患者女性,57岁,因鼻塞、鼻出血、咽部不适半年余就诊于九江学院附属医院。鼻内镜检查示:双侧下鼻甲肥大,鼻咽部黏膜充血,可见隆起新生物,2 cm ×1.5 cm×1.5 cm大小,伴黏性分泌物,行病理活检(图1)。临床诊断:鼻出血,鼻咽...患者女性,57岁,因鼻塞、鼻出血、咽部不适半年余就诊于九江学院附属医院。鼻内镜检查示:双侧下鼻甲肥大,鼻咽部黏膜充血,可见隆起新生物,2 cm ×1.5 cm×1.5 cm大小,伴黏性分泌物,行病理活检(图1)。临床诊断:鼻出血,鼻咽部恶性肿瘤。展开更多
文摘目的构建含rPB- DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为前列腺癌基因治疗的研究奠定基础。方法应用分子克隆技术,将rPB DR启动子连接至pBluescriptSK -TK上构建出pBluescriptSK -rPB- DR TK,再酶切出rPB -DR -TK目的片断,并将其连接至穿梭质粒pShuttle上。将构建好的pShuttle- rPB- DR -TK经PmeⅠ单切线性化后再以电穿孔法转化至E.coli.BJ5183AdEasy1内进行同源重组,抽提质粒经卡那抗性筛选及酶切鉴定正确的即为pAd- rPB- DR -TK,再经PacⅠ酶切回收后以脂质体法转染人胚肾293细胞,包装出完整腺病毒,然后大量扩增测定滴度,并行PCR鉴定。结果经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了包含rPB -DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒pAd rPB DR TK,包装、扩增后测病毒滴度为1.1×108TCID50/ml。结论成功构建出包含rPB DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并鉴定正确,可用于下一步前列腺癌基因治疗的研究中。