羊口疮病毒活载体疫苗和生物制剂的研制现状

羊口疮病毒的基因组结构、编码基因复制特性及其在宿主和非宿主体内快速启动机体的免疫反应特点,使其具有作为活病毒疫苗载体的特殊优势。此外,该病毒自身及其编码蛋白的双向免疫调节功能使其具有作为临床使用生物制剂的巨大潜力。作者对基于羊口疮病毒的重组疫苗和生物制剂的研制现状进行了详细的综述,以期为该病毒的疫苗研制、生物制剂研发及临床应用提供参考。

玉米赤霉烯酮对鸡胚成纤维细胞的毒性作用

旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测内质网应激(ERs)和细胞凋亡相关基因的mRNA转录水平。结果显示,12.5~50.0μg·mL^(-1) ZEA显著抑制DF-1细胞增殖(P<0.01),且呈时间和剂量依赖性关系。25.0μg·mL^(-1) ZEA处理细胞24 h后,上清液中LDH和Caspase-3含量显著升高(P<0.01);细胞中ROS水平和细胞凋亡数量极显著升高(P<0.01);线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);ERs相关基因GRP78、ATF6、ATF4、CHOP、PERK mRNA转录水平极显著上调(P<0.01)。综上表明,ZEA能通过内质网应激途径导致细胞凋亡并对鸡胚成纤维细胞发挥毒性作用。研究结果为深入研究ZEA对鸡细胞的毒性作用和解毒手段奠定基础,对相关禽类疾病治疗具有意义。

2006-2016年中国羊口疮病毒的遗传演化分析

羊口疮(Orf disease)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,该病广泛分布于世界各地,对公共卫生造成了严重的影响。为了解中国ORFV毒株的起源、分子流行病学及病毒系统研究的信息,本研究对中国2006-2016年分离到82株ORFV毒株进行了系统的遗传演化分析,利用DNAStar和Mega 5.0软件对ORFV011(B2L)、ORFV020(VIR)、ORFV059(FIL)和ORFV127(vIL-10)基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性比对,并在此基础上构建系统发育树。结果显示,82株病毒B2L基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为95.9%~100%和86.5%~100%,F1L基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为94.5%~100%和94.0%~100%;系统进化分析显示,中国不同地方分离的ORFV毒株处于不同分支上,甚至同一个省内的毒株也分布在不同分支上。表明中国ORFV毒株进化特殊,处于不同的进化分支上,且有发生突变的可能性,世界各地流行的代表性毒株在中国均有变种分布,这增加了中国防控ORFV的难度。本研究结果为中国防控羊口疮的流行和研制高效疫苗提供了基础数据。

羊口疮病毒GDZC株锚蛋白基因的克隆及序列分析

为研究羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)编码的锚蛋白(ankyrin,ANK)基因在感染宿主中的免疫调节作用,本试验从ORFV GDZC株感染的细胞病毒液中提取基因组DNA,用特异性引物进行PCR扩增、克隆出5个ANKs基因,并进行了基因序列及其编码蛋白的生物信息学分析。结果显示,获得的GDZC株ORFV008、ORFV123、ORFV126、ORFV128、ORFV129基因分别编码516、525、497、501和516个氨基酸,与OV-SA00毒株的核苷酸同源性最高,分别为98.3%、98.7%、97.9%、97.3%、98.0%。ORFV编码的5个ANKs都含有ANK结构域和F-box结构域,是结构保守蛋白。蛋白跨膜分析表明,ORFV123和ORFV128不含潜在跨膜区,ORFV129、ORFV008和ORFV126蛋白分别存在1、2和3个潜在跨膜区,且均不含信号肽。本研究结果为深入研究ANK在ORFV致病过程中作用和免疫逃逸机制提供了基础数据。

波尔山羊线粒体融合蛋白2基因的克隆及序列分析

线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,MFN2)是位于线粒体外膜上的跨膜蛋白,也是外膜的信号分子和药物作用靶蛋白,它在细胞增殖、分化、凋亡和多种疾病中起着重要作用。为深入研究山羊MFN2基因在炎症疾病过程中的分子作用机制,本试验采用RT-PCR的方法克隆了波尔山羊MFN2基因,并对其进行了序列测定及其编码蛋白的结构分析。结果显示,克隆得到的波尔山羊MFN2基因大小为2 441bp,其编码的蛋白由705个氨基酸组成。波尔山羊MFN2基因种间同源性低,存在Fzo-mitofusin结构域、DLP-2结构域,是结构保守蛋白;存在1个潜在跨膜区,位于576—595位氨基酸(loop1);不存在信号肽。试验首次克隆了波尔山羊MFN2基因,为探索山羊MFN2基因与炎症发生之间关系的分子机制提供了基础数据。

日粮中添加姜黄对白羽肉鸡生长性能和肝脏抗氧化能力的影响

【目的】探究基础日粮中添加不同剂量姜黄对白羽肉鸡生长性能和肝脏抗氧化能力的影响,为姜黄在白羽肉鸡饲养中的合理使用提供参考。【方法】选取288只体质量相近的健康雄性1日龄白羽肉鸡,随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组6个重复,每个重复12只鸡;对照组饲喂基础日粮,低、中、高剂量组分别饲喂含有5,10,15 g/kg姜黄的基础日粮。试验期共42 d,分别在肉鸡21日龄、42日龄称质量和屠宰采样,测定各组肉鸡生长性能、屠宰性能、血清生化指标、肝脏指数、肝脏抗氧化指标及抗氧化相关基因的表达。【结果】①与对照组相比,1~21日龄时,低、中、高各剂量组肉鸡的平均日增重显著升高(P<0.05),平均日采食量无显著差异(P>0.05),仅低剂量组的料重比显著降低(P<0.05);22~42日龄时,仅低剂量组肉鸡的平均日增重显著升高(P<0.05),且料重比显著降低(P<0.05)。②与对照组相比,低、中、高各剂量组肉鸡的全净膛率、半净膛率、腿肌率和腹脂率均无显著变化(P>0.05),仅低、中剂量组肉鸡的胸肌率显著升高(P<0.05)。③与对照组相比,只有低剂量组肉鸡血清中的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平在42日龄时显著升高(P<0.05),其余各组肉鸡血清中的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和HDL-C水平在21日龄和42日龄时均无显著变化(P>0.05)。④与对照组相比,基础日粮中添加不同剂量姜黄对肉鸡肝脏指数无显著影响(P>0.05)。⑤与对照组相比,21日龄时,各组肉鸡肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量均无显著差异(P>0.05);42日龄时,低、中、高各剂量组SOD、GSH-Px活性较对照组均显著升高(P<0.05),MDA含量仅低剂量组显著降低(P<0.05)。⑥与对照组相比,21日龄时,低、中剂量组肉鸡肝脏中Nrf2、HO-1 mRNA的表达显著升高(P<0.05),高剂量组仅Nrf2的表达显著升高(P<0.05);42日龄时,低剂量组肉鸡肝脏中Nrf2、HO-1 mRNA的表达显著升高(P<0.05),中、高剂量组仅HO-1的表达显著升高(P<0.05)。【结论】本试验条件下,基础日粮中添加5 g/kg姜黄能显著提高白羽肉鸡的生长性能,提高肝脏抗氧化能力。

连翘苷抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对炎症因子表达的抑制作用

探讨连翘苷对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)增殖及对炎症相关细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测连翘苷对鸡胚成纤维细胞DF-1的安全质量浓度为0~125.00μg·mL^(-1),并筛选出最佳的给药方式为:先感染病毒再给药连翘苷.采用半数组织培养感染剂量(TCID50)检测MDRV在DF-1细胞中的增殖情况,结果表明,给药24~48 h时,连翘苷能使MDRV滴度极显著下降(P<0.01).采用实时荧光定量PCR检测连翘苷对DF-1细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的结果表明:与对照组相比,MDRV攻毒组促炎因子基因IFN-β、TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子基因CCL20、IL8L1、IL8L2、K203、SCYA4在给药24~48 h时的表达量显著升高(P<0.05);与MDRV攻毒组相比,连翘苷处理组促炎因子基因IFN-β、TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子基因CCL20、IL8L1、IL8L2、K203、SCYA4在给药24~48 h时的表达量显著下降(P<0.05).综上,连翘苷能抑制MDRV在DF-1细胞中的增殖,并降低细胞炎症因子基因的表达水平,具有良好的抗病毒和抗炎的双活性.

姜黄素通过SIRT1/FOXO1通路缓解玉米赤霉烯酮诱导的猪肾上皮细胞氧化损伤

【目的】探究姜黄素(Cur)对玉米赤霉烯酮(ZEA)诱导猪肾上皮细胞(PK-15)氧化损伤的保护作用,并基于SIRT1/FOXO1信号通路阐明其作用机制,为姜黄素的兽医临床应用提供依据。【方法】试验分为5组:对照组、ZEA组(36.55μg·mL^(-1)ZEA)、Cur 6.25组(36.55μg·mL^(-1)ZEA+6.25μmol·L^(-1)Cur)、Cur 12.5组(36.55μg·mL^(-1)ZEA+12.5μmol·L^(-1)Cur)、Cur 25组(36.55μg·mL^(-1)ZEA+25μmol·L^(-1)Cur);通过MTT法测定ZEA的半数抑制浓度和Cur对PK-15细胞的最大安全浓度;使用倒置显微镜观察PK-15细胞的形态变化;采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及丙二醛(MDA)的水平;qRT-PCR检测细胞SIRT1、FOXO1、CAT、Mn-SOD的mRNA水平;Western Blot检测SIRT1、FOXO1和Acetyl-FOXO1蛋白的表达量。【结果】ZEA的IC50为36.55μg·mL^(-1),Cur的最大安全浓度为25μmol·L^(-1);与对照组相比,ZEA极显著降低PK-15细胞活力(P<0.01),极显著提高ROS和MDA水平(P<0.01),极显著降低SOD、CAT活性(P<0.01);与ZEA组对比,不同浓度的Cur(6.25、12.5、25μmol·L^(-1))显著提高PK-15细胞的存活率(P<0.05),改善细胞形态;极显著(P<0.01)降低ZEA诱导的ROS和MDA水平;极显著升高细胞内SOD和CAT活性(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,ZEA降低SIRT1 mRNA表达量,极显著升高FOXO1 mRNA表达量(P<0.01),升高Mn-SOD mRNA表达量,极显著降低CAT mRNA表达量(P<0.01)。与ZEA组对比,各Cur组不同程度的升高SIRT1和CAT的mRNA表达量,极显著的降低FOXO1的mRNA表达量(P<0.01);极显著升高Mn-SOD的mRNA表达量(P<0.01)。Western Blot结果表明,与对照组对比,ZEA显著降低SIRT1蛋白表达(P<0.05),极显著升高Acetyl-FOXO1蛋白表达(P<0.01);与ZEA组对比,各Cur组均极显著升高SIRT1蛋白表达(P<0.01),极显著降低Acetyl-FOXO1蛋白表达(P<0.01)。【结论】Cur可以上调SIRT1的表达,降低FOXO1的乙酰化水平,诱导抗氧化酶Mn-SOD和CAT的表达,从而清除ROS,降低MDA水平,减轻ZEA对PK-15细胞的氧化损伤作用。

黄芪多糖对玉米赤霉烯酮诱导鸡胸腺细胞凋亡的保护作用

为了探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)诱导的鸡胸腺细胞凋亡的影响,试验以鸡原代胸腺细胞为材料,采用MTT法检测APS对鸡胸腺细胞的安全浓度;选取50,100,200,400μg/mL APS分别与ZEA同时处理胸腺细胞48 h,并设置细胞对照和ZEA模型对照,MTT法检测细胞存活率;应用实时荧光定量PCR法检测内质网应激和细胞凋亡相关基因mRNA的表达。结果表明:APS对鸡胸腺细胞的安全浓度为50~400μg/mL;与细胞对照比较,ZEA模型对照能极显著降低细胞存活率(P<0.01),且GRP78、ATF6、ATF4、Caspase-3、Bax基因mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),Bcl-2基因mRNA相对表达量极显著下降(P<0.01);与ZEA模型对照比较,不同浓度APS+ZEA能显著或极显著提高细胞存活率(P<0.05或P<0.01),且GRP78、ATF6、ATF4、Caspase-3、Bax基因mRNA相对表达量极显著下降(P<0.01),Bcl-2基因mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。说明APS可通过抑制ZEA诱导的细胞凋亡,恢复胸腺细胞的活性,起到保护作用。

猪非典型瘟病毒的基因组特征分析及荧光定量RT-PCR检测方法的建立

最近的研究表明,猪非典型瘟病毒(APPV)在我国猪群流行,并造成了严重的危害。本研究应用RT-PCR方法对APPV GD3株进行了全基因组扩增、测序,并进行了全基因组及其部分编码基因的遗传演化分析;根据APPV基因组编码的结构蛋白E2的基因序列,构建了APPV的荧光定量RT-PCR检测方法。APPV GD3株的全基因组序列与德国、美国、荷兰和西班牙毒株在不同的进化分支上,同源性为83.1%~83.4%;与中国毒株GD1、GD2和GD的同源性分别为99.5%、99.6%和83.4%。GD3株编码的E2、Npro和Erns基因与国内外现有毒株的同源性分别为83.1%~99.7%、80.2%~99.8%和81.9%~99.5%。本研究建立的荧光定量RTPCR检测方法特异性强、最低检测浓度为10 copes/L、操作简单、耗时短,具有良好的兽医临床应用前景。

海南黑山羊IFITM3基因组织特异性表达和分布的研究

干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在机体抗病毒和抗炎等方面发挥重要作用。为深入研究山羊IFITM3在病毒感染中的分子作用机制,对获得的海南黑山羊IFITM3基因进行了序列分析并采用RT-qPCR方法进行了其组织特异性表达的检测,利用原核表达的IFITM3蛋白制备了多克隆抗体,并进行IFITM3在黑山羊组织中分布的研究。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由147个氨基酸组成,存在2个潜在跨膜区,不含信号肽。成功构建pET-32a(+)-IFITM3表达载体并表达了35 ku重组蛋白,免疫家兔后,经ELISA和Western-blot检测,获得的多克隆抗体特异性好。组织特异性表达的检测结果表明,IFITM3在心脏表达水平最高,大脑和胸腺表达量最低。IFITM3在心肌细胞、肝细胞、脾网状内皮细胞、肺支气管上皮细胞、肾小管上皮细胞、大脑皮质、胸腺髓质、肠系膜淋巴结皮质淋巴细胞、胃底腺细胞和肠腺细胞中均有分布。研究结果为深入探讨IFITM3在山羊疾病中的分子作用机制提供了基础数据。

山羊NLRP3基因的克隆及其在DF-1细胞中的表达

为了解山羊NLRP3基因及其编码蛋白的生物学信息,采用RT-PCR扩增了海南黑山羊NLRP3基因并进行了序列及其编码蛋白的结构分析,构建了pIRES2-EGFP-NLRP3真核表达载体,并将其转染至DF-1细胞中进行了表达。结果表明,NLRP3基因在物种内的同源性高,种间同源性低,编码的蛋白由1 031个氨基酸组成,存在3个潜在跨膜区,分别为第401~419、435~453和884~904位氨基酸,不含信号肽;辣根过氧化物酶单层细胞免疫化学检测证实,构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-NLRP3在DF-1细胞中成功表达。本研究结果为建立NLRP3专性表达细胞系及深入研究NLRP3在山羊抗感染免疫的机制奠定了基础。

猪NLRP3基因克隆及其在DF-1细胞的表达

NLRP3蛋白作为NLRP3炎性小体的主要组成蛋白之一,在机体对抗病原微生物和炎症反应中起着重要作用。为了深入研究猪的NLRP3蛋白在炎性疾病发生过程中的作用机制,采用PCR的方法扩增了长白猪NLRP3基因,并对其序列和编码蛋白的结构进行了分析。构建了pIRES2-EGFP-NLRP3真核表达载体,并转染至DF-1细胞中进行表达。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由1 036个氨基酸构成,存在4个潜在跨膜区,分别是第401~419,第721~739,第775~795和第889~910位氨基酸,不含信号肽。单层细胞免疫化学检测结果显示,重组质粒pIRES2-EGFP-NLRP3成功转染并在细胞中表达。本研究为深入探讨炎症小体在猪炎症性疾病的作用机制提供了基础数据。

连翘水提液体外抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对细胞凋亡的保护作用

连翘是中药配方的重要组分之一,具有良好的抗病毒活性,但其对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的作用尚未得到深入评估.为评估连翘体外MDRV增殖及对鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞凋亡的保护作用,通过四唑盐(MTT)法检测连翘水提液的安全浓度,并从3种给药方式中筛选出连翘水提液的最佳给药方式.在最佳给药方式下,通过半数细胞培养感染剂量(TCID_(50))检测MDRV在DF-1细胞的增殖情况,并采用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因mRNA的表达情况.结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度为0.25-4 mg/mL,最佳给药方式是先感染病毒再加中药,在此给药方式下,连翘水提液能极显著降低MDRV在24-48 h的病毒滴度(P<0.01).与对照组相比,MDRV攻毒组细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著上调(P<0.01),凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著上调(P<0.01)而Bcl-2表达极显著下调(P<0.01);与MDRV攻毒组相比,连翘水提液处理组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著下调(P<0.01),凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著下调(P<0.01)而Bcl-2表达极显著上调(P<0.01).可见,连翘可以抑制MDRV在DF-1细胞中的增殖,并对MDRV引起DF-1细胞凋亡起到了缓解作用,具有良好抗病毒的活性,结果为进一步筛选出抗MDRV的候选药物提供了基础数据.

三黄鸡IFITM3基因的克隆及其真核表达载体的构建

为研究禽类干扰素诱导跨膜转运蛋白(interferon-induced transmembrane proteins,IFITMs)基因抗流感病毒的功能和分子机制,用PCR扩增了三黄鸡IFITM3基因并进行序列测定及其编码蛋白的结构分析。在此基础上,构建了pIRES2-EGFP-IFITM3真核表达载体并转染至DF-1细胞。分析结果显示,该基因随物种发育进化地位的不同而表现出种属间差异性,编码蛋白由113个氨基酸构成,存在2个潜在跨膜区,不含信号肽。转染结果显示,pIRES2-EGFP-IFITM3真核表达载体在DF-1细胞中成功表达。研究结果为构建IFITM3专性表达细胞系及三黄鸡IFITM3蛋白抗病毒分子机制的研究奠定了基础。

山羊GSDM家族相关基因的克隆及细胞焦亡效应蛋白GSDMD-NT的原核表达

为了解GSDM家族蛋白在山羊疾病发生过程中的作用,采用RT-PCR方法克隆了海南黑山羊GSDM家族相关基因,并对其进行序列及编码蛋白结构分析;基于对GSDMD的氨基酸序列分析,寻找到了其Caspases切割位点,扩增了GSDMD-NT序列,并将其克隆至原核表达载体进行诱导表达。结果显示,海南黑山羊GSDM家族基因种间同源性低,都存在Gasdermin超家族结构域,是结构保守蛋白;His标签GSDMD-NT的原核表达质粒经诱导后表达出51.2 ku的融合蛋白,该蛋白可以与抗His标签的单克隆抗体发生特异性反应。本研究结果为GSDM家族蛋白功能的物种间比较研究提供了基础数据,也为进一步探究GSDMD-NT诱导细胞焦亡的机制奠定了基础。

17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

为探讨17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制，将小鼠胸腺上皮细胞系（MTEC1）细胞经不同浓度的17β-雌二醇处理24h后，采用CCK-8法检测细胞增殖活力的变化；流式细胞术检测细胞周期的变化；Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况：DAPI染色法检测细胞核形态的变化；高通量测序技术获得差异基因表达谱并运用KEGG通路分析预测差异基因的作用通路；String基因互作分析差异基因的相互作用；实时荧光定量PCR验证p53通路相关基因的表达情况。结果显示，17β-雌二醇显著抑制MTEC1细胞的增殖活力，并呈浓度依赖性；使细胞周期出现G2／M期阻滞：能诱导MTEC1细胞凋亡，细胞核呈现不规则形态、核碎片、染色质凝聚和凋亡小体等典型的凋亡特征；KEGG通路分析显示，与细胞增殖和凋亡密切相关的p53信号通路呈极显著性差异：String基因互作分析显示，p53信号通路的相关基因互相作用，形成紧密联系的网络；p53信号通路的下游周期基因Cyclin B1表达下调，凋亡相关基因Trp53、Gadd45a、Fas、p21、Apaf1和Bax的表达水平显著上调。结果提示，雌激素可能通过p53信号通路对MTEC1细胞的增殖抑制、周期阻滞和细胞凋亡产生影响。

BALB/c小鼠SLIT2和ROBO4基因组织特异性表达与分布的研究

SLIT2/RO BO4信号通路在炎症血管反应、白细胞渗出和血管再生等方面发挥重要作用。为深入了解SLIT2/ROBO4信号转导途径在炎症性疾病发生发展过程中的作用机制,本研究采用RT-q PCR和免疫组织化学的方法对SLIT2和ROBO4基因在BALB/c小鼠组织特异性的表达和分布进行了研究。结果表明：SLIT2在肾脏、心脏、肺脏和大脑中表达相对较高,在肾脏表达量最高;ROBO4在心脏、肝脏、肺脏和肾脏中表达相对较高,在心脏中表达量最高。免疫组织化学检测表明,SLIT2和ROBO4在心肌细胞、肝细胞、脾脏的内皮细胞、肺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞和大脑皮质神经元中表现出相似的阳性定位。研究结果为深入探讨SLIT2/ROBO4信号通路在炎症性疾病发生发展和调控中的分子作用机制提供了基础数据,也为发展基于该通路的器官特异性炎症治疗策略提供了科学依据。

我国1984-2014年羊口疮报道文献的统计分析

羊口疮是严重危害养羊业的病毒性疾病之一,回顾性数据对该病的综合防控具有重要意义。本文对1984-2014年报道的羊口疮文献进行了统计分析,对其年度流行病例数、地理分布、发病原因、诊断方法、预防治疗方案及病原学研究等数据进行了深入的分析,旨在为该病的综合防控提供回顾性和指导性数据,也为相关部门制定该病综合防控措施提供理论依据。

姜黄素对玉米赤霉烯酮诱导的猪肾上皮细胞凋亡的保护作用

为探究姜黄素(Cur)对玉米赤霉烯酮(ZEA)诱导的猪肾上皮细胞(PK-15)凋亡的影响及其可能的保护机制,体外培养PK-15细胞,给予玉米赤霉烯酮和不同浓度姜黄素(6.25、12.5、25μmol/L)处理24 h,通过MTT法测定姜黄素和ZEA对PK-15细胞活力的影响;荧光显微镜观察Hoechst 33342活细胞染色判断细胞凋亡情况;JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化;试剂盒检测细胞上清液中LDH活性;实时荧光定量PCR测定细胞中的Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA表达水平;Western blot测定Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平.结果表明,浓度在25μmol/L以下的姜黄素对PK-15细胞几乎没有毒性,ZEA的半数抑制浓度(IC50)为36.55μg/mL;姜黄素极显著提高ZEA降低的PK-15细胞活力(P<0.01),缓解ZEA引起的细胞凋亡,极显著降低ZEA诱导的LDH活性(P<0.01),显著降低ZEA引起的线粒体膜电位丢失(P<0.01);ZEA极显著(P<0.01)升高细胞中Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表达,极显著(P<0.01)降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达;与ZEA组比较,+Cur6.25组的Bax mRNA表达量和Bax、Caspase-3蛋白表达均极显著(P<0.01)降低,Bcl-2的蛋白表达极显著(P<0.01)降低,+Cur12.5组显著降低了Bax和Caspase-3的mRNA表达(P<0.05),极显著(P<0.01)降低Bax和Caspase-3的蛋白表达,极显著升高了Bcl-2的mRNA表达和蛋白表达(P<0.01),+Cur25组的Bcl-2的mRNA表达量和蛋白表达量极显著(P<0.01)的升高,Caspase-3的mRNA表达和蛋白表达极显著(P<0.01)降低.本研究表明ZEA诱导PK-15细胞发生凋亡,姜黄素可通过抑制线粒体凋亡途径减轻其诱导的细胞凋亡,从而起到保护作用提高细胞活力.