、28~35日龄仔猪免疫效力以及免疫猪后排毒和同群传播性进行了研究。结果显示:滴鼻接种4日龄仔猪和肌肉注射产前1个月的妊娠母猪,均无任何临床症状,表明该疫苗株具有良好的安全性;肌肉注射接种28~35日龄的仔猪,免疫后7 d产生对PRV变异株AH02LA的完全保护并且可以阻止排毒,免疫14 d后攻毒均未发病和排毒,而PRV Bartha K61株免疫猪后7 d攻毒,有4头猪出现了体温升高,鼻拭子样品均检出病毒,免疫后14 d和21 d时对试验猪攻毒,PRV Bartha K61株免疫组均有猪发病,且鼻拭子样品均检出病毒;在抗体产生水平方面,PRV LA2017株免疫后14 d产生高水平中和抗体,PRV中和指数抗体≥10 000,且维持至免疫后5个月,而Batha-K61组免疫后1个月至3个月针对PRV变异株AH02LA的中和指数仅为178~1000,且4个月就开始下降;在同群感染方面,PRV LA2017株肌肉注射接种28~35日龄仔猪后14 d内均未从鼻拭子和肛门拭子检出排毒,gB抗体全部转为阳性,同群非免疫接种猪PRV gB和gE的ELISA抗体均为阴性,表明PRV LA2017株安全性好,无横向传播,不引起同群感染。结果表明,PRV LA2017株作为疫苗株对猪伪狂犬变异株的保护效果显著优于Bartha K61株,该毒株安全性好、抗体水平高和持续时间长,是一株极具开发价值的猪伪狂犬病流行株的弱毒疫苗候选株。

两种颈后路手术治疗多节段脊髓型颈椎病术后C_5神经根麻痹的效果比较

目的比较两种颈后路手术治疗多节段脊髓型颈椎病术后C5神经根麻痹的发生率,并分析其可能的发生原因。方法选择2009年6月~2013年6月西京医院收治的245例多节段（≥3个）脊髓型颈椎病患者,分别采用改良单开门椎板成形术（A组,118例）及椎板减压融合内固定术（B组,127例）治疗。回顾性比较分析两组的手术时间、术中出血量、术前及术后神经功能恢复情况[采用日本骨科协会17分评分法（JOA）]、颈椎曲率指数（CCI）以及术后C5神经根麻痹发生情况。结果两组手术时间、术中出血量比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。两组术前JOA评分、CCI相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;两组术后1年JOA评分与术前比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,CCI与术前比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。A组术后1年改善率为（67.82±13.35）%,B组术后1年改善率为（68.25±14.36）%,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后6个月A组脊髓漂移距离低于B组,发生C5神经根麻痹者脊髓漂移距离高于未发生者,差异均有高度统计学意义（P〈0.01）,后纵韧带骨化症患者与无后纵韧带骨化症患者脊髓漂移距离差异无统计学意义（P〉0.05）。术后A、B两组C5神经根麻痹发生率分别为2.54%和13.39%,两组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论两种颈后路手术治疗多节段脊髓型颈椎病时临床疗效相似,但是改良单开门椎板成形术后C5神经根麻痹的发生率明显低于椎板减压融合内固定术,椎板减压融合内固定术与后纵韧带骨化症可能为术后发生C5神经根麻痹的危险因素。

鸭瘟病毒LH2011强毒株部分基因序列的测定与分析

为了分析鸭瘟病毒LH2011强毒株部分基因序列的特征。设计6对特异性引物,应用PCR方法扩增鸭瘟病毒强毒株LH2011株的LORF11、UL47、UL41、UL12、UL2和US10序列,然后对PCR产物进行序列测定,并与已发表的鸭瘟病毒的同源序列进行比较。序列分析结果显示,LH2011株LORF11同源子与中国强毒株CHv中有相同的结构,而与欧洲强毒株(2085株、Jansen株、Holland株和D11-JW-016株)和中国疫苗株(VAC株和Clone-03株)存在较大差异,发生了大片段碱基插入,使其被分为LORF11A和LORF11B 2个开放阅读框(ORF)。UL47、UL41、UL12、UL2和US10序列与德国强毒株2085株完全一致,其中UL2序列与N3株、LS株、N2株、N1株、2085株和CHv株6株强毒株均一致,而在Attenuated strain 2株、Attenuated strain 1株、Clone-03株和VAC株4个弱毒株中都缺失了一个528 bp的大片段。表明:LH2011株具有强毒株的基因型特征,提示弱毒株中LORF11同源子和UL2发生的大片段碱基缺失很可能与病毒的毒力减弱直接相关。

血清铜、锌、铁测定在肝病中的临床意义

微量元素与人类健康或疾病的关系十分密切。某些必需微量元素与体内的氨基酸、蛋白质或其它有机基团结合,形成各种有关的酶、激素或维生素后,可使金属-有机复合物产生各种独特的生物学作用。

寺坪电站混凝土面板砂砾石坝坝体分区设计优化

寺坪水电站大坝为混凝土面板砂砾石坝,坝体堆石区主要为天然砂砾石料。由于当地天然砂砾石料含泥量偏高,且级配范围过宽,如直接上坝,难以满足大坝分区填筑及水力过渡等要求。经过对天然料场选择、大坝填筑断面分区的优化、渗流试验研究和相应的渗流计算,在优选料场和填筑料处理的基础上,采用当地料直上坝是可行的,可取得较好经济效益。

一种应用LORF11同源子鉴别诊断鸭瘟病毒的PCR方法

为建立一种鉴别诊断鸭瘟病毒的PCR方法,根据已发表的8株鸭瘟病毒株的长区开放阅读框(LORF11)等位基因序列,在其开放阅读框等位基因的上游5 bp和下游101 bp的位置设计1对特异性引物。应用这对引物对鸭瘟病毒LH2011株、v2085株、VAC株、Clone-03株DNA进行PCR扩增,分别获得了4 448 bp、3 277bp、934 bp和2 518 bp的特异性条带。此PCR方法特异性强,敏感性高,可检测到10TCID50或0.1LD50的鸭瘟病毒。在感染鸭瘟病毒的组织(肝脏)中均能检测到鸭瘟病毒DNA。对疑似鸭瘟的临床病料的检测结果也证明,建立的PCR方法不仅能够鉴别样品是否感染了鸭瘟病毒,而且能鉴别感染的鸭瘟病毒的来源。

猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗（LA-A株）的最小免疫剂量和制品保存期的研究

本研究将伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(PRV AH02LA株)的gE基因缺失株(LA-A株)接种BHK-21细胞,经纯悬浮培养制备抗原,甲醛灭活后制备油乳剂灭活疫苗,并确定该灭活疫苗的最小免疫剂量和效力检验方法,以及在2~8℃保存期。结果显示:猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗(LA-A株)的效力检验方法为以2.0 mL(抗原含量108.20TCID50)接种4~5周龄PRV阴性健康仔猪,颈部肌肉注射,间隔28 d以相同剂量和方法加强免疫,加强免疫后第21 d,免疫猪血清PRV抗体中和指数应不低于10000,攻毒保护率应不低于80%;最小免疫剂量为1.0 mL(抗原含量107.90 TCID50);制品保存期:在2~8℃保存期为18个月。该研究结果为新型疫苗的研制提供了重要的试验依据。