张建丽的诗

另外的乐章 一只鹰 正作难忘的飞翔 两只鹰 正作难忘的飞翔 更多的鹰 更多的翅膀

补饲胆固醇对高温环境下湖羊母羊繁殖性能和血清生化指标的影响

【目的】研究饲粮中添加胆固醇对中国南方夏季湖羊发情率、受胎率和血清生化指标的影响。【方法】选择108只体重相近(33.60 kg±1.86 kg)的健康湖羊母羊,其中30只湖羊在非高温季节(4月份,平均最高温度20.9℃±3.2℃)饲粮添加不同剂量胆固醇(0.1%和0.5%),ELISA方法检测血清中胆固醇含量的动态变化,筛选合适的胆固醇添加量;另外78只湖羊随机分成2组(对照组和试验组),试验期63 d(从同期发情处理第1天到自然发情后配种的第30天),在夏季高温季节(7-9月份,平均最高温度31.3℃±2.6℃),对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂添加0.1%胆固醇的基础饲粮,ELISA方法检测血清中雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平,研究饲粮添加胆固醇对湖羊发情率、受胎率和血清生化指标的影响。【结果】非高温季节湖羊基础饲粮中分别添加0.1%和0.5%胆固醇,48 h后两组湖羊血清中胆固醇含量趋于一致,据此选择0.1%作为高温季节补饲胆固醇的添加剂量。夏季高温季节在补饲0.1%胆固醇的第3、30和63天均能显著提高湖羊血清中胆固醇含量(P<0.05);且试验组湖羊自然发情率(89.7%)高于对照组(82.1%)(P>0.05),受胎率(60.0%)显著高于对照组(46.9%)(P<0.05)。试验组湖羊总蛋白、球蛋白、白细胞介素-1和甘油三酯含量均显著高于对照组(P<0.05),而尿素氮含量显著下降(P<0.05)。【结论】夏季高温环境下,在湖羊母羊饲粮中添加0.1%胆固醇可有效提高其发情率和受胎率。

MSTN基因编辑湖羊胫腓肌的转录组分析

[目的]本文旨在探索肌肉抑制素基因(myostatin,MSTN)调控肌肉生长发育的分子机制。[方法]以3月龄MSTN基因编辑湖羊(试验组)和野生型湖羊(对照组)胫腓肌为对象,采用PCR和Western blot方法验证MSTN编辑湖羊编辑形式,在此基础上开展转录组测序和分析,并用real-time PCR方法对差异表达基因进行结果验证。[结果]对照组和试验组共有149个差异表达基因,其中65个基因上调,84个基因下调,GO注释和KEGG富集分析表明,差异表达基因显著富集在氧化磷酸化、果糖和甘露糖代谢、生热作用、FOXO和AMPK信号通路,表明MSTN基因可能通过以上信号通路参与湖羊生长发育调控。[结论]MSTN基因编辑湖羊可能通过FOXO和AMPK、氧化磷酸化、果糖和甘露糖代谢、生热作用等与动物代谢相关的信号通路调控其生长发育。

蒸汽蒸馏法对葡萄酒酒精度的快速测定及应用

为改善水浴加热蒸馏法的不足,提高葡萄酒酒精度检测效率,借助凯氏定氮仪,基于蒸汽蒸馏法测定葡萄酒酒精度,并进行精密度、回收率试验以及蒸汽蒸馏法和水浴蒸馏法的对比试验,并作测定方法不确定度分析和教学实验应用验证。结果表明,蒸汽蒸馏法对葡萄酒样品酒精度测试值的变异系数均小于水浴蒸馏法;蒸汽蒸馏法可在4 min之内结束蒸馏过程、检测时间缩短一半左右,标准品的乙醇浓度与酒精度测定结果在≤40%体积分数范围内线性关系良好,加标样品酒精度测试标准差0.13~0.45、加标回收率98.55%、RSD均值1.45%,操作简便高效,测试结果准确度高,可推广应用于生产检验或科研教学,并据此结果对葡萄酒酒精度快速测定自动蒸馏仪进行了初步设计与改进。

包被大蒜制品对围产期湖羊母子健康的影响

本试验旨在研究包被大蒜素和包被大蒜粉作为饲料添加剂对围产期湖羊母子健康的影响。选取预产期相近的妊娠湖羊54只,随机分为3组,每组18只。对照组饲喂基础饲粮,大蒜素组(AL组)饲喂基础饲粮+0.4 g/(d·头)包被大蒜素,大蒜粉组(GP组)饲喂基础饲粮+0.4 g/(d·头)包被大蒜粉。预试期7 d,正试期85 d。结果表明:1)与对照组相比,AL组和GP组的羔羊平均初生体重均显著增加(P<0.05),GP组的羔羊平均断奶重、平均日增重、体高和胸围显著增加(P<0.05)。2)在分娩后0 d,与对照组相比,GP组的母羊血清过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P<0.05);在分娩后0、30和55 d,与对照组和GP组相比,AL组的母羊血清免疫球蛋白A(IgA)含量极显著增加(P<0.01)。AL组和GP组分娩后55 d的母羊血清免疫球蛋白M(IgM)含量极显著高于分娩后0和30 d(P<0.05)。3)与对照组相比,AL组和GP组的羔羊血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及IgA、免疫球蛋白G(IgG)和IgM含量均有所上升,腹泻率分别降低了26%和16%,但未达显著水平(P>0.05)。综上所述,围产期湖羊饲粮中添加包被大蒜素和包被大蒜粉有利于湖羊母子健康、母羊体况恢复及羔羊生长发育。

湖羊lncRNA-269的鉴定及转录调控分析

[目的]本文旨在研究湖羊长链非编码RNA-269(long no-coding RNA-269,lncRNA-269)序列特征、表达模式和转录调控,为后续开展lncRNA-269的功能研究提供理论基础。[方法]以湖羊为研究对象,采用5′/3′RACE结合PCR扩增方法获得其序列全长,利用RT-qPCR方法鉴定其在湖羊组织中的表达模式,并利用PCR方法扩增其启动子区,鉴定其启动子区特征,分析其转录调控情况。[结果]湖羊lncRNA-269全长3 146 bp,组织表达谱显示其在湖羊各组织中广泛表达,且在健康卵泡中显著高表达,其表达水平与NR5A1 mRNA水平和血清中雌二醇(E_(2))水平呈正相关。荧光素酶活性分析发现在lncRNA-269启动子区的-359~-17 nt有1个转录激活基序,在-1 485~-942 nt有1个转录抑制基序。JASPAR软件预测发现在lncRNA-269转录抑制启动子区域存在FOXO3、PDX1等转录因子结合位点,在转录激活区域有SMAD4、YY1等转录因子结合位点。过表达SMAD4可显著提升lncRNA-269启动子区荧光素酶活性,染色质免疫沉淀(ChIP)-PCR试验进一步确认了SMAD4特异性与lncRNA-269启动子区结合。[结论]湖羊lncRNA-269在健康卵泡中显著高表达,其启动子区存在一个转录激活区域和一个转录抑制区域,转录因子SMAD4可通过与lncRNA-269启动子区结合显著上调lncRNA-269的启动子活性。

利用CRISPR/Cas9技术制备BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系

旨在利用CRISPR/Cas9系统构建BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),同时检测BLG基因敲除后对细胞的影响。本研究利用体外切割试验筛选获得靶向牛的BLG基因的第一外显子序列的3条sgRNA,与CRISPR/Cas9表达载体电转染入bMECs,利用浓度为1.8μg·mL^(-1)嘌呤霉素和6μg·mL^(-1)稻瘟菌素双药筛和PCR分析鉴定获得BLG基因编辑的单克隆细胞株;利用Western blot(WB)验证细胞BLG表达;绘制生长曲线和CCK-8试验检测BLG基因敲除对bMECs细胞增殖的影响;同时根据sgRNA序列,对基因组上潜在脱靶位点进行PCR测序分析。经筛选和PCR序列分析,共筛选获得了9株BLG基因编辑细胞株,其编辑效率为90%(9/10),其中4株细胞株BLG基因大片段删除。序列分析结果显示,单克隆细胞株编辑位点呈现片段插入缺失和碱基替换等多种编辑类型,WB结果显示敲除细胞株BLG蛋白表达显著降低,且细胞生长曲线和CCK-8检测结果表明BLG基因敲除的细胞生长速度加快。本研究利用CRISPR/Cas9技术成果构建了牛乳腺上皮细胞BLG基因高效敲除方法,BLG基因敲除后可显著影响牛乳腺上皮细胞的增殖,为探究BLG敲除牛在乳腺上皮细胞水平探究其功能机制提供细胞模型。

水苏碱调节Shh/Gli1信号通路对口腔癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组。EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响。结果L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05)。Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05)。结论Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的。

新生代农民工市民化进程与空间分异研究

农民工市民化问题是当今城市地理学研究的一个重大课题。基于大连市300名新生代农民工的问卷调查,从外部环境和新生代农民工自身情况两方面,构建了市民化指标体系,修正了基于C-D函数的市民化进程模型,采用SPSS软件对问卷结果进行统计分析,定量分析了大连市新生代农民工市民化进程的特点,运用MapInfo作出空间分异图,得出大连市新生代农民工市民化进程的空间分异特征:①市内四个主城区的市民化水平低于副城区;②市中心及其辐射地带市民化水平较低,城乡结合部市民化水平较高;③市民化指标与市民化水平空间分异不匹配。目前新生代农民工市民化的相关制度环境处于阻碍阶段,城市居民对新生代农民工的社会认同和接纳程度较好,新生代农民工自身已经具备市民化的能力,城乡结合部和副城区(郊区)是其定居城市的最佳区域,农民工市民化进程是一个任重而道远的任务,国家、社会应为新生代农民工提供一个平台,加快农民工到市民的转化进程。

不同管理方式对锡林郭勒大针茅典型草原退化群落的恢复作用

在内蒙古锡林郭勒典型草原区选取有代表性的退化大针茅—糙隐子草群落,设置三种不同的管理方式,即放牧不刈割、无牧无刈割围封禁牧、无牧一次刈割围封禁牧。经过8年不同的管理后,采用样方法对群落物种组成、植物高度、地上生物量进行实地调查,并计算群落物种多样性、丰富度和均匀度;同时,测定群落内主要植物种的净光合速率、叶片N含量、比叶面积等功能性状。结果表明:(1)与放牧不刈割管理相比,在两种围封禁牧管理下,群落单位面积的生物量以及多年生禾草占总地上部生物量的比例均增加,群落的Margalef丰富度指数提高,群落内主要物种的水分利用效率显著提高,群落优势种由糙隐子草过渡为大针茅,已具有明显的典型草原特征;但群落的Shannon-Wiener多样性指数无显著差异,群落内主要物种的净光合速率、叶片N含量和比叶面积等功能性状无一致变化趋势,植株高度也无显著差异。(2)无牧一次刈割管理方式下的群落内物种数高于另外两种管理方式。综上所述,对于内蒙古锡林郭勒的大针茅退化草原来讲,实施无牧一次刈割围封禁牧管理有利于退化群落的恢复。

猪肺磷脂注射液与氨溴索分别联合 nCPAP 治疗30～34周早产儿呼吸窘迫综合征的疗效比较

目的：比较猪肺磷脂注射液（商品名固尔苏，意大利 Chiesi Farmaeeatici SPA）与氨溴索分别联合鼻塞式持续气道正压通气（nCPAP）治疗30～34周早产儿呼吸窘迫综合征（NRDS）的临床疗效。方法选取 NRDS 患儿230例，患儿根据家长的治疗意愿分为观察组120例和对照组110例。观察组患儿采用固尔苏联合 nCAPA 治疗，对照组患儿采用氨溴索联合 nCAPA 治疗。观察2组临床疗效，并观察2组血气分析指标，记录2组并发症发生情况及死亡情况。结果观察组总有效率为90．8％高于对照组的89．1％，但差异无统计学意义（ P ＞0．05）。2组治疗后血动脉血氧分压（PaO2）、pH 值高于治疗前，血二氧化碳分压（PaCO2）低于治疗前，且观察组变化幅度大于对照组，差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。观察组并发症发生率为11．7％低于对照组的33．6％，病死率为8．3％低于对照组的20．9％，差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。结论固尔苏与氨溴索分别联合 nCPAP 治疗30～34周早产儿 NRDS 治疗效果均显著，但固尔苏联合 nCPAP 在改善血气分析指标，降低并发症发生率及病死率方面优于氨溴索联合 nCPAP。

人体食源性盐酸克伦特罗尿样兴奋剂阳性可能性研究

目的:研究由食源性盐酸克伦特罗造成人体尿样兴奋剂检测阳性的可能性。方法:首先测定采用盐酸克伦特罗定量饲养的猪六个部位的肌肉组织中的盐酸克伦特罗含量,再使两名受试者进食烹饪熟的已知盐酸克伦特罗含量的猪肉及猪肝,最后检测受试者尿样是否呈克伦特罗阳性。检测猪肉及猪肝中克伦特罗采用液质联用法,检测受试者尿样中的克伦特罗采用兴奋剂常规方法——气质联用法。结果表明,单次食用猪肉制品中盐酸克伦特罗总量不超过1μg,则不会产生兴奋剂检测阳性。但服用克伦特罗一定残留量的动物组织会导致尿液克伦特罗阳性。

分娩方式与母婴并发症的相关分析

目的：分析不同分娩方式对母婴并发症的影响。方法：2006年1～12月在该院出生的符合母乳喂养的足月新生儿及产妇678例，分为剖宫产组及阴道正常产组各339例，观察产妇产时出血、产后泌乳及子宫复旧、新生儿黄疸及胎粪排出等情况，详细记录相关数据。结果：分娩后2h，剖宫产及正常产组出血总量平均值分别为270ml、150ml，产后1天复查血红蛋白，剖宫产组贫血发生率为62．83％，正常产组贫血发生率为25．96％；产后泌乳高峰出现时间剖宫产较正常产组晚24h左右；剖宫产组产后6天与正常产组产后3天子宫底高度相当；新生儿黄疸剖宫产组高峰出现时间在生后5～7天，经皮胆红素范围值为181．6～230．8mmol／L，而正常产组高峰出现时间是生后4～5天，经皮胆红素范围值为176．2～208．6mmol／L；胎粪排出时间剖宫产组平均为产后（45±2．4）h，正常产组平均为产后（38±1．6）h。结论：剖宫产较正常产组产时出血增多，泌乳及子宫复旧、胎粪排净时间后延，新生儿黄疸高峰出现时间晚且严重。剖宫产增加母婴并发症的发生风险。

诺卡氏菌型放线菌细胞中脂肪酸的气相色谱分析

采用Sherolock全自动微生物鉴定系统,用气相色谱法,分析测定了4株诺卡氏菌型放线菌分离菌株的脂肪酸成分和含量,结果表明,该法具有分辨率高,稳定、重现性好,简便易行等特点,在一定程度上与16SrRNA基因序列比较结果相一致,能在种及菌株水平上反映出放线菌的基因型、系统发育和分类关系,是一种较好的脂肪酸定量测定方法,尤其适用于分析大量的菌株或分离株,可应用于放线菌种水平的分类和快速鉴定。

早期小剂量猪肺磷脂注射液联合鼻塞式持续气道正压通气预防早产儿呼吸窘迫综合征的临床观察

目的：观察早期应用小剂量猪肺磷脂注射液联合鼻塞式持续气道正压通气（ nCPAP）预防高危早产儿（30～34周）呼吸窘迫综合征（ NRDS）的临床效果。方法选取2010年1月—2013年12月收治的高危早产儿230例。将所有早产儿随机分为观察组（120例）和对照组（110例）。观察组早产儿采用小剂量猪肺磷脂注射液联合nC-PAP，对照组早产儿仅采用nCPAP。观察2组早产儿的血气分析改善情况、NRDS发生率、机械通气率、病死率、并发症发生率、用氧时间、住院时间、住院费用等。结果与用药前比较，用药后2组PaO2、pH值及SaO2均升高，血PaCO2降低，且观察组变化幅度均大于对照组，差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。观察组NRDS发生率（0．3％）、并发症发生率（0．3％）、机械通气率（0．2％）及病死率（0）均低于对照组（3．9％、4．4％、3．3％、0．1％），差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。观察组总用氧时间、住院时间均短于对照组，住院费用低于对照组，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论早期应用小剂量猪肺磷脂注射液联合nCPAP预防30～34周高危早产儿NRDS效果较好，可有效改善血气指标，降低NRDS并发症发生率、机械通气率及病死率，缩短住院时间，值得临床推广应用。

冬季笼养肉鸡舍CO_2浓度分布规律及其与温度湿度相关性分析

选择山西省某养殖基地单栋饲养量为32 400只的白羽肉鸡舍,采用分次多点测量法对CO_2浓度进行检测与分析,并与温度湿度进行相关性分析。结果显示:肉鸡3周龄后CO_2浓度在2 777~7 790 mg/m^3之间,风机开启时,鸡舍纵向CO_2浓度湿帘端往风机端呈减少的趋势,风机关闭时,前后高,中间低;当通风小窗开启角度较小时,鸡舍横向两侧高、中间低,开启角度较大时,两侧低,中间高。CO_2浓度与温度相关系数R^2=0.2044,CO_2浓度与相对湿度相关系数R^2=0.6738。研究表明:该规模化立体养殖肉鸡舍冬季CO_2浓度超过推荐限值,在做好防寒保暖工作的同时,需加强通风换气。

LC-MS/MS法定性检测保健品中非法添加的降糖药

建立了同时检测保健品中非法添加的10种化学降糖药的分析方法。用甲醇直接提取,以10mmol·L-1甲酸铵(pH3.5)和乙腈为流动相,采用Agilent Zorbax SB C18(100mm×2.1mm×3.5μm)色谱柱进行分离,电喷雾离子源,正离子多反应监测扫描方式分析检测。除阿卡波糖和二甲双胍的检测限为20mg·kg-1外,其他降糖药的检测限均不高于1mg·kg-1,10种降糖药的回收率为75.2%～116.9%。

生物工程综合实验教学改革研究与实践

从优化实验教学内容,改进实验教学手段和考核方式,全面开放实验室入手,对生物工程综合实验课程进行了教学改革研究与实践,取得了良好的效果。学生的学习兴趣以及动手、创新能力和综合素质均得到明显提高。

不同品系象草的生物产量及木质纤维素乙醇生产潜力研究

为探讨不同品系象草的生物产量及生物乙醇生产潜力,以不同品系象草为材料,研究不同品系象草的生物产量及利用干物质组成分中纤维素、半纤维素含量计算乙醇理论产量,并进行比较,旨在为象草作为生物质能源开发利用的品种选择提供技术指导。结果表明,不同品系象草株高、分蘖数、茎叶比等指标均存在品系间显著或极显著差异,总体趋势是植株高大、分蘖数较少的品系生物产量高;结构组成中纤维素、半纤维素和木质素含量在不同品系间存在显著或极显著差异。综合不同品系的生物产量及生物乙醇产量表现,品系P118、P115和P33表现较好,具有较高的木质纤维素乙醇生产潜力,可作为生物质能源植物新品种开发利用。