褐飞虱G蛋白β亚基基因的功能分析

【目的】本研究旨在鉴定褐飞虱Nilaparvata lugens G蛋白β亚基基因(NlGβ)并分析其功能,以期为基于RNAi技术防治褐飞虱提供潜在的新靶标基因。【方法】利用PCR克隆并验证褐飞虱NlGβ的编码序列(coding sequence,CDS)并进行生物信息学分析;基于褐飞虱不同发育阶段(卵、1-5龄若虫和雌雄成虫)和成虫不同组织(头、足、肠道、表皮、脂肪体、雌性生殖系统和雄性生殖系统)转录组表达谱分析NlGβ的时空表达模式;通过对2和5龄褐飞虱若虫进行显微注射dsRNA沉默NlGβ,观测个体和雌性生殖系统表型,统计存活率、单雌产卵量和卵孵化率,利用透射电子显微镜技术观察侧输卵管膨大区。【结果】褐飞虱NlGβ(GenBank登录号:XP_022200908.1)的CDS长948 bp,NlGβ蛋白包含7个WD40结构域和4个WD_REPEATS_1基序,是一个较为保守的蛋白,除了直翅目昆虫外,来源于其他昆虫目中的NlGβ同源蛋白能很好地聚集在同一簇进化分支上。NlGβ的表达量在1-3龄若虫期呈现周期性变化,在5龄雌若虫和雌成虫中的表达量高于5龄雄若虫和雄成虫中的;NlGβ在成虫不同组织中都表达,但在脂肪体中表达量最高,在雌性生殖系统中的表达量高于雄性生殖系统中的。沉默褐飞虱2龄若虫NlGβ,出现蜕皮困难的现象,导致存活率较ds GFP对照组显著降低;沉默褐飞虱5龄若虫NlGβ,雌成虫腹部异常膨大,卵巢发育畸形,单雌产卵量较对照组显著下降,卵无法孵化,侧输卵管膨大区内分泌物增加,上皮细胞发生降解。【结论】NlGβ与褐飞虱的生长发育和雌虫的繁殖密切相关。

人促红细胞生成素基因在家蚕体中的高效表达

人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ,使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPODNA与野生型BmNPVDNA共转染BmN细胞,经空斑纯化,获插入EPOcDNA的重组病毒rBmNPVEPO。经Sonthern杂交和PCR扩增鉴定证明人EPO基因已正确组建于BmNPV的预定位置。将重组病毒rBmNPVEPO穿刺接种5龄幼虫和蛹,收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～65d蛹血淋巴。用ELISA检测幼虫血淋巴中EPO表达量高达62800u/mL,蛹血淋巴中表达量达74000u/mL。Westernblot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带,分子量均约为26kD。用TF1细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定,每毫升血淋巴中EPO活性约为63000u。

饲料蛋白质含量对家蚕生长发育和繁殖的影响

本试验用脱脂大豆粉和纤维素粉含量不同的8种人工饲料处理5龄雌蚕。结果用含蛋白质5.62%的饲料,蚕仅存活6.12天;含9.12％的,结茧少且不能化蛹,高于12.63%时能正常结茧化蛹。随着饲料蛋白质含量从9.12％增至37.18％,五龄经过从10.5缩短至7天,熟蚕体重从2.35克增至3.93克,干物消化量从0.40克升至0.86克,消化率从14.49％升至33.08％。但全龄干物食下量和排粪量则以取食蛋白质含量为12.63％的最高,而以取食37.18%的最低。蛹重和卵量也随五龄饲料蛋白含量升高而增加。

茶尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白基因核苷酸序列及其在Baculoviridae中的地位(英文)

茶尺蠖核型多角体病毒（ＥｏＳＮＰＶ）基因组的ｐｏｌｈ和ｅｇｔ基因区约１４．２ｋｂ的酶切图谱被构建．ｅｇｔ基因位于ｐｏｌｈ基因上游约４．８ｋｂ处，但转录方向与ｐｏｌｈ基因相反．ＥｃｏＲⅤ－Ｌ片段ｐｏｌｈ基因及其旁侧的１１２５核苷酸序列被测定．ｐｏｌｈ基因编码区长７３８核苷酸，可编码２４６氨基酸的多肽．起始密码子ＡＴＧ上游是一个富含ＡＴ（ＡＴ占７１．２％）的启动子区，在－５２核苷酸处有杆状病毒晚期基因启动子转录起始基序ＡＴＡＡＧ．在终止密码子下游２０８核苷酸有一个ｐｏｌｙ（Ａ）信号，ＡＡＴＡＡＡ．但ＥｏＳＮＰＶｐｏｌｈ基因起始密码子ＡＴＧ相邻核苷酸序列为ＧＴＡＡＴＧＴ，其－３是个Ｇ，这与已知的１６种其它杆状病毒ｐｏｌｈ基因－３位置均是Ａ不相同．在分析了ＥｏＳＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上，通过ＭＡＬＩＧＮ程序，比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白的序列，ＥｏＳＮＰＶ与黄杉毒蛾核型多角体病毒（ＯｐＳＮＰＶ）的同源性为最高，核苷酸序列的同源性为８３．０％，氨基酸序列达９４．７％；与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高，核苷酸序列同源性为７２．６％～８１．９％，氨基酸序列为８３．７％～９３?

温度对角倍蚜越冬世代多型现象的影响

角倍蚜Schlechtendalia chinensis(Bell)是形成我国著名特产五倍子的最主要蚜虫种类,其形成的角倍占我国五倍子总产量的75％以上。角倍蚜瘿外生活阶段主要为越冬世代和性蚜世代,其中越冬世代历期长(在浙江自10月中下旬始至翌年4月上旬),是人工繁殖管理的最主要世代。研究温度对角倍蚜越冬世代多型现象的影响,对角倍蚜人工繁殖工作的改进具有实际意义。

杆状病毒包涵体蛋白基因的进化

在分析了ＨａＳＮＰＶ和ＥｏＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上，通过ＭＡＬＩＧＮ程序，比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白的序列，ＨａＳＮＰＶ与ＨｚＳＮＰＶ亲缘关系十分接近，两者ａａ序列同源性达９７．６％，ｎｔ序列同源性达９７．４％；ＥｏＳＮＰＶ与黄杉毒蛾核型多角体病毒（Ｏｐ－ＳＮＰＶ）的同源性为最高，ｎｔ序列的同源性为８３．０％，ａａ序列达９４．７％，与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高，ｎｔ序列同源性为７２．６％～８１．９％，ａａ序列为８３．７％～９３．９％；与ＧＶ的同源性较低，为４８．４％～５４．９％；而与锯叶蜂核型多角体病毒（ＮｓＳＮＰＶ）的同源性为最低，仅４４．９％。应用Ｃｌｕｓｔａｌ程序建立了一个包括了２６种包涵体蛋白的系统树，确定了新测定的ＥｏＳＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶＰｈ在包涵体蛋白基因系统树中都属于ＮＰＶ中的ＧｒｏｕｐⅡ分枝。

SA脂质体介导DNA转染昆虫细胞的研究

ＳＡ脂质体介导ＤＮＡ转染昆虫细胞的研究张传溪（浙江农业大学应用昆虫学研究所杭州３１００２９）吴祥甫（中国科学院上海生物化学研究所上海２０００３１）杆状病毒昆虫表达系统是８０年代发展起来的高效真核表达系统，具有表达量高，表达产物后加工较完全等优点，因...

棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因及杆状病毒几丁质酶基因的分子进化

用PCR方法扩增了棉铃虫Helicoverpaarmigera单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶基因 ,测定了基因编码区的核苷酸全序列。基因编码区全长 1713bp,可编码 570个氨基酸残基组成的多肽 ,预计分子量为 6 3 6kD。将所推导的HaSNPV几丁质酶氨基酸序列与其它已知杆状病毒几丁质酶氨基酸序列进行联配比较 ,结果表明HaSNPV与谷实夜蛾H .zea单粒包埋型核型多角体病毒 (HzSNPV)的氨基酸序列非常相似 ,同源性高达 90 7% ,与苜蓿丫纹夜蛾Autographacalifornica多粒包埋型核型多角体病毒 (AcMNPV)、家蚕Bombyxmori核型多角体病毒 (BmNPV)、美国白蛾Hyphantriacunea核型多角体病毒 (HcNPV)、舞毒蛾Lymantriadispar多粒包埋型核型多角体病毒 (LdMNPV)、黄杉毒蛾Orgyiapseudotsugata多粒包埋型核型多角体病毒 (OpMNPV)和云杉卷叶蛾Choristoneurafumiferana核型多角体病毒 (CfMNPV)氨基酸序列同源性分别为 6 4 4 %、 6 4 9%、 6 4 2 %、 6 2 9%、 6 6 2 %和 6 1 5%。根据氨基酸序列用PC\GENE程序绘制已知杆状病毒几丁质酶的分子系统树 ,并与杆状病毒中最为保守的多角体蛋白基因系统树作了比较 ,结果表明几丁质酶基因和多角体蛋白基因的进化速率是不尽相同的。

饲料蛋白质含量对家蚕茧质和饲料效率的影响

明确饲料蛋白质含量对家蚕茧质的影响以及对饲料转化为茧、茧层和卵的效率的影响,对于选择适宜的饲料蛋白质含量水平,提高人工饲料生产效率和经济效益,具有很大的实用价值,并可为选育桑树新品种提供参考。本文就饲料蛋白质含量对茧质、饲料效率和氮素利用的影响进行探讨。

角倍蚜越冬世代的发育起点温度和有效积温

五倍子系中国特产，是重要的化工和医药原料。角倍蚜Schclechtendaliachinesis（Bell）是生产五倍子的最主要致瘿蚜种。恒温试验表明，其越冬世代有翅型随温度从4.5℃升至18.0℃，平均世代历期从266.2天缩短至76.6天，世代发育起点温度为-1.4℃，有效积温为1512.9日度；无翅型随温度从7.5℃升至22.0℃，平均世代历期从118.8天缩短至29.4天，世代发育起点温度为2.2℃，有效积温为557．4日度。

EoNPV的限制性酶切图谱及polyhedrin基因和egt基因的定位

用８种限制性内切酶酶解茶尺蠖Ｅｃｔｒｏｐｉｓｏｂｌｉｑｕａ核型多角体病毒（ＥｏＮＰＶ）基因组ＤＮＡ，获得大于０．８８ｋｂ的片段数分别为７、３８、１９、１７、１６、９、３２和１４．由此统计，基因组平均大小大于１１８．５ｋｂ，即Ｍｒ约大于７８．６×１０６．用ＢｍＮＰＶ的多角体蛋白（ｐｈ）基因和ＡｃＭＮＰＶ的ｅｇｔ基因为探针，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法，将ＥｏＮＰＶ的ｐｈ基因定位于ＢａｍＨＩＡ、ＣｌａＩＤ、ＥｃｏＲＩＭ、ＥｃｏＲＶＬ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＰｓｔＩＡ、ＳａｌＩＨ和ＸｈｏＩＢ片段上，将ｅｇｔ基因定位于ＢａｍＨＩＡ、ＣｌａＩｌ、ＥｃｏＲＩＫ、ＥｃｏＲＶＡ、ＨｉｎｄⅢＨ、ＰｓｔＩＡ、ＳａｌＩＢ、ＸｈｏＩＩ片段上．通过克隆和酶切鉴定ＥｃｏＲＩＭ和ＥｃｏＲＶＬ片段，测定ｐｈ基因部分序列，并以ＥｃｏＲＩＭ为探针对基因组酶切印迹进行杂交，制作了ＥｏＮＰＶｐｈ基因和ｅｇｔ基因区的酶切图谱，推定ｅｇｔ基因保守区位于ｐｈ基因上游约４．５５ｋｂ处．

人工饲料中脱脂大豆粉的精制度对小蚕的影响

用精制程度不同，色泽自淡褐至白色，蛋白质含量分别为４２．４％（Ａ）、４８．９％（Ｂ）、５４．２％（Ｃ）和６５．８％（Ｄ）的４种脱脂大豆料，配制成人工饲料饲养小蚕。收蚁后２４小时疏毛率分别为５２．１％、８８．０％、１００％和９８．５％；收蚁后第１０日体重分别为０．２０４、０．２４５、０．２７４和０．２０９克，第１０日的存活率、三眠与四龄起蚕占蚕百分率均以含Ｃ饲料为最高，分别为９６．１％和６８．８％，而以含Ａ饲料为最低，仅为５４．４％和３８．９％。结果说明小蚕饲料用大豆粉以精制程度适中的淡黄白色Ｃ为最好。Ａ经甲醇、乙醇或水抽提后，蚕的疏毛率、存活率和生长发育速度均得到显著改善，其３种抽提物均对小蚕的取食和生长发育有阻碍作用。

中国农业昆虫基因组学研究概况与展望

昆虫种类繁多,变异惊人,是地球上最大的动物类群,其中不少种类是农业上的重要害虫或益虫。自从2000年黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)基因组发表以来,当代的昆虫学研究已经越来越多地依赖于从基因组和转录组所获得的信息。为了更好地理解昆虫生物学特性和增强应对那些严重影响人类健康、粮食供应和经济安全的各种卫生、农林害虫的能力,更好地利用那些在维持自然和农业生态系统不可或缺的昆虫以及那些为人类提供丝、蜂蜜和药品的昆虫,需要了解它们的基因组和转录组信息。目前世界上已经有50多种昆虫的基因组被报道,近10年来中国科学家也已经完成了家蚕(Bombyx mori)、小菜蛾(Plutella xyllostella)、东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis)、榕小蜂(Ceratosolen solmsi)和褐飞虱(Nilaparvata lugens)的基因组测定和分析,还有一批重要农业昆虫的基因组正在分析中,这其中包括烟粉虱(Bemisia tabaci)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)、二化螟(Chilo suppressalis)、白背飞虱(Sogatella furcifera)、灰飞虱(Laodelphax striatellu)和若干寄生蜂种类。自从2010年中国率先在国际上报道了2种昆虫(烟粉虱和褐飞虱)的转录组和表达谱以来,短短几年仅国内就已经有上百个昆虫转录组得到分析。同时,家蚕、东亚飞蝗和褐飞虱的功能基因组研究也取得了很大的进展,例如,用40个品系重测序揭示了家蚕在驯化过程中相关的基因变化,通过信号通路分析解析了东亚飞蝗散居型和群居型转换的分子机制,以及发现了2个胰岛素受体是控制稻飞虱长、短翅型可塑性发育的"分子开关"。在基因组和转录组基础上,通过基因功能的研究和挖掘,结合应用新的基因组定点编辑技术和RNAi技术,将使害虫的防治和益虫的利用出现革命性的变化。

BmNPV的PK基因和杆状病毒PK基因的进化分析

家蚕核型多角体病毒镇江株（BmNPVZJ8）蛋白激酶（BmvPK－1）基因编码区含828个核苷酸，可编码推测分子量为32kD的多肽。应用GCG程序分析表明BmvPK－1与AcMNPV的PK－1相似性最高，两者氨基酸序列相似性达95.2％。比较同时表明，BmvPK-1氨基酸序列与其它生物Ser／ThrPK的催化结构域有很高的同源性，与人的HSPKCE，果蝇的dPKC98F和酵母的TPK1的催化结构域分别有31．1％、32．3％和31.2％的相似性。在PK的进化树中，杆状病毒PK是一独立进化的分枝，BmvPK-1与PK－1进化距离最近，而HavPK则与HzSNPV的PK距离最近。

人工饲料含糖量对蚕生长发育的影响

试验用糖和纤维素含量比不同的5种人工饲料饲育1～3龄蚕和5龄蚕.结果指明:用含糖量0%、4%、8%、12%和16%的饲料饲育1～3龄蚕,疏毛率、收蚁第11日的存活率、发育速度、体重等指标,均以4%为最好,其次为8%处理.用含糖量0%、5%、10%、15%、20%5种饲料饲育5龄蚕,结果雌雄平均体重、茧重、茧层重均以5%处理最好.

温度对黄粉虫成虫繁殖的影响

黄粉虫是多种小型经济动物的常用优良饵料。本试验在２０．１℃、２４．０℃、２８．５℃、３１．７℃和３６．５℃五种恒温下饲养该成虫结果，成虫寿命平均分别为６３．０、５４．２、３８．８、３８．０和２６．１天；每雌平均产卵量则分别为２００．３、２０７．３、１２２．３、１１５．８和８１．２粒；成虫平均生产１ｇ卵消耗麸皮量分别为２．６６、２．００、２．１９、２．１４和４．１５ｇ。结果说明人工繁殖黄粉虫的成虫期温度以２４℃为最适宜。

含豆腐渣粉末的小蚕人工饲料

本试验以降低1～3龄小蚕人工饲料的成本为目的,使用豆腐渣粉末代替人工饲料中的部分原料。经1～3龄一回给饵法无菌饲育,结果说明小蚕对干物中含15％豆腐渣粉末的低成本人工饲料,比对普通人工饲料的取食量大,生长速度快,3龄眠蚕体重重。且豆腐渣粉末可明显改善不含琼脂和纤维素的饲料的物理性状,值得进一步探讨利用。