p38MAPK信号通路

细胞表面受体到核的信号通路是现代生物学研究的主题之一。细胞外各种刺激通过和膜受体偶联的Ｇ蛋白和酪氨酸激酶介导了一系列丝氨酸／苏氨酸激酶介导的级联反应，即分裂原激活蛋白激酶（ＭＡＰＫ）级联反应。ＭＡＰＫ级联反应把细胞外信号传递到核，并汇总了各种信号通路来的传息，因此研究细胞内ＭＡＰＫ的信号通路是十分重要的．本文简要介绍了ＥＲＫ，ＪＮＫ和ｐ３８三种ＭＡＰＫ途径，着重叙述了ｐ３８ＭＡＰＫ信号途径的性质和功能以及在免疫细胞中的作用和某些疾病的临床关系。

巨噬细胞的白细胞介素(IL-12)研究

1994年3月和1995年5月,在美国召开的两次IL-12专题学术会议指出,细胞因子IL-12有可能广泛用来治疗和预防感染(如血吸虫、疟疾、结核、利什曼原虫和爱滋病)和肿瘤。因而IL-12具有“热门分子”和“魔弹”的美称。1995年7月23—29日,在旧金山举行第九届国际免疫学会上介绍了56篇IL-12研究摘要,进一步地提供了IL-12研究新进展。

丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β_1表达

目的 观察丙丁酚对ox- LDL诱导系膜细胞AP -1活性和TGF -β1 表达的作用 ,探讨抗氧化剂治疗脂质肾损伤的分子机制。方法 大鼠系膜细胞随机分为正常细胞组、ox- LDL处理组和ox- LDL +丙丁酚处理组。运用凝胶迁移率实验检测AP-1活性变化 ,Western杂交检测c- Jun、JNK/SAPK磷酸化及TGF- β1 蛋白表达水平的改变。运用Northern杂交检测TGF- β1- mRNA表达。结果 丙丁酚 5 0 μmol/L预处理系膜细胞 2 0h ,显著降低ox LDL诱导系膜细胞AP 1活性。丙丁酚浓度为 5 0、1 0 0、2 0 0 μmol/L时 ,均显著抑制ox- LDL诱导JNK ,/SAPK磷酸化 ;且ox LDL +丙丁酚处理组的c Jun蛋白表达分别为ox- LDL处理组的 6 0 %、5 1 %和 4 6 %。Northern杂交显示 :ox LDL为 1 0 μg/mL时并不激活TGF- β1 mRNA表达 (P >0 .0 5 ) ;而当ox-LDL浓度增至 5 0、1 0 0 μg/mL时 ,TGF -β1 mRNA表达分别增加 1 .8和 1 .9倍。Western杂交显示ox -LDL呈剂量依赖方式增加TGF β1 蛋白质表达。加入丙丁酚后显著降低ox LDL诱导系膜细胞的TGF -β1- mRNA和蛋白质表达 (P <0 .0 5 )。结论 丙丁酚可能通过抑制JNK1 /SAPK磷酸化和AP 活性下调ox- LDL诱导系膜细胞TGF- β1 表达。

细菌内毒素对血管内皮细胞ERK1/ERK2和P38分裂原激活的蛋白激酶磷酸化的影响

研究细菌内毒素（ＬＰＳ）对血管内皮细胞的直接损伤机制，有助于了解内毒素血症对血管内皮的直接损害机制及其在多脏器损害中的作用。本研究通过观察ＬＰＳ刺激血管内皮细胞后，对内皮细胞中细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）１／ＥＲＫ２和Ｐ３８分裂原激活的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）磷酸化的影响，发现ＬＰＳ（１ｍｇ／Ｌ）直接作用内皮细胞后Ｐ３８ＭＡＰＫ磷酸化程度明显增强，并与ＬＰＳ剂量有明显依赖关系。２．５ｍｇ／ＬＬＰＳ刺激后，Ｐ３８ＭＡＰＫ磷酸化在１５ｍｉｎ反应最强，３０ｍｉｎ后减弱，约６０ｍｉｎ后消失。而ＥＲＫ１和ＥＲＫ２的磷酸化在１５～３０ｍｉｎ明显，６０ｍｉｎ减弱，其总强度不如Ｐ３８ＭＡＰＫ。由此证明，ＬＰＳ直接作用内皮细胞后其信号可以通过跨膜传导，将ＭＡＰＫ激活，并可能引起细胞核内的基因转录和胞浆内功能蛋白的磷酸化，导致血管内皮细胞的多种功能变化。

阿糖胞苷诱导NF-κB活化与白血病细胞凋亡的关系

目的 :研究地塞米松 (DXM)和长春新碱 (VCR)对阿糖胞苷 (Ara C)诱导HL60 n白血病细胞凋亡与核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法 :采用TdT介导的dUTP缺口末端标记 (Tunel)和DNA电泳技术检测HL60 n细胞凋亡 ;采用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测HL60 n细胞NF κB活化水平。结果 :Ara C同时具有诱导HL60 n细胞凋亡和NF κB活化的作用 ;DXM 1 μmol/L和VCR 0 .1 μmol/L能显著增强Ara C诱导的HL60 n细胞凋亡和抑制Ara C诱导的HL60 n细胞的NF κB活化 ,细胞凋亡增强率分别为 39.1 %和 59.2 % (均P <0 .0 5) ,NF κB活化抑制率分别为 31 .0 %和 47.0 % (均P <0 .0 5)。结论 :Ara C诱导HL60 n细胞凋亡的同时激活NF κB ;DXM和VCR可通过抑制NF κB活化 ,增强其诱导HL60

地塞米松抑制核因子-κB活化增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡

目的 研究化疗药物诱导HL60 n白血病细胞核因子 κB (NF κB)活化与凋亡的关系 ,并探讨地塞米松 (DXM )对其的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测细胞NF κB活化水平 ;采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (Tunel)检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导HL60 n白血病细胞NF κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡明显相关 ,1μmol/LDXM能显著抑制高三尖杉酯碱 (HHT) 0 .5 μmol/L或足叶乙甙(VP 16) 1μmol/L诱导的HL60 n细胞NF κB活化 ,抑制率分别为 49.69%和 44 .3 5 % ,并增强它们诱导HL60 n细胞凋亡的作用 ,凋亡增加率分别为 5 7.5 %和 3 7.2 %。HL60 n细胞在接触化疗药物前 ,NF κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物在诱导HL60 n白血病细胞凋亡的同时活化NF κB ,DXM可通过抑制NF

TNCB介导角质形成细胞IL-18的表达

目的研究过敏原TNCB对小鼠角质形成细胞(PAM212)促炎症细胞因子IL-18表达的调节效应。方法以不同浓度TNCB处理小鼠角质形成细胞,并以PMA、LPS处理作为阳性对照,利用RT-PCR和ELISA法检测PAM212细胞中IL-18表达变化情况。结果TNCB处理引起角质形成细胞变圆,从支持物脱落;TNCB以剂量依赖的方式促进角质形成细胞内IL-18的mRNA的转录,在处理浓度为10μmol/L时显著提高IL-18 mRNA的转录和蛋白质的分泌。结论过敏原TNCB对角质形成细胞中IL-18表达呈上调效应,为进一步研究炎症反应条件下IL-18的表达调节机制打下了基础。

蛋白激酶C的激活转位和它介导的信号通路

蛋白激酶Ｃ是一系列丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族，已发现了至少十二种同功酶。在静止细胞中，它主要以非活化形式存在于胞浆中，由受体－Ｇ蛋白耦联的ＰＬＣβ激活便裂细胞膜上的磷脂而释放ＤＡＧ；与ＰＫＣ的结合引起了ＰＫＣ的别构激活；而通过其它信号途径激活的ＰＬＤ水解胞膜的磷脂酰胆碱（ＰＣ）产生的磷脂酸经磷脂酸酯酶产生的ＤＡＧ可能是ＰＫＣ持续激活的必要条件。在体外实验中，ＰＫＣ的持续激活是一些细胞分化所必须的。蛋白激酶Ｃ的激活首先引起了它转位到膜，有时转位到核，并在转位后继续保持磷酸化活性，同时对它的下游底物进行磷酸化导致它们的活化。ＰＫＣ可活化ＲａｆＳｅｒ／Ｔｈｒ蛋白激酶及ＮＦ－ｋＢ，介导细胞对外界的反应，包括对核基因表达的调节，引起细胞生长或分化等。由于Ｒａｆ可与活化的Ｒａｓ—ＧＴＰ结合从而定位到胞膜，说明蛋白激酶Ｃ与Ｒａｓ介导的Ｒａｆ－１／ＭＥＫ／ＭＡＰＫ信号通路间存在着“对话”。

LPS和PMA诱导小鼠腹腔巨噬细胞的PKC-α和PKC-ε的激活与转位

利用免疫印迹技术及内源性底物磷酸化方法,我们研究了在巨噬细胞的信号传递中起重要作用的PKC同功酶的分布及其在免疫调变剂LPS的刺激下产生的激活和转位。在未激活的巨噬细胞中,PKC-β的含量高于PKC-α和ε,它和PKC-α的分布均是胞质中大于胞膜。以PMA为阳性对照,结果提示LPS介导的抑制性巨噬细胞兔疫调变机制中涉及到了PKC-α和PKC-ε从胞质到膜组份的转让而不是PKC-β(PKC-βⅠ或βⅡ)的转位。应用PKC-依赖的内源性底物磷酸化的分析,结果说明胞质中55 kDa和74 kDa蛋白质磷酸化条带的减弱和膜组份中的类似蛋白质(PMA与LPS的刺激有不同的反应)磷酸化强度的增加,与PKC的转位有着相同的时间梯度。这结果提示在LPS介导的免疫调变信号传递通路中,PKC-α和PKC-ε可能介导了信号的传导及放大。

核糖核酸酶保护法MD-2探针的制备

目的 构建用于核糖核酸酶保护法的MD 2转录质粒并制备反义RNA探针。方法 PCR扩增目的片段 ,并定向亚克隆至pSP72质粒T7启动子下游的多克隆位点 ,以T7RNA聚合酶转录合成反义RNA探针。结果 亚克隆插入的片段经测序、酶切鉴定 ,序列及方向完全正确 ,成功制备了用于的反义RNA探针。结论 成功地制备了用于核糖核酸酶保护法的MD 2转录模板和探针 ,为深入研究内毒素信号受体相关机制以及MD

快速锅炉燃烧系统的改造

介绍了天津钢管公司炼钢分厂将快速锅炉内的燃重油设施用较先进天然气燃烧设备替代,改造后锅炉燃烧系统运行稳定,测试各项指标均达到或优于原各项指标,降低了生产成本,减少了污染物的排放量。

对盘活邮政存量资产的思考

存量资产指在某一时点上业已存在的资产,或者说是在某一时点前的一段时期内现有资产流量的总和.

地塞米松和长春新碱抑制核因子-κB活化增强高三尖杉酯碱诱导K562-n细胞凋亡

目的：研究地塞米松(DXM)和长春新碱(VCR)对高三尖杉酯碱(HH)诱导白血病细胞系K562-n凋亡与核因子-κB(NF-κB)活化的影响。方法：采用TdT介导的dUTP缺1：2末端标记技术(TUNEL)、DNA电泳方法观察K562-n细胞凋亡。采用电泳迁移率变动分析(EMSA)观察K562-n细胞NF-κB活化。结果：K562-n细胞未经药物诱导NF-κB有轻度活化；HH0．5μmol／L可明显诱导K562-n细胞NF-κB活化，DXM1．0μmol／L和VCR0．1μmol／L能显著抑制HH0．5μmol／L诱导的NF-κB活化，抑制率分别为32．0％和39．4％(P均<0．05)。HH0．5、5、50μmol／L均能诱导K562-n细胞凋亡，凋亡率分别为(30．00±3．34)％、(47．13±3．18)％和(68．63±8．14)％。DXM1．0μmol／L和VCR0．1μmol／L本身无诱导K562-n细胞凋亡的作用，但均能增强HH0．5μmol／L诱导的K562—11细胞凋亡，凋亡率分别提高达85．8％和114．6％(P均<0．05)。结论：HH诱导K562—13细胞凋亡的同时激活NF—κB；DXM和VCR可通过抑制NF-κB活化，增强其诱导K562-n细胞凋亡的作用。

人白细胞介素12在昆虫细胞中的表达

人白细胞介素１２（ｈＩＬ１２）是一种异源二聚体细胞因子，由ｐ４０和ｐ３５两个亚基通过二硫键连接而成。首先构建了两个表达载体ｐＶＬ１３９２ｈｐ４０和ｐＶＬ１３９３ｈｐ３５，并分别与线性化多角体病毒基因组ＤＮＡ共转染昆虫细胞株Ｓｆ９，用目视法筛选出重组病毒ＡｃＮＰＶｈｐ４０和ＡｃＮＰＶｈｐ３５。利用ＰＨＡ激活的人淋巴细胞增殖试验，在条件培液中检测到重组ｈＩＬ１２的生物活性，表达量约为１５～２μｇ／１０６细胞。经实时ＢＩＡ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，ｈｐ３５和ｈｐ４０两亚基在昆虫细胞中获得表达。非还原条件下的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，重组ｈＩＬ１２的表观分子量为７６ｋＤａ，ｈｐ４０同源二聚体的表观分子量为９２ｋＤａ。重组ｐｈ４０具有明显抑制ｈＩＬ１２生物活性的作用。

一个新的信号受体家族——Toll/IL1R家族的研究进展

Toll受体最初是在研究果蝇胚胎腹背侧体轴的形成中发现的 ,由于它与IL 1受体在结构、功能、信号转导通路上的诸多相似 ,人们将它们归入一个大的信号受体家族———Toll/IL 1R家族。许多研究均证实 ,除与胚胎发育有关外 ,这一信号受体家族的成员在机体对抗外来病原体的天然免疫中起到了重要的作用 。

氨氯地平抑制人血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的 观察氨氯地平对人血管平滑肌细胞 (VSMC)丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性的影响。方法 取人乳腺下动脉培养VSMC ,用bFGF刺激细胞增殖 ,观察氨氯地平对bFGF激活的MAPK活性的影响 ,用 p42 / p44磷酸化抗体蛋白免疫印迹法测定MAPK活性。结果 bFGF对MAPK有显著激活作用 ,激活峰值出现在 5～ 15min ,维持至 3h ;此活化作用被MAPK激酶的特异抑制剂PD980 5 9抑制 ;无论瞬时或持久的bFGF激活的MAPK活性均被氨氯地平抑制。

鼠白细胞介素12(mIL-12)在昆虫细胞中的表达

人IL-12的作用具有种属特异性,无法对鼠淋巴细胞起作用。因此,为了在啮齿动物模型上研究该细胞因子的免疫学效应,并评价其临床应用前景,就很有必要获得重组鼠IL-12(mIL-12)。为此,我们首先构建了两个表达载体pVL1393-mp40和pVL1393-mp35,并分别与线性化多角体病毒基因组DNA共转染昆虫细胞株Sf9,用目视法筛选出重组病毒AcNPV-mp40和AcNPV-mp35,然后共感染昆虫细胞,使mp40和mp35在昆虫细胞中共表达。经实时BIA和Northern blot分析,表明重组mIL-12在昆虫细胞中表达成功。经还原条件下的SDS-PAGE分析,重组mp40和mp35的分子量分别为40KDa和22KDa。非还原条件下的Western blot结果显示,重组mIL-12的表观分子量为80KDa。用抗体捕获法在条件培液中测到了重组产物的生物活性,经与参照标准相比照,重组mIL-12的表达量约为10-15μg/10~6细胞。

建筑门窗节能工程的施工技术探讨

随着社会的发展,建筑业逐渐成为我国发展过程中最大的能源消费行业。在当前能源紧缺的情况下,大力拓展绿色节能环保理念,既是解决国家能源问题的需要,也是全世界的迫切需要。因此,门窗设计要以绿色节能为目标,以市场需求为导向,让绿色节能技术在门窗立面设计中得到广泛应用。

新型建筑门窗幕墙的节能设计研究

在倡导绿色环保理念的新时代,各种新型节能建筑材料和节能设计技术在建筑行业中应用越来越广泛,尤其是门窗幕墙的节能设计受到关注,从而产生各种节能门窗和幕墙,如铝合金节能门窗、铝塑复合门窗等。门窗幕墙是建筑的重要组成部分。它的绿色设计和使用,对整个建筑有重大影响。鉴于此,本文对新建建筑的门窗、幕墙的节能设计进行了详细的论述,以期为相关行业提供有价值的参考,进而为行业的健康可持续发展做出贡献。

高层建筑外墙防渗漏施工技术的应用研究

近些年来,随着社会经济的不断发展,城市化进程不断推进,高层建筑的数量越来越多,缓解了城市住房紧缺问题。然而在实际建设施工过程中,建筑外墙渗透直接影响住户的居住舒适性,建筑施工单位要高度重视建筑外墙渗透问题,积极做好外墙防渗漏工作,严格做好外墙施工质量的监督和管理。并且积极选用新型施工材料,显著解决高层建筑外墙渗透问题。