1株产VB_(12)球形赖氨酸芽孢杆菌C5.1的分离、全基因组测序及分析

为深入探究球形赖氨酸芽孢杆菌C5.1(Lysinibacillus sphaericus C5.1)菌株产VB_(12)的作用机制,利用PacBio Sequel和Illumina NovaSeq PE150相结合的方法对C5.1菌株进行全基因组测序,并对测序数据进行拼接、基因预测及功能注释。结果表明,C5.1菌株基因组为一个环状DNA,不含质粒,大小为4690817 bp,GC含量为37.21%,预测得到4756个编码基因,111个tRNA基因和34个rRNA基因。通过基因本体论、直系同源集、京都基因与基因组百科全书和转运蛋白分类数据库对C5.1菌株基因组进行注释分析,分别匹配到3095、3182、4374个和397个基因。进一步分析发现C5.1菌株基因组中包含从尿卟啉原Ⅲ逐步转化合成VB_(12)的关键酶。本研究为解析C5.1菌株在臭腐乳发酵过程中的代谢机理提供遗传信息基础,也为今后开展发酵食品中VB_(12)的生物合成机制研究提供理论支撑。

基于DNA分析的特色乳掺假检测技术研究进展

近年,特色乳中检出非标称物质的舆情时有爆出,特色乳的掺假检测是保证市场监管的重要技术支撑。DNA分析检测技术是食品真实性鉴别中常见且有效的手段,在特色乳的掺假检测中也具有优势。本文就特色乳概况及常用的DNA检测技术在特色乳掺假检测中的应用进行综述:从标记DNA靶基因出发,按照定量与定性的需求进行分类,分析不同技术的原理,并以近年在特色乳检测中的具体应用为例,对目的基因、检测方法、灵敏度和应用场景进行介绍,探讨各种检测技术的优势与局限性,以期为特色乳的质量把控提供参考。

我国速冻面米食品行业质量调研报告

速冻食品生产许可证（QS）审查细则中将速冻食品的申证单元分为2个,即速冻面米食品和速冻其他食品。其中,速冻面米食品是指以面粉、大米、杂粮等粮食为主要原料,也可配以肉、禽、蛋、水产品、蔬菜、果料、糖、油、调味品等为馅（辅）料,经加工成型（或熟制）后,采用速冻工艺加工包装并在冻结条件下贮存、运输及销售的各种面、米制品。根据加工方式,速冻面米食品可分为生制品（即产品冻结前未经加热成熟的产品）、熟制品（即产品冻结前经加热成熟的产品包括发酵类产品及非发酵类产品）。

副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)N1115菌株定量PCR检测方法研究

通过对Lactobacillus paracasei种内的20株菌的全基因组序列进行了单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点分析,并结合糖代谢途径预测,序列比对,得到了分辨力可达菌株水平且遗传相对稳定的N1115菌株特异性位点。针对特异性位点所设计的N1115菌株特异性荧光定量PCR扩增引物及探针组,在51株常见益生菌株间具有特异性,所选特异性位点传代8代比较稳定,针对菌粉所建DNA提取方法的定量检出限为10^(3)~10^(9)CFU/mL,其间的线性拟合度较好(R2>0.98)。采用已知浓度标准菌粉做标准曲线可以对未知菌含量样品进行准确定量。

美国汽车工业新产品开发特色

着重介绍美国大汽车公司的新产品开发特点,揭示美国汽车企业新产品开发的手法与策略.以及美国政府对汽车新产品开发的扶植措施.

应用荧光聚合酶链式反应检测冷冻羊肉卷中羊肉的含量

目的:探索应用荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测冷冻羊肉卷中羊肉含量。方法:以羊线粒体细胞色素B基因为羊特异性基因,线粒体12S rRNA为内参基因,应用ΔCt法对羊肉含量进行相对定量,并与称重法进行比较,分析基因拷贝数和羊肉脂肪含量对定量结果的影响。结果:荧光PCR法建立的标准曲线在羊肉含量为1%~100%时具有良好的线性关系(R^2=0.990 1)。检测7个市售冷冻羊肉卷样品,荧光PCR方法检测出的羊肉含量与称重法羊肉含量的相关系数为0.945 0(P<0.001),平均绝对差异为-11.0%,95%可信区间为(-7.4%,-14.6%)。基因拷贝数不同和羊肉脂肪含量不同对内参基因扩增Ct值影响没有统计学意义(P值分别为0.072和0.206)。结论:荧光PCR法可用于快速检测冷冻羊肉卷中羊肉成分的相对定量。

基于PCR技术的水貂毛皮鉴别研究

本研究应用荧光PCR技术鉴定水貂毛皮。方法建立:市场采购32件鞣制动物毛皮,提取足够的DNA,应用荧光PCR方法检测水貂成分;其中21件水貂毛皮检测到水貂成分,11件其他动物毛皮均未检出水貂成分,方法特异性达到100%。方法验证:市场采购10件毛皮服装样品,比较宏观法与PCR法结果;其中宏观法鉴定结果与PCR法一致,宏观法无法确定水貂的4件样品均可通过PCR法明确。本方法可用于水貂毛皮的鉴定,并作为宏观法的有效补充和验证。

几种提取转基因木瓜DNA方法的比较

目的比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果,以提高转基因木瓜的检测准确率。方法对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR,同时对基因表达零件Ca MV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR,以检测提取DNA的质量。结果分析电泳产物发现,SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求,其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示,3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论比较3种提取方法及3种木瓜材料,发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。

多重PCR在调味品致病菌检测中的应用前景分析

食源性疾病是最为重要的食品安全问题之一,加强食源性疾病监测和食品污染物检验是面对这一问题的迫切需要。传统分离培养加生化鉴定检测食源性致病菌的方法,往往操作步骤繁琐耗时,精确度较低、很难满足目前高通量、时间短的要求。尤其是各种调味料品种繁杂,微生物很难扩增,传统方法对致病菌的检出率低。多重PCR技术特异性强、灵敏度高、程序简便易行,自诞生以来,就迅速被广泛地应用于生命科学研究的各个领域,基于该技术的病原菌检测方法已经在国内外广泛开展。文章对近年来基于多重PCR技术的病原菌检测的研究前沿进行了综述,分析了多重PCR方法在调味品致病菌检测中应用优势。内容涉及目标基因、生物芯片技术以及色谱技术和多重PCR的结合、灵敏度提高的方法,同时文章对多重PCR技术在调味品检测中的未来应用的局限、解决方案和前景进行了分析。

α-羟酸脱氢酶催化机制及其应用前景

简述α-羟酸脱氢酶家族中的乙醇酸氧化酶、乳酸单加氧酶、乳酸氧化酶、细胞色素氧化酶b2和扁桃酸脱氢酶等几种酶的蛋白质分子结构和催化机理,对该类酶的催化机制进行了比较,揭示α-羟酸脱氢酶蛋白质分子结构与功能之间的关系,为其在食品、医疗检测、重要的医药化工中间体的合成等方面的应用提供理论指导。

微生物酶制剂中转基因微生物的实时荧光PCR检测方法

针对微生物酶制剂中残留转基因微生物的检测问题,根据醇氧化酶-1(AOX1)启动子基因的序列信息设计一对引物及一条MGB探针,建立了转基因微生物的实时荧光PCR筛选检测方法。实验结果表明,该方法灵敏度达到1pg,可以准确判定生产线上不同分离阶段的微生物酶制剂中的转基因微生物残留情况。该方法准确度和灵敏度高,操作方便,可作为微生物酶制剂中转基因微生物分离状况的监测方法,也可为其他转基因微生物检测研究提供借鉴和参考。

近期工业微生物关键技术和应用

近年来,随着宏基因组学、蛋白质组学和代谢组学等技术的发展,工业微生物技术在资源、医药和手性合成等领域已经成为热点技术,并开拓了电子和纳米技术等新的应用领域。本文综述了几项最新的工业微生物技术,主要包括:微生物环氧化水解酶催化合成手性二醇、微生物甲酸脱氢酶用于再生氧化还原反应的辅因子、通过噬菌体展示技术得到纳米级金属丝、代谢网络改造和重建用于传统发酵生产以及有机溶剂耐受菌和宏基因组技术的应用。

食用木薯淀粉卫生安全指标研究

目的:研究我国食用木薯淀粉的安全指标,以促进行业发展与国际接轨。方法:参考目前国内外木薯淀粉的相关法律法规和标准,对我国食用木薯淀粉行业进行调研,通过对目前市售食用木薯淀粉的关键指标进行比较及检测分析,并且对24批次木薯淀粉产品关键卫生安全指标进行实样验证。结果:水分值与微生物(菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌)的量没有相关性;并且由于木薯类植物的天然性质,木薯淀粉还存在氢氰酸污染的可能,虽然目前我国尚未见有食用木薯淀粉中毒的报道,但不可忽略食用木薯淀粉中的这个关键安全指标。结论:建议加强对食用木薯淀粉水分、霉菌和氢氰酸的监测分析,对未来产品质量监督工作提供依据,为进一步完善我国食用木薯淀粉标准提供参考,为食品企业食用木薯淀粉提供保障。

鞣制水貂毛皮DNA提取方法的对比研究

以鞣制水貂毛皮为研究对象,通过DNA模板的吸光度值、特异性引物的实时荧光PCR扩增结果对酚-氯仿CTAB提取、IQ system试剂盒及Roche试剂盒3种DNA提取方法的效率进行比较。结果表明,传统的酚-氯仿CTAB提取法相较于2种试剂盒方法成本更低、效率更高。试剂盒对经过多重加工的毛皮制品的提取效率不理想,但可作为二次纯化的工具,对经染色工艺的毛皮制品能有效提高提取效率。选择最优的DNA提取方式对于使用PCR技术对水貂毛皮及相关制品进行检测鉴定是重要的前提。

单增李斯特菌毒力因子多重荧光PCR法建立与应用

目的建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)及其3种毒力因子的多重荧光PCR快速检测方法,并应用于日常食品的检测。方法根据单增李斯特菌溶血素基因hly A、内化素基因inl A和表面蛋白act A基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和探针,优化多重荧光PCR反应体系。对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果该法特异性强、敏感性高,对单增李斯特菌纯培养物的最低检出限410cfu/m L;重复性好,变异系数均小于2%。对84份食品检测结果与传统国标法相符,共检出单增李斯特菌4份,检出率为4.76%。多重荧光PCR检测方法耗时1 h,比传统方法节约2~5 d。4株单增李斯特菌分离株中2株同时含有inl A、act A、hly A 3种毒力基因,另2株为毒力基因act A缺失株,提示目前流行株并非同一来源。结论本研究建立的多重实时荧光PCR方法能同时对单增李斯特菌及其3种毒力因子进行快速检测,且灵敏度高、特异性好,为食源性疾病的病原学检测提供了快速可靠的方法。

并行工程在汽车新产品开发中的应用

针对现时的汽车新产品开发环境,探讨加速产品更新换代的新方法,介绍并行工程在汽车新产品开发中的应用.

糕点加工厂中单增李斯特菌PFGE分型及溯源

选择Asc I制取限制性大片段,对某糕点生产厂生产线上检出的43株单核细胞增生李斯特氏菌进行了限制性大片段脉冲场电泳分析,得到了6种型别,分别命名为A^F型,其中占主导的污染菌株为A型,其次为F型。对主要型别的菌株在生产区的分布和流动情况进行了分析。分析表明A和D型菌株在生产区域呈交叉污染情形;F型菌株的污染线路较为清晰,源头明确。A和F型菌株为驻厂污染源。使用PFGE分型分析污染菌分布与源头能够体现出不同型别菌株在该食品生产中的分布规律,可宏观准确地反映食品生产过程中的单核细胞增生李斯特氏菌污染情况。

TaqMan实时荧光PCR法定量检测生肉中猪源性成分的建立

目的：建立基于Taq Man实时荧光PCR技术的猪源性成分的定量检测方法。方法：选择朊蛋白基因为猪特异性基因和线粒体12S r RNA为内参基因,使用△Ct法进行相对定量。通过对其他种类的肉源DNA进行扩增,以验证方法的特异性;对含有1%猪肉的混合肉DNA进行系列稀释,确定检出限,并对自制模拟掺假肉进行猪源性掺假的测定,对该方法进行验证。结果：所用的引物具有较好的特异性,当模板浓度为50 ng/μL时对猪源性扩增的平均Ct值为22.73,而其他种类的肉源进行扩增时均未能检测到扩增信号,检出限为0.25%（w/w）;检测结果在猪肉含量为1%~100%（w/w）范围内具有良好的线性关系,相关系数R2=0.9955。内部验证结果表明,根据标准曲线得到的盲样检测结果同样品真实含量具有较高的一致性,变异系数在0.1270%~1.2044%之间。结论：所建立的Taq Man实时定量PCR法可用于生肉中猪源性成分的定量检测。

环介导等温扩增法快速检测牛羊肉中的掺杂肉

面对肉制品掺假突发事件频发的现状,对动物源性成分快检方法需求迫切。在等温扩增方法基础上,开展了肉制品掺假鉴定方法研究。以猪、鸡、鸭线粒体细胞色素b基因为目的序列,采用软件Primer Explorer Version5,通过序列比对设计并筛选环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的特异性扩增引物。通过反应体系优化建立猪、鸡、鸭源性成分的环介导等温扩增技术分析方法,对常见9种动物源性成分进行特异性分析,检出限达到0.001 ng/μL,高浓度牛、羊DNA不影响方法检出限。通过分析模板脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)浓度与反应循环数的关系,建立牛羊肉产品中,阈值为1%的猪、鸡、鸭掺杂成分的LAMP快速检测方法,分析时间36 min。采用该方法对深加工模拟掺杂肉样本分析结果与现行国家标准方法结果一致。研究可为肉制品原材料、市售生鲜肉及加工肉制品的肉成分快速筛查提供解决途径。

北京市丰台区社区卫生服务中心医务人员流感疫苗接种现状、推荐意愿及影响因素

目的了解北京市丰台区社区卫生服务中心医务人员流感疫苗接种现状、推荐意愿及影响因素,为提高该人群流感疫苗接种率提供依据。方法采用自行设计的问卷,对北京市丰台区23家社区卫生服务中心的医务人员和公卫科负责人分别进行调查和访谈。了解流感及流感疫苗的认知情况、2018—2019年度流感疫苗接种现状和推荐意愿、医务人员接种流感疫苗的相关政策等内容,采用非条件多因素logistic回归分析流感疫苗接种现状和推荐意愿的影响因素。结果共回收有效问卷1359份,应答率平均为58.48%(1359/2324),2018—2019年流感疫苗调整权重后接种率为32.81%,推荐率为79.76%(1084/1359)。公共卫生等科室、知晓疫苗效果、知晓疫苗接种时间、知晓医务人员是我国推荐优先接种流感疫苗的人群、单位免费提供等因素促进流感疫苗接种。年龄较大、医师和护士等岗位、既往接种流感疫苗、流感及流感疫苗知识得分高等因素促进流感疫苗推荐意愿。78.26%(18/23)受访者认为流感疫苗接种率不高的原因主要是流感疫苗未免费。91.30%(22/23)受访者建议加强流感和流感疫苗知识宣传以提高流感疫苗接种率。结论丰台区社区卫生服务中心医务人员流感疫苗接种率较低,推荐率较高,为医务人员免费提供疫苗并针对性开展宣传教育是提高该人群流感疫苗接种率的关键。