基于胶体金免疫层析技术同步快速检测奶茶中的三种毒品成分

该研究基于胶体金免疫层析技术,建立了一种快速灵敏检测奶茶中甲基苯丙胺(methamphetamine,MET)、氯胺酮(ketamine,KET)和可卡因(cocaine,COC)这3种毒品成分的方法。通过优化人工抗原包被浓度、胶体金-单克隆抗体偶联物浓度、免疫反应时间等关键因素,实现奶茶中3种毒品成分的联合检测。结果显示,该方法对MET、KET和COC标准品的检测限分别为1.60、1.59、1.39 ng/mL。该方法可用于奶茶中3种毒品成分的测定,样品平均添加回收率为90%~109%,相对标准偏差<5%。该文建立的多靶标胶体金免疫层析方法具有简单、快速、灵敏、特异等优点,为现场鉴别奶茶中非法添加的MET、KET和COC提供了新思路。

基于荧光纳米颗粒的免疫层析技术同步快速检测药食同源药材中的3种真菌毒素

该研究建立了一种基于铕纳米粒子(Europium Nanoparticles,EuNPs)的超灵敏侧向流动免疫层析(Lateral Flow Immunochromatography,LFIC)方法,用于药食同源药材中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)和赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的同步快速检测。通过优化人工抗原包被质量浓度、人工抗原划膜位置、羊抗鼠IgG包被质量浓度、缓冲液pH值和免疫反应时间等关键因素,在简单的样品前处理步骤后,能够实现单个待测样品中3种目标真菌毒素的超灵敏联合检测。结果显示,该方法特异性良好,灵敏度高,AFB1、ZEN和OTA标准品的肉眼检测限分别为0.5、4.0、2.0 ng/mL,线性范围(IC10~IC90)分别为0.03~4.61、0.12~8.47、0.09~8.26 ng/mL。该方法用于人参、黄芪和当归中真菌毒素的测定,样品平均添加回收率为90.02%~109.39%,相对标准偏差(RSD)小于8.50%,实际样品检测结果与高效液相色谱法符合率达100%。因此,该研究构建的EuNPs-LFIC方法适用于药食同源药材中的AFB1、ZEN与OTA等真菌毒素的现场快速监测。

荧光免疫层析法同时快速检测畜禽肉制品中3种硝基呋喃类抗生素

目的建立荧光免疫层析法同时快速检测肉制品中硝基呋喃类(nitrofuran,NF)抗生素及其代谢物的方法。方法建立了一种基于铕纳米粒子(europium nanoparticles,EuNPs)的多重侧流免疫层析方法(multiple lateral flow immunoassay,mLFIA),用于5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮-2-硝基苯甲醛(3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazoli-dinone,NPAMOZ)、3-氨基-2-唑烷基酮-2-硝基苯甲醛(3-amino-2-oxazolidinone,NPAOZ)和呋喃苯烯酸钠(sodium nifurstylenate,NFS)的同时检测。结果NPAOZ、NPAMOZ和NFS的检出限(limitofdetection,LOD)分别为0.012、0.021和0.034ng/mL,平均回收率分别为97.83%~116.83%、96.35%~112.56%和97.45%~104.94%。实际样品检测中,EuNPs-mLFIA的检测结果与高效液相色谱-串联质谱法高度一致。结论本研究建立的EuNPs-mLFIA方法具有良好的灵敏度和稳定性,为多种NF抗生素的现场快速检测提供了新思路。

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75mg/L为宜.

抗生素对高粱离体培养反应的影响

探讨了 5种抗生素对高粱离体培养反应的影响。在 3种抑菌抗生素中 ,羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好。头孢霉素对高梁外植体离体培养的毒性比羧苄青霉素大 ,羧苄青霉素对愈伤组织的生长起促进作用 ,且只在高浓度才对分化有抑制作用。在农杆菌介导高梁遗传转化时 ,选用 2 5 0～ 5 0 0mg L的羧苄青霉素来抑菌是合适的。高梁不同基因型和外植体对潮霉素和卡那霉素的反应表现不同 ,但对潮霉素的反应比卡那霉素敏感。在筛选转化体时 ,以潮霉素较好 ,使用浓度对茎尖和幼胚以 2 5～ 5 0mg L为宜 ,对愈伤组织则以 5 0～ 75mg L为宜。

高粱茎尖再生体系及其遗传转化影响因子的研究

本文对高粱茎尖再生体系及其转化影响因子进行了研究。不同基因型的茎尖再生频率有很大差异,说明基因型是影响茎尖再生的一个重要因素。在9种不同的激素组合中,以0.25MG/L KT、0.5MG/LBAP和0.25MG/L IAA对茎尖的再生效果最好。在MS培养基的基础上,采用B5培养基维生素并添加200MG/L L-ASN,10MG/L抗坏血酸和100MG/L PVP可提高茎尖再生频率。对农杆菌介导高粱茎尖转化的因子进行了优化,获得较高转化频率的条件为:茎尖预培养时间3D,在OD600值为0.5农杆菌菌液中感染10MIN,共培养3D。

苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制

直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。

苏丹红Ⅰ号多克隆抗体的制备与特异性鉴定

采用琥珀酸酐法,分别以BSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原并通过SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和苏丹红I号的复合物.将合成的免疫抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体,经辛酸纯化,间接ELISA法测得有高效价血清抗体;进一步采用琼脂双扩散试验和免疫金试纸法鉴定出血清中含有苏丹红Ⅰ号特异性抗体.

转基因高粱Cry1Ab蛋白含量的比较研究

通过农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱恢复系115中,共获得13个独立的转基因株系,26株转基因植株,转化率为5.1%;GUS活性、PCR、Southern和Western杂交分析表明,此基因已整合进高粱基因组并得到正确表达。利用ELISA试剂盒测定Cry1Ab蛋白含量,结果表明,不同转基因植株的Cry1Ab蛋白含量有明显差异,最高可达0.850μg/g,占可溶性蛋白的0.016%,还有一些转基因植株中不能表达;同一转基因植株的不同组织中表达量有明显差异,其顺序为:叶>颖壳>籽粒>根>茎;不同部位的叶片也有差异,其顺序为:中部叶>基部叶>新叶。

磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成与鉴定

采用重氮化法将磺胺二甲嘧啶(SM2)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联合成人工抗原SM2-BSA与SM2-OVA,并通过紫外扫描、SDS-PAGE电泳、凝胶层析和红外光谱等方法扫描进一步检测合成效果.紫外扫描检测结果显示,SM2与BSA、OVA偶联成功,SM2-BSA与SM2-OVA的特征波长分别为2762、77 nm;经计算SM2-BSA与SM2-OVA的分子结合比例分别为5.3∶1和18.4∶1;SDS-PAGE电泳迁移率、凝胶层析出峰时间和红外光谱曲线特征均显示SM2与BSA、OVA偶联成功.

食品中苏丹红HPLC检测方法研究

[目的]建立食品中简便、易行检测苏丹红Ⅰ～Ⅳ的高效液相色谱方法。[方法]采用液相萃取样品处理,C18色谱柱,流动相A为1%冰醋酸的水溶液,流动相B为1%冰醋酸、20%丙酮的乙腈溶液,梯度洗脱,检测波长478 nm,对辣椒食品中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ号进行了分离和检测。[结果]苏丹红Ⅰ～Ⅳ的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.996 6、0.997 4、0.993 7,精密度相对标准偏差分别为4.25%、5.34%、1.99%、7.56%;辣椒粉样品中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ号的加样回收率分别为89.87%、90.90%、87.55%、81.07%;辣椒油样品中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ号的加样回收率分别为94.83%、91.99%、88.83%和86.86%;苏丹红Ⅰ～Ⅳ号的最低检测限分别为5.02、2.46、2.30、5.02μg/kg。[结论]该方法样品处理简单、快速,灵敏度、精密度符合要求,可在基层实验室推广应用。

乙肝和肝癌诊断蛋白芯片的制备及评价

为进行乙肝与肝癌两种疾病的早期诊断,探讨两疾病发生之间的相互关系,研究制备了带有4种标志物(AFP,CEA,Beta-HCG和HBsAg)的抗体检测芯片,该芯片的检测灵敏度分别达到20,3,3和7 ng/ml,对乙肝和肝癌病人血清进行检测发现,在HBsAg抗体、AFP和CEA两种抗体位点出现特异性的杂交信号,而在正常血清中未出现。该芯片的制备在乙肝和肝癌的早期筛查以及疾病转化研究方面具有重要的临床应用价值。

sbeIIb基因hpRNA结构植物转化载体的构建

hpRNA介导基因沉默技术是一种下调某个内源目的基因表达的有效技术.本研究将淀粉分支酶基因sbeIIb启动子控制下的sbeIIb基因的hpRNA结构构建于植物双元表达载体pCAMBIA1305.1中,并将该重组载体导入农杆菌超毒力菌株AGL1中,构建了一种适于禾本科的植物转化载体.

转基因植物生物反应器的研究进展

叙述了利用转基因植物作为生物反应器生产重组药物蛋白的研究和商业化现状及其发展趋势,并对其表达和纯化策略以及表达效率的提高作了讨论.

国际贸易单一窗口模式、演进及关键要素

在介绍国际贸易单一窗口概念和模式的基础上,总结国际上建立单一窗口的经验,包括五个阶段演进模式和12个关键要素,提出构建我国国际贸易单一窗口需要解决的三个关键问题:完善相关法律法规、成立高级别的领导小组和使用国际标准与建议。

国际贸易单证标准化推广应用研究

通过网络、问卷等方式调研国际贸易单证标准在我国推广应用的具体情况,分析政府相关部门、专业机构、外贸企业和高等职业院校在宣传与推广应用国际贸易单证标准方面存在的问题,最后提出若干政策建议。

水稻转化系统应用研究进展

本文简单综述了水稻遗传转化体系研究及其转化系统应用研究进展。

基于SSD及剪枝神经网络的复杂环境下混凝土裂缝识别

为解决裂缝识别算法在复杂环境下性能不佳的问题,提出了一种基于单激发多框检测器(SSD)算法的改进方法.该方法通过调整原始SSD算法中不同分辨率先验框数量的组合,实现对存在噪声的裂缝图像的高精度裂缝识别.在真实场景和实验室中采集足够数量的裂缝图像并进行预处理,利用椒盐算法对裂缝数据集添加噪声模拟复杂环境中的裂缝图像.在识别裂缝数据集时,对改进方法与原始SSD算法进行对比分析.结果表明,原始SSD算法和改进方法识别裂缝的准确性均随噪声水平的增加而降低.在高密度下添加20%等级的椒盐噪声时,原始SSD算法识别裂缝的准确率仅为31.7%,而改进方法的准确率则高达93.0%.因此,改进方法具有较强的抗噪能力,可用于复杂环境下的裂缝识别.

转基因产品检测技术研究进展

转基因生物及其产品已经进入国际贸易 ,有效的检测已成为转基因生物及产品能否获得足够的研究空间和良好开发市场的关键所在 .

构建国际贸易单一窗口的重要工具——WCO数据模型

在介绍国际贸易单一窗口数据简化和标准化的四个步骤基础上,阐述世界海关组织数据模型的内容、特点和运用情况,并提出我国推广应用WCO数据模型的对策建议:以世界海关组织数据模型为基础建立符合我国要求的标准数据集,以自贸区为试点逐步向全国推广标准数据集,以"一带一路"为切入点实现互联互通。