微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性研究

目的评价微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的可行性。方法用微孔板Alamar Blue显色法对41株和70株结核分枝杆菌临床分离株分别检测利福平和异烟肼的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定利福平和异烟肼的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏比例法进行比较。结果微孔板Alamar Blue显色法获得结果平均时间为8d,利福平和异烟肼的最佳耐药阈值均为0.5μg/mL,以罗氏比例法为金标准,利福平的灵敏度和特异度均为100.0%,异烟肼的灵敏度和特异度分别为96.6%和100.0%。结论微孔板Alamar Blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的快速检测。

44株甘肃疑似非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的对甘肃44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。方法收集2010年甘肃省兰州市胸科医院从结核病患者痰标本中分离的、抗酸染色阳性和改良罗氏培养基,TCH和PNB鉴别培养基培养鉴定为非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacteria,NTM),采用rpoB-PRA和PCR产物DNA测序等分子生物学方法进行细菌种的鉴定。结果共对44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行了鉴定。经rpoB-PRA、rpoB和hsp65基因DNA测序分析,其中非结核分枝杆菌13株(29.55%),包括龟分枝杆菌(M.chelonae)5株,戈登分枝杆菌(M.gordonae)4株,胞内分枝杆菌(M.intracellulare)2株,赛特分枝杆菌(M.setense)1株,耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)1株;诺卡菌(Nocardia)31株(70.45%),其中鼻疽诺卡菌(N.farcinica)30株,卡尔涅亚诺卡菌(N.carnea)1株。结论抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为非结核分枝杆菌临床分离株中包含不同种类的非结核分枝杆菌和诺卡菌,应开展进一步菌种鉴定,以便于临床正确诊断和合理治疗。

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究

目的探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。方法采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。结果 INH MIC为0.2500～1.0000μg/ml(低水平耐药菌株)和MIC≥2.0000μg/ml(高水平耐药菌株)的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者[53.8%(7/13),4.3%(2/46)],katG315突变率前者低于后者[15.4%(2/13),76.1%(35/46)],χ2值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000μg/ml和MIC≥32.0000μg/ml的RFP耐药株,rpoB531和526位总突变率前者低于后者[62.5%(5/8),95.5%(21/22)],P确切概率=0.048。结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG315突变与INH高水平耐药有关;rpoB531和526位突变与RFP高水平耐药有关。

4种药物外排泵抑制剂对异烟肼抗结核分枝杆菌最低抑菌浓度的影响研究

目的研究4种药物外排泵抑制剂对异烟肼抗结核分枝杆菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的影响。方法纳入37株单耐异烟肼和10株全敏的结核菌临床分离株以及H37Rv,应用微孔板Alamar blue显色法检测以上菌株分别加入维拉帕米(verapamil,VP)、氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)、硫利哒嗪(thioridazine,TZ)和羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone,CCCP)4种外排泵抑制剂前后异烟肼抗结核菌的MIC的变化情况,并用配对χ2检验比较不同抑制剂对异烟肼MIC的影响程度。结果 37株单耐异烟肼结核菌中,分别有64.86%(24/37)、48.65%(18/37)、43.24%(16/37)和37.84%(14/37)的菌株被VP、CPZ、TZ和CCCP降低异烟肼MIC,且均以降低2倍为主,VP致异烟肼MIC降低2倍及以上的菌株数均高于TZ和CCCP,P值均<0.05。6/10的全敏结核菌以及H37Rv的异烟肼MIC被VP降低2倍及以上。结论 4种药物外排泵抑制剂对异烟肼抗结核菌存在不同程度的影响,VP降低异烟肼MIC的作用较强。

从新生儿分离到1株ST5型单增李斯特菌的药敏及基因组特征分析

目的对1株新生儿感染ST5型单增李斯特菌LK100进行全基因组测序和耐药分析。方法从新生儿感染患者胃液标本中分离到1株疑似单增李斯特菌,采用VITEK2-Compact全自动微生物鉴定仪和16S RNA序列测定进行鉴定,对鉴定的菌株应用E-test法进行5种药物敏感性试验,同时利用三代测序平台对菌株进行全基因组测序,获得菌株基因组序列。基于基因组序列利用CARD抗生素耐药基因数据库获得菌株的耐药元件。基因组序列与巴斯德数据库中的单增李斯特菌的数据进行比对,获得菌株的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、血清分型;同时利用毒力分析网站对菌株的毒力基因分布进行分析。利用前噬菌体数据库,在线进行菌株噬菌体的预测和注释。结果从新生儿患者分离到的菌株(LK100)鉴定为单增李斯特菌,该菌株对青霉素、氨苄西林、美罗培南、红霉素及复方新诺明等5种抗生素均敏感,其MLST分型为ST5型,血清型为1/2b-3b,染色体基因组全长为3032582 bp,GC含量为37.91%,包含一条完整的环状质粒,序列长度为52822 bp,携带LIPI-1毒力岛,且具有完整的InlA蛋白。固有耐药相关基因主要在染色体,1个SSI-1压力生存岛和1个LGI2基因组岛;LK100基因组中共预测到5个前噬菌体序列。结论本研究综合分析说明了ST5型临床单增李斯特菌的基因组特征和抗生素敏感性特点,为后期临床单增李斯特菌的感染治疗及其致病机理的研究提供数据支持。

卷曲温度对中碳钢组织及力学性能的影响

在中碳钢轧制变形过程中,卷曲温度对其显微组织和力学性能有较大影响。利用拉伸试验、维氏硬度测试、金相检验及扫描电镜分析等方法对不同卷曲温度下的中碳钢进行分析。结果表明:随着卷曲温度的降低,铁素体和珠光体分布更加均匀,珠光体片层间距减小,带状级别变小,材料的强度、韧性、硬度明显变大,塑性变差。

1例产后哺乳期腹泻患者分离单增李斯特菌的生物学特征分析

目的分析1例单增李斯特菌所致产后哺乳期腹泻患者的临床特征、病原学、菌株的毒力基因携带及分子特征。方法搜集病例的临床相关信息;采用选择性增菌和显色培养基分离单增李斯特菌,用VITEK-2 COMPACT30全自动细菌分析仪鉴定分离菌株,采用单增李斯特菌诊断血清对分离株进行血清分型,使用脉冲场凝胶电泳技术及多位点序列分型技术进行分子分型,应用PCR检测毒力基因,并用E-test方法检测分离菌株对5种抗生素的药物敏感性。结果产后哺乳期患者食用甜瓜和冰箱冷藏的酸奶后引起不能自限的腹泻,检测结果证实病原为4b血清型、ST145序列型单增李斯特菌。分离菌株携带毒力基因plcB、act、hly、iap、prfA、inlA,对青霉素、氨苄西林、美罗培南、红霉素和复方磺胺均敏感。结论单增李斯特菌引起的腹泻患者容易漏诊,加强孕妇等高危人群腹泻患者粪便标本中单增李斯特菌的检测,对于单增李斯特菌病病人的及时治疗,预防不良预后具有重要的公共卫生意义,尤其对这一特殊型别单增李斯特菌在我国引起的病例感染应引起重视,其可能的感染来源和致病风险值得进一步的研究。

某妇产医院B族链球菌临床分布特征及耐药性变迁

目的调查B族链球菌(GBS)临床分布特征及其耐药性变迁,为临床患者GBS感染的预防与治疗提供科学依据。方法回顾性分析石家庄市某妇产医院2014年1月1日-2017年12月31日临床送检标本中GBS的分离情况,分析GBS的临床分布特征,比较不同年份GBS检出情况及耐药率。结果共分离GBS 2 368株,标本来源主要为阴道和肛门括约肌拭子(2 229株,占94.13%),检出的主要病区为产科门诊及其病房(占94.97%)。孕35~37周孕妇阴道和肛门括约肌拭子标本中共检出GBS 2 229株,检出率为3.68%。围产期孕妇阴道和肛门括约肌拭子标本GBS检出率呈逐年升高趋势,差异有统计学意义(χ2趋势=44.78,P<0.05)。25~34岁年龄段孕妇阴道和肛门括约肌拭子标本中的GBS检出率最高(3.69%)。2 368株GBS对阿奇霉素的耐药率最高(78.21%),其次是红霉素(77.62%)、克林霉素(77.15%)和左氧氟沙星(47.68%),对青霉素、万古霉素、利奈唑胺、头孢呋辛及头孢曲松均敏感。趋势卡方检验结果表明,GBS对红霉素、阿奇霉素、克林霉素及左氧氟沙星的耐药率呈逐年增高的趋势,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论该院孕35~37周孕妇分离的GBS及GBS对部分抗菌药物的耐药率呈逐年升高趋势,但青霉素可作为该地区治疗GBS感染的首选药物,临床医务人员应注重GBS的检测及耐药变化趋势。

重度子痫前期患者血清生长抑制特异性蛋白6水平变化与病情严重程度的相关性研究

目的分析重度子痫前期患者血清生长抑制特异性蛋白6(GAS6)水平与病情严重程度的相关性,探讨GAS6能否作为诊断重度子痫前期患者病情的生物标志物。方法选取2018年1-6月该院收治的重度子痫前期患者53例作为病例组,另选取同期正常妊娠妇女32例作为对照组。采用ELISA检测血清GAS6水平,其他实验室指标按常规检测方法实施。结果病例组血清GAS6水平为(205.98±61.28)pg/mL,低于对照组的(296.77±68.17)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清GAS6和肌酐水平对重度子痫前期的诊断有一定价值。建立ROC曲线评价血清GAS6水平对重度子痫前期的诊断效能,其灵敏度和特异度分别为92.5%和59.3%,切割值为258.21pg/mL。结合其他多项临床及实验室检测指标进行Pearson分析,结果显示,血清GAS6水平与收缩压呈负相关(r=-0.349,P<0.05),与血小板计数呈正相关(r=0.391,P<0.05)。结论重度子痫前期患者血清GAS6水平明显降低,对重度子痫前期有保护作用,可作为评价其病情严重程度的实验室诊断标志物。

重度子痫前期患者血清GAS6与其他炎症因子的相关性研究

目的探讨重度子痫前期患者血清生长停滞特异性基因产物6(GAS6)的水平与其他炎症因子的相关性。方法回顾性选取2018年1月-10月期间我院分娩的产妇133例,其中重度子痫前期产妇77例为病例组,正常妊娠产妇56例为对照组。酶联免疫吸附试验检测血清GAS6、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素18(IL-18)水平,生化分析仪检测C反应蛋白(CRP),分析2组各指标差异及有差异的指标与GAS6的相关性。结果病例组收缩压、舒张压高于对照组,孕周少于对照组,血清GAS6以及IL-10水平降低,而IL-6、IL-18水平高于对照组(P<0.05)。血清GAS6水平变化与IL-6水平呈负相关。结论重度子痫前期患者血清GAS6参与炎症反应,发挥抗炎因子的作用,其血清浓度与炎症反应严重程度存在相关性。

血清生长停滞特异性蛋白6c.834+7G>A单核苷酸多态性与重度子痫前期风险增加的相关性

目的检测重度子痫前期患者血清生长停滞特异性蛋白6(GAS6)基因位点c.834+7G>A多态性,评价其与疾病风险增加的相关性及作为生物标志物预警重度子痫前期(SPE)患者的意义。方法563例育龄妇女纳入本研究,SPE组为213例重度子痫前期患者,对照组为350例正常妊娠妇女。采用常规检测收集普通风险指标并比较其在SPE组及对照组之间的差异。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR⁃RFLP)检测GAS6 c.834+7G>A的基因型,对GAS6单核苷酸多态性资料进行卡方检验,Logistic回归分析计算不同等位基因及基因型的优势比(odds ratio,OR)及95%置信区间(95%CI)。结果SPE组与对照组普通风险指标(如孕周、血小板计数、收缩压、舒张压、血肌酐、尿蛋白和D⁃Dimer等)均存在差异。SPE组GAS6 c.834+7G>A位点等位基因G频率(0.651)高于对照组(0.463),差异有统计学意义(P<0.05);同时与等位基因A相比,等位基因G患病的风险提高2.2倍(OR=2.157,95%CI:1.683~2.766)。SPE组GAS6 c.834+7G>A位点基因型GG频率(0.512)明显高于对照组(0.200),差异有统计学意义(P<0.05);且与等位基因AA相比,基因型GG患病的风险提高3.4倍(OR=3.397,95%CI:2.131~5.416),与等位基因AG相比提高4.8倍(OR=4.775,95%CI:3.143~7.256)。结论SPE组GAS6 c.834+7G>A等位基因及基因型频率与对照组存在差异。等位基因G及基因型GG与重度子痫前期风险增加具有相关性,该位点的基因分型可为重度子痫前期的发病机理研究奠定基础。

抗体联合亲和力检测诊断巨细胞病毒宫内感染的临床研究

目的:通过人巨细胞病毒抗体联合IgG亲和力的检测,以鉴别感染时期,评估胎儿巨细胞病毒感染风险。方法:收集我院2016年1月~2017年11月130例孕妇巨细胞病毒IgM抗体和IgG抗体双阳性的标本,采用ELISA解离法测定孕妇血清HCMV-IgG亲和力,同时采用定量PCR方法进行孕妇尿巨细胞病毒核酸检测,跟踪随访胎儿结局;根据结果将入组孕妇分成3组,A组为高亲和力,B组为亲和力灰区,C组为低亲和力。结果:130例标本中,102例(78.46%)检测为高亲和力,HCMV-DNA均小于阈值,所产胎儿状况良好;11例(8.46%)检测为亲和力灰区,其中有1例HCMV-DNA阳性,所产胎儿诊断为先天性HCMV感染;17例(13.07%)检测为低亲和力,其中7例HCMV-DNA阳性,1例所产胎儿诊断为先天性HCMV感染,1例流产。结论:人巨细胞IgM阳性、IgG阳性及高IgG亲和力的孕产妇为宫内感染低风险,胎儿结局良好。IgM阳性、IgG阳性及低IgG亲和力的孕产妇宫内感染高风险,出现胎儿先天性HCMV感染的概率高。

某产线变速箱齿轮断裂原因

某产线变速箱齿轮发生断裂。采用宏观观察、化学成分分析、扫描电镜和能谱分析、金相检验以及硬度测试等方法,分析了齿轮断裂的原因。结果表明:齿轮化学成分不符合产品设计标准GB/T 699-2015的要求,且断裂轮齿组织为粗大的魏氏体,并存在大量以氧化铝为主的非金属夹杂物,导致齿轮的韧性和耐磨性大幅降低。在服役过程中,齿轮在传递动力时长期受弯曲疲劳应力以及异常组织和夹杂物的影响,最终发生断裂。

硫化锰混合夹杂物对管线钢氢致开裂的影响

采用光学显微镜、扫描电子显微镜、能谱仪等分析了氢致开裂管线钢试样的夹杂物形貌和成分,结合试验对管线钢的开裂原因进行了综合分析,并提出了工艺优化措施,结果可为抗酸腐蚀管线钢的生产和研发提供借鉴。

ASPEX全自动夹杂物分析仪试样的制备工艺

ASPEX全自动夹杂物分析仪对试样检测面的平行度和清洁度均有较高要求。通过对已有的扫描电镜类夹杂物分析用试样制备工艺进行改进,增加了冲洗、清抛、清洁等工艺步骤,并严格规范了试样安装步骤,确定了合理的ASPEX全自动夹杂物分析仪试样制备工艺。结果表明:使用该工艺制备的试样质量稳定,能够满足ASPEX全自动夹杂物分析仪全自动分析要求,改进后ASPEX全自动夹杂物分析仪对夹杂物自动识别的准确率由原来的54.43%提高到97.05%。

某QSTE500TM钢零件折弯开裂原因

某QSTE500TM钢零件在冲压过程中发生折弯开裂。采用宏观观察、化学成分分析、金相检验、扫描电镜和能谱分析等方法对零件的开裂原因进行分析。结果表明:零件中的硫元素和锰元素含量较高,以及锰元素的偏析是钢中产生带状组织的主要原因;带状组织中分布着非金属夹杂物,夹杂物与基体界面的结合力弱,使零件在变形时产生裂纹;试样中的硫化锰使零件形成了多个小裂纹源,在冲压变形时造成零件折弯开裂。

唐山南湖中央生态湿地公园水环境可持续发展研究

城市生态公园已经作为城市建设必不可少的组成部分,生态公园在提供给人们休闲娱乐场所的同时,也改善着城市环境。以唐山南湖生态公园建设作为研究对象,探求当前生态公园建设中存在的水环境可持续发展问题及解决措施。

基于LED光催化作用的可视化生物传感新方法快速超灵敏检测microRNA-21

目的:建立基于三交联(three-way junction,TWJ)DNA纳米结构及LED光催化作用的可视化生物传感方法快速超灵敏检测microRNA-21(miRNA-21)。方法:将生物素标记的miRNA-21捕获探针固定于亲和素化的96孔板上,捕获探针能够有效的结合靶物质miRNA-21,随后加入DNA检测探针P1、P2、P3,使其自组装形成TWJ DNA纳米结构。加入SYBR Green I后,dsDNA-SYBR Green I复合物在LED光照射下可催化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)产生显色反应,其吸光度与miRNA-21浓度成明显比例关系,从而可对miRNA-21浓度进行定量检测。结果:在最佳反应条件下,该方法最低检测限可达5.49pmol/L,充分说明该方法具有良好的灵敏度。考察方法的精密度,相对标准偏差RSD均在7.3%以下。该方法的回收率在79.8~128.8%之间,说明该方法具有良好的精密度和回收率。结论:本研究建立了一种基于TWJ DNA纳米结构及LED光催化作用的可视化生物传感分析方法,能够快速、超灵敏检测miRNA-21。该方法为miRNA的检测提供了新思路。

合金钢晶间氧化试样制备方法

为了能够清晰地观测到材料的晶间氧化,准确地测量晶间氧化的深度,采用热镶嵌和冷镶嵌等方法制备试样。试样经过磨制、抛光等工序后,在光学显微镜下对试样的边部形态进行观测,以选择最优的试样制备方法。结果表明:在磨制和抛光试样的过程中,要保护好试样边部,以避免划痕、圆角等现象发生。

异烟肼诱导致单耐异烟肼结核分枝杆菌假定药物外排泵基因表达量变化的初步研究

目的检测单耐异烟肼结核分枝杆菌经异烟肼诱导培养前后假定药物外排泵基因表达量的变化，探讨可能导致结核分枝杆菌对异烟肼耐药的外排泵基因及导致基因高表达的原因。方法选取35株单耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株、10株全敏结核分枝杆菌临床分离株和H37Rv（标准对照），对各菌株进行无异烟肼和亚抑菌异烟肼浓度（1／4MIC）的7H9液体培养基诱导培养，提取RNA后反转录并采用real—timePCR技术分别检测27个假定外排泵基因表达量的变化，用公式2^-△△CT计算每个假定基因相对表达量的差异倍数。结果耐药株中27个假定外排泵基因有13个基因高表达，高表达RV1258c基因的菌株数最多为6株，其次是高表达RV2265和RV0849的菌株各有5株。35株菌中14株菌（40．00％）有高表达的外排泵基因，6株（17．14％）菌株均只有1个假定外排泵基因高表达；8株（22．86％）菌株有两种及以上基因高表达，其中4、2、1、1株菌株分别有2、4、5、7个基因高表达；10株全敏菌株和H37Rv 27个假定外排泵基因均无高表达。结论Rv1258c、Rv2265和Rv0849等基因可能是导致结核分枝杆菌对异烟肼耐药的外排泵基因，异烟肼可能为结核分枝杆菌部分假定外排泵基因的诱导物而导致其激活并高表达。