EMT与肿瘤

上皮细胞向间质细胞的转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是哺乳动物胚胎发育过程中的生理现象,也是维系生命体组织平衡的基本生物事件。目前的研究表明成熟组织中不适当的EMT对多种肿瘤的发展进程具有重要的影响。EMT可促进肿瘤细胞的浸润以及肿瘤的转移,还可能使肿瘤细胞逃逸某些因素诱导的凋亡。本文综合目前的研究进展,旨在阐述EMT与肿瘤的关系以及EMT发生的分子机制。

神经干细胞向多巴胺能神经元分化机制的研究进展

帕金森病是中脑黑质的多巴胺能神经元缺失引起的慢性中枢神经系统功能失调。目前,应用神经干细胞在体内外分化成多巴胺能神经元是帕金森病细胞替代治疗的重要途径。本文综合近十年来的研究进展,对神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程中重要的分子机制、信号通路以及外界影响因素进行综述。

CCK-8和MTS法检测人羊膜上皮细胞增殖的比较

目的探讨CCK-8、MTS两种不同的四唑盐试剂在羊膜上皮细胞增殖检测中的最适实验条件,并比较两者细胞毒性。方法取体外培养对数生长期羊膜上皮细胞,用完全培养基（DMEM/F12＋10%胎牛血清）配制成不同浓度的细胞悬液加入96孔板中培养24 h,分别加入CCK-8、MTS后于450 nm、492 nm波长处测定光密度（OD）。在同一细胞浓度下,根据同一波长不同时间检测的OD确定CCK-8的最佳孵育时间。取体外培养的对数生长期羊膜上皮细胞分别用DMSO、CCK-8、MTS处理1 h、2 h、3 h和4 h后,继续培养24 h,在450 nm处以CCK-8检测细胞增殖,并通过台盼蓝染色计数活细胞数。结果 CCK-8法的最佳波长为450 nm,MTS法的最佳波长为492 nm。CCK-8法灵敏度稍低于MTS法。1~4 h内,CCK-8试剂与待检测细胞最佳孵育时间为4 h。CCK-8法对细胞增殖影响及细胞毒性均小于MTS法。结论 CCK-8法是一种更为方便、细胞毒性作用较小的试剂。

骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究

目的:采用地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C3种物质作为诱导骨髓间充质干细胞(bonemarrow stromal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化的基本辅剂,定向诱导犬第2代BMSCs,探讨BMSCs向成骨细胞分化的潜能和成骨细胞的特征性鉴定方法。方法:无菌条件下行犬髂骨穿刺,采集骨髓15～20mL,全骨髓10%FBS DMEM培养液进行原代培养。将第2代纯化的BMSCs细胞悬液(调整细胞密度为1×105/mL)接种于含地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C的DMEM/FI2培养液的培养瓶(皿)中,体外扩增培养、传代。对细胞形态特征进行观察;行碱性磷酸酶(ALP)染色,骨桥素以及Ⅰ型胶原相关蛋白免疫荧光化学检测鉴定细胞性质。结果:原代培养的BMSCs形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长。诱导分化后的细胞形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长,传代后细胞体积略变大;BMSCs成骨诱导增殖后电镜下细胞呈多边形,可见ALP染色阳性;经成骨细胞诱导培养14d后,细胞骨桥素以及Ⅰ型胶原相关蛋白表达阳性。结论:BMSCs易于体外分离培养及扩增,地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C体外定向诱导能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。

新生大鼠低氧缺血性脑损伤对脑组织病理形态和神经营养因子的影响

目的改进新生大鼠低氧缺血性脑损伤(HIBI)模型的制作方法,观察低氧缺血对脑组织病理形态和神经营养因子的影响。方法大鼠随机分为空白对照组(n=5)、假手术组(n=8)和HIBI模型组(n=19),HIBI模型制作中省去了经典Rice法中的麻醉步骤和动物手术后休息时间,观察HIBI后大鼠体重增长情况,行为能力表现以及脑组织病理形态学改变;比较HIBI制模后3 d假手术组及HIBI组鼠脑匀浆beta-NGF和human-NT3的变化。结果 (1)HIBI模型组体重增长明显落后于空白对照组和假手术组(P<0.01);(2)HIBI组全部出现不同程度的行为异常:84%翻身不能,63%肌肉颤动和/或头颤,抽搐者占42%,死亡率为21%。制模后3 d HIBI模型组大鼠的行为障碍和异常运动的发生率均明显低于制模当日(P<0.01);(3)HE染色可见HIBI模型组大鼠左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生;(4)制模后3 d鼠脑匀浆human-NT3含量较假手术组增加(P<0.05);β-NGF含量无明显变化。结论制作的新生大鼠HIBI模型更符合临床新生儿HIBI的自然病程。HIBI早期神经营养因子表达增加在神经保护机制中发挥重要作用。

犬骨髓基质干细胞源性血管内皮样细胞的诱导分化及细胞特征鉴定

目的采用血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导犬骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs),探讨BMSCs向内皮细胞(endothelial cells,ECs)分化的潜能和内皮细胞的特征性鉴定方法。方法采集犬髂骨骨髓15～20 mL,全骨髓10%FBS DMEM培养液进行原代培养。将第2代纯化的BMSCs细胞悬液接种于含VEGF、bFGF的DMEM/F12培养液(细胞接种密度为1×106.mL-1)体外诱导培养。对细胞形态特征进行观察,对诱导分化的细胞行CD31、vWF、VEGFR-2荧光免疫蛋白检测。结果原代培养的BMSCs形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长。诱导分化后的细胞光镜下单层融合生长,呈铺路石样形态;电镜下细胞呈多边形,可见特征性的Weibel-Palade小体;经成血管内皮细胞诱导培养7～14 d后,BMSCs诱导分化细胞CD31、vWF和VEGFR-2的表达呈阳性。结论犬BMSCs易于体外分离培养及扩增,经VEGF、bFGF体外定向诱导后的细胞具有血管内皮细胞的特征且细胞纯度高、数量大。

高中英语阅读教学点滴谈

阅读教学在英语教学中有非常重要的地位，以学生实践为基础来引导学生多看、多读、多练，通过一系列阅读培养学生阅读的技能，提高学生运用语言的能力。阅读课以培养学生的阅读能力为主要的教学目标。

换热器板束矫直过程试验与数值研究

提高换热器板束加工后的平直度已成为板束加工中需要迫切解决的问题。采用数值模拟方法,对板束矫直机理和矫直效果进行研究。首先,构建换热器板束有限元仿真模型,通过矫直实验验证有限元模型的正确性;然后,通过有限元矫直过程的模拟,分析板束在矫直过程中各路径上的应力、应变分布规律;最后,对影响矫直效果的上辊压下量和板束初始弧高进行影响因素分析。结果表明:利用有限元法可以准确模拟实验矫直过程,板束矫直中各路径应力、应变分布呈现高低起伏的波浪形状态,且上辊压下量对板束矫直效果影响较大,选用压下量为0.2mm时的板束矫直效果最好。

浅析建筑施工企业项目成本控制

建筑施工企业的产品主要面对的是整个工程的项目,因此建筑施工的主要管理防治的内容就是对施工项目的成本管理。只有从根源上对工程项目施工的过度消耗控制好,才能够在工程量清单计价的条件下能够做好施工项目成本管理。本文解释施工企业的项目工作,重点介绍了建筑施工企业的成本管理的主要方法。

培养基中细胞生长因子增强人间充质干细胞成瘤性风险

目的本中心在人间充质干细胞(hMSCs)第三方复核检验中发现某些无血清培养基会促使hMSCs在软琼脂克隆试验中呈现阳性结果。为进一步明确该现象,探索促使hMSCs软琼脂克隆阳性的培养基成分并深入分析其风险。方法比较几种不同品牌的商品化无血清培养基对hMSCs软琼脂克隆形成的影响,通过细胞因子抗体芯片和ELISA定量检测筛选并初步确定促使软琼脂克隆形成的培养基成分,通过在培养基中添加特定成分进一步明确该成分对hMSCs成瘤性的影响,并通过长期添加试验和细胞转录组测序分析该培养基成分持续作用对hMSCs生长和基因转录方面的影响。结果研究结果显示,部分品牌无血清培养基可促使hMSCs在软琼脂克隆形成试验中呈现阳性。培养基成分分析显示这些培养基中表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)呈现出较高水平。在含10%FBS的完全培养基中分别或组合添加EGF(50 ng/ml)、bFGF(50 ng/ml)和PDGF-BB(10 ng/ml),均可促使hMSCs软琼脂克隆形成。以上述浓度添加生长因子持续培养hMSCs 10代后,再撤掉生长因子继续培养3代,细胞增殖和基因转录发生显著改变。结论培养基中含有的高浓度EGF、bFGF和PDGD-BB等生长因子成分能够增强hMSCs成瘤性风险,用这些生长因子长期培养hMSCs可对细胞增殖和基因转录造成显著影响。本研究提示在hMSCs类细胞治疗产品工艺研发中,需高度关注培养基关键成分对hMSCs特性的影响,结合成瘤性分析优化并筛选最适培养基。

家庭医生精准履约卫生院蜕变成省级标杆

基层医疗机构实行家庭医生签约服务已有数年,为解决签约服务质量不高甚至签而不约的问题,淄博市淄川区黑旺卫生院提出家庭医生预约入户服务理念,创新实施“精准履约”服务模式,有效解决签而不约、履约服务不到位的问题,让国家的基本公共卫生服务和家庭医生签约服务有效覆盖辖区居民,促进医卫融合发展,提升卫生院服务能力。

荣成市城市供水对环境的影响

本文调查研究了荣成市从小城镇发展到小城市的过程中城市供水发展问题，总结分析了城市供水对环境的改善作用和不良影响及其防治对策．得出结论是；有利影响是主要的，不利影响是可以防治的。同时，本文对21世纪荣成市由小城市发展为中等城市的供水问题、环境问题进行了初步预测与探讨。

基于免疫调控功能的间充质干细胞生物学有效性质量评价策略

间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一类具有自我更新/多向分化潜能和独特免疫调控功能的成体干细胞,并已成为近年来临床研究中发展最为迅速的干细胞类型。由于其独特的免疫调控功能,MSC已被用于治疗多种类型的免疫异常或炎症反应失控所致的疾病。MSC在不同类型的炎症环境中,可由静息状态转变成激活状态,通过细胞间相互作用和分泌可溶性免疫调控因子,调节多种免疫细胞的增殖、分化、活化以及炎症因子的分泌功能。MSC的免疫调控功能是其临床应用中重要的生物学有效性质量属性,对这一质量属性的有效评价,是指导MSC产品研发及临床应用中最为相关的质量控制内容之一。本文综述了近年来人们对MSC免疫调控功能的认识及其与临床应用的相关性,在此基础上提出了针对治疗性MSC产品免疫调控功能的评价策略,为在我国建立和完善MSC生物学有效性评价体系奠定基础。

硅化超顺磁氧化铁纳米颗粒标记人羊膜间充质细胞的效率及其对细胞增殖的影响

旨在探讨一种新型硅化超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记人羊膜间充质细胞的最佳方法,并检测其对细胞增殖的影响.用不同浓度的Si-SPIO和多聚赖氨酸混合制备PLL-Si-SPIO复合物,标记体外培养的hAMCs.利用普鲁士蓝染色和透射电子显微镜等方法对Si-SPIO的标记情况进行分析鉴定.分析Si-SPIO标记后1~4周铁颗粒在细胞内的维持与稳定.应用MTS分析法探讨经Si-SPIO标记后hAMCs的增殖活性.Si-SPIO标记后的hAMCs移植到小鼠纹状体内1周,鉴定Si-SPIO阳性细胞的存活与分布.观察发现,hAMCs经Si-SPIO标记后细胞内可检测到大量铁颗粒,铁颗粒能在细胞内维持4周以上.Si-SPIO标记具有浓度依赖性,最适浓度为20μg/mL;较低浓度的Si-SPIO对细胞增殖活力没有显著影响.移植到小鼠脑内1周后可见Si-SPIO阳性细胞.结果可知,浓度为20μg/mL的Si-SPIO标记hAMCs可获得良好的标记效果,并且不影响细胞的增殖活力.

固本止咳中药对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺功能及呼吸道分泌sIgA的影响

目的:观察固本止咳中药对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠肺功能及呼吸道分泌分泌型免疫球蛋白(sIgA)的影响。探讨固本止咳中药治疗COPD的作用机制。方法:采用鼻腔滴入脂多糖(LPS)加熏香烟的方法建立COPD小鼠模型,实验分为空白对照组、模型对照组、固本止咳中药组;运用HE染色、电镜对形态学进行观察,评价COPD小鼠模型;使用动物肺功能仪分析系统检测小鼠肺功能;应用ELISA方法检测小鼠气道sIgA分泌水平。结果:COPD小鼠模型形态学结果符合COPD临床病理形态学改变;肺功能实验显示FEV0.1、FEV0.2、FEF25-75、PEF模型对照组较空白对照组显著性降低(P<0.05),固本止咳中药组较模型对照组显著性增高(P<0.05);气道sIgA分泌水平模型组较空白对照组显著性降低(P<0.05),固本止咳中药组较模型对照组显著性升高(P<0.05)。结论:固本止咳中药对COPD模型小鼠小气道功能及局部黏膜状态有一定的改善作用。

人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞质量控制研究

人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)移植是目前被认为最有希望延缓或治愈视网膜变性疾病的治疗策略,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的RPE细胞(human embryonic stem cells-derived RPE,hESC-RPEs)可为RPEs移植提供数量充足、质量可控的细胞来源。为确保hESC-RPEs临床应用的安全性、有效性和稳定性,这类细胞在临床前研究阶段需满足明确的细胞鉴别特征、RPEs基本生物学特征、微生物学安全性、生物学安全性及生物学有效性的总体质量要求,而每一类总体质量要求是由多个关键质量属性要求组成。考虑到人ESCs来源因素,hESC-RPEs细胞生物学安全性需考虑终未分化的RPEs中的hESCs残留问题。现就hESC-RPEs细胞总体质量要求及各相关质量属性进行讨论,目的是帮助在我国建立临床研究用hESC-RPEs质量控制评价体系,和探索适合于所有hESCs诱导分化细胞临床前阶段质量评价的基本方法。

基于吲哚胺2,3-双加氧酶1活性评价人间充质干细胞免疫调控功能的吸光光度法的建立及优化

目的建立一种基于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速评价人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)免疫调控功能的吸光光度法,并进行优化。方法以含干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的完全培养基激活hMSCs,收集hMSCs培养上清,与三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和对二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)反应,检测A492值,通过标准曲线计算样品中色氨酸代谢产物犬尿氨酸(kynurenine)的含量,以反映h MSCs所分泌IDO1的酶代谢活性,并对方法中的培养体系(6、12、24、48、96孔板)、IFNγ处理时间(4、8、12、24 h)、培养基使用量(150、200、250、300、350、400、450及500μl)及IFNγ作用浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、5.0及10.0 ng/ml)进行优化。同时验证方法的特异性,并检测样品保存条件及液氮冻存后不同复苏时间对kynurenine浓度的影响。采用优化后的方法分析不同来源、不同代次的hMSCs分泌IDO1的能力。结果确定最佳检测条件为:培养体系为48孔体系,IFNγ处理时间为24 h,培养基使用体积为200μl,IFNγ作用浓度为10.0 ng/ml。该方法可特异性检测IDO1的活性;除常温外,其他样品保存条件对检测结果影响较小;液氮冻存后复苏24 h可检测到与冻存前水平相当的kynurenine。该方法可有效判断不同供体来源的hMSCs在分泌IDO1功能上的差异。结论该方法可快速、特异、稳定地检测hMSCs分泌IDO1的水平,且操作简便,可用于快速评价h MSCs的免疫调控功能。

临床研究用人胚胎干细胞“种子细胞”的质量评价

人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)具有自我更新和三胚层细胞分化的潜能,在特定代次处于未分化状态的hESCs可作为"种子细胞",在体外诱导分化成不同的功能细胞以适用于不同的临床适应症。为确保hESCs诱导分化的功能细胞在临床应用的安全性及有效性,hESCs作为"种子细胞"需具备明确的鉴别特征、多能性、分化潜能和微生物学安全性等质量属性,现就这些质量属性进行讨论,目的是为在我国建立hESCs"种子细胞"质量控制标准提供参考。

人羊膜间充质细胞对异体外周血淋巴细胞的免疫抑制作用

目的探讨人羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal cells，hAMCs）对异体外周血淋巴细胞的免疫抑制作用，阐明人羊膜间充质细胞调节移植免疫排斥的作用机制。方法从新鲜足月剖宫产废弃咱勺羊膜组织分离出hAMCs并进行鉴定。采用密度梯度离心从健康志愿者外周血中分离出单个核淋巴细胞（PBMLs），在植物血凝素（PHA）刺激下，分别按1：0．05，1：0．10，1：0．20的比例以hAMCs处理，MTS法检测淋巴细胞的增殖，ELISA法检测细胞因子IFN．1、TNF-α的分泌。结果hAMCs能明显抑制异体外周血淋巴细胞的增殖，hAMCs与PBMLs比值为0．05：1，0．10：1，0．20：1时的增殖抑制率分别为16．91％、20．83％、28．19％。hAMCs还可显著抑制异体淋巴细胞IFN-1和TNF-α的分泌（P〈0．01），并且在一定范围内随着hAMCs数量的增加抑制作用更加明显。结论hAMCs能抑制异体淋巴细胞增殖并降低淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌，这可能是其预防和减轻移植排斥反应发生的机制之一。

人羊膜间充质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究

目的 观察人羊膜间充质细胞（humanamnionmesenchymalcells，hAMCs）体外诱导向成骨细胞分化，为骨组织工程提供种子细胞。方法从剖宫产后废弃的人羊膜组织分离培养hAMCs，经成骨细胞诱导条件培养基诱导后，对细胞形态特征、碱性磷酸酶、骨桥素、骨钙素表达以及I型胶原分泌进行观察和检测。结果原代培养的hAMCs形态呈长梭形或不规则形，呈均匀分布生长，传代后细胞体积略变大，约5～7d传代1次。经成骨细胞诱导培养15d后，hAMCs碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥素的表达呈阳性，并且检测有I型胶原分泌。结论hAMCs易于体外分离培养及扩增，体外成骨细胞定向诱导的hAMCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征，是良好的骨组织工程种子细胞。