BOC2抑制N-甲酰肽/甲酰肽受体信号通路减轻SAP炎症损伤的机制研究

目的观察BOC-Phe-Leu-Phe-Leu-Phe(BOC2)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血中6种线粒体N-甲酰肽(NFPs)及胰腺组织中2种甲酰肽受体(FPRs)表达的影响,探讨其减轻SAP炎症损伤的机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组,模型组,BOC2低、高剂量组(分别为0.1、0.2 mg/kg),每组10只。后3组以胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠(50 mg/kg)制备SAP模型。造模结束后0.5 h腹腔注射相应剂量药物,4 h取材。苏木精-伊红染色观察胰腺病理改变;蛋白免疫印迹法检测血浆中NFPs的表达;免疫组化法检测胰腺FPRs表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测胰腺局部组织炎性因子的表达。结果与模型组比较,BOC2低、高剂量组胰腺出血、腺泡细胞坏死、炎性细胞浸润、水肿等病理现象均改善;胰腺病理评分,血浆线粒体NADH-泛素氧化还原酶链(MT-ND)1、MT-ND2、MT-ND3、MT-ND5、MT-ND6表达,胰腺FPRs表达,血浆及胰腺组织中3种炎性因子表达均下降(P<0.05)。结论BOC2可通过拮抗线粒体NFPs/FPRs信号通路减少炎性因子产生,减轻SAP炎症损伤。

基于Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究加味旋覆代赭汤治疗食管癌前病变的作用机制

目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模成功后,分别进行药物灌胃干预,空白组、模型组用生理盐水灌胃,中药组和西药组分别给予加味旋覆代赭汤、西药(雷贝拉唑+莫沙必利)灌胃,给药8周取材。利用光学显微镜观察食管上皮组织的形态学变化;分别应用蛋白质印迹法(Western-blot)及聚合酶链式反应(PCR)检测食管上皮组织Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠食管上皮病理积分升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组大鼠食管上皮病理积分均降低(P<0.01)。PCR及Western-blot检测结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,中药、西药组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均增高(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠食管组织中Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可能通过下调Bcl-2/Bax比值,增加线粒体外膜通透性,释放凋亡因子,激活Caspase-3,使病变组织发生凋亡,扭转食管上皮异型增生,从而起到治疗食管癌前病变的作用。

探讨血必净注射液治疗重症急性胰腺炎肺损伤的机制

目的:探讨血必净(XBJ)注射液对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤模型的治疗机制。方法:将80只雄性Sprauge-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:对照组、SAP模型组、XBJ低剂量治疗组、XBJ高剂量治疗组,每组20只。除对照组,各组大鼠均经胰胆管匀速逆行注射4.5%牛磺胆酸钠溶液(0.1 mL/100 g,0.05 mL/min)以诱发SAP,造模成功30 min后,将XBJ低、高剂量治疗组大鼠经尾静脉注射XBJ(剂量分别为5、20 mL/kg),对照组及模型组给予等体积生理盐水。24 h后,从每组中随机抽取10只大鼠,经尾静脉注射Evans blue检测肺组织毛细血管通透性。处死余下的各组大鼠,取腹水测量其体积;取部分胰腺及肺组织计算组织干湿重比值;苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺、肺脏的病理改变,并进行病理评分;酶联免疫吸附法(ELISA)检测腹水淀粉酶含量;Western印迹法检测肺组织中ROCK1、MYPT1、pMLC的相对表达量。结果:SAP模型组较对照组腹水量及腹水淀粉酶含量明显升高(t=-21.73、-40.72,均P<0.01);SAP模型组、XBJ低剂量组、XBJ高剂量组腹水量及腹水淀粉酶含量逐渐降低(F=39.66、141.78,均P<0.01)。SAP模型组较对照组,胰腺干湿重比值、肺脏干湿重比值明显降低(t=19.83、15.47,均P<0.01),肺组织中Evans blue渗出量明显增高(t=-27.9,P<0.01);SAP模型组、XBJ低剂量组、XBJ高剂量组胰腺干湿重比值、肺脏干湿重比值逐渐升高(F=75.19、15.47,均P<0.01),肺组织中Evans blue渗出量逐渐降低(F=99.52,P<0.01)。对照组大鼠胰腺组织结构完整,SAP模型组大鼠胰腺病理得分明显升高(t=-42.79,P<0.01);XBJ低剂量组、XBJ高剂量组大鼠胰腺病理得分逐渐降低(F=175.43,P<0.01)。对照组大鼠肺组织结构完整,SAP模型组大鼠病理得分明显升高(t=-37.57,P<0.01);XBJ低剂量组、XBJ高剂量组大鼠肺组织病变减轻,病理得分逐渐降低(F=126.00,P<0.01)。SAP模型组较对照组肺组织中ROCK1、pMLC蛋白表达量明显升高(t=-16.97、-13.53,均P<0.01),MYPT1表达量显著降低(t=23.30,P<0.01);SAP模型组、XBJ低剂量组、XBJ高剂量组肺组织中ROCK1、pMLC蛋白表达量逐渐降低(F=84.89、50.84,均P<0.01),MYPT1表达量显著升高(F=48.68,P<0.01)。结论:XBJ通过降低多种细胞因子及DAMPs形成,抑制ROCK1-MYPT1-pMLC信号通路活化,对SAP肺损伤起到治疗的作用。

柴胡龙骨牡蛎汤加味对戊四氮点燃癫痫大鼠炎症因子表达的影响

目的:基于炎症因子表达观察柴胡龙骨牡蛎汤加味治疗癫痫的作用机制。方法:40只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组、西药组。采用戊四氮(PTZ)腹腔注射造模结束后,每组均予治疗4周,模型组和正常对照组每日给予0.9%氯化钠灌胃,西药组给予丙戊酸钠缓释片灌胃,中药组给予汤剂柴胡龙骨牡蛎汤加味灌胃。造模开始及治疗期间,对各组大鼠行为学进行观察。治疗28天后,检测各组大鼠血清中癫痫相关炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的变化,HE染色,观察海马结构的病理学变化情况。结果:(1)各组大鼠行为学变化:西药组及中药组大鼠癫痫发作的次数和级别都有所减少,体重有增加趋势;中药组发作分级及平均癫痫发作时间降低明显。(2)各组大鼠海马结构变化:与模型组相比,西药组海马组织细胞损伤程度减轻,神经元少量变性,偶见胶质细胞增生;中药组海马组织细胞损伤程度较轻,神经元丢失及变性不明显。(3)炎症因子检测:中药组和西药组的IL-6和TNF-α与模型组相比,表达明显降低,IL-10表达明显升高,中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:柴胡龙骨牡蛎汤加味可能通过下调癫痫大鼠血清炎症因子IL-6、TNF-α的表达,升高IL-10表达,从而减少癫痫大鼠海马神经元损伤,保护海马神经元细胞,起到控制癫痫发作次数和发作频率,缩短发作时间的作用。

甘珀酸抑制eATP-P2X7R-NLRP3信号通路减轻慢性胰腺炎纤维化的实验研究

目的探讨细胞外ATP(eATP)-P2X7R-NLRP3信号通路在慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化中的作用以及ATP抑制剂甘珀酸(CBX)对CP的治疗作用。方法将6周龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为5组:正常组,模型组,CBX低、中、高剂量组(分别为25、50、100 mg/kg)。造模结束后,CBX各剂量组小鼠分别腹腔注射相应剂量的药物。末次给药24 h后将小鼠脱颈处死。HE染色评估胰腺组织病理学改变;ATP化学发光法测定小鼠胰腺组织eATP水平;免疫荧光染色检测P2X7R、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)检测P2X7R、NLRP3、Caspase-1、缝隙连接蛋白(PAN-1)mRNA的表达。结果HE染色,光镜下可见正常组小鼠胰腺细胞分布紧密,排列规则,无纤维化及炎症细胞浸润。模型组细胞间隙增宽、腺泡萎缩、炎症细胞浸润且有大量胶原纤维生成,组织学评分较正常组显著升高(P<0.01);与模型组相比,CBX中、高剂量组炎症细胞浸润及胶原纤维生成均减少,组织学评分降低。模型组小鼠造模后eATP水平较正常组显著升高(P<0.01),CBX中、高剂量组给药2周后,胰腺组织eATP水平均低于模型组。免疫荧光染色法和qPCR检测均显示,与正常组相比,模型组P2X7R、NLRP3、Caspase-1蛋白和mRNA表达升高(P<0.01);与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调(P<0.05)。此外,qPCR检测结果还显示,模型组小鼠PAN-1 mRNA表达较正常组显著上调;与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调(P<0.01)。结论CP病程中eATP水平显著增加并激活P2X7R,促进NLRP3炎性体组装,加重胰腺纤维化,CBX可下调P2X7R、NLRP3、Caspase-1,减轻胰腺炎症损伤及纤维化,从而发挥治疗作用。

非可控性炎症与肿瘤相关性研究

非可控性炎症在多种疾病的发生发展过程中起到了非常重要的作用并能够通过促使正常细胞发生DNA损伤、原癌基因突变、基因组不稳定,从而诱发肿瘤。许多肿瘤的发生发展与炎症的反复发作使之处于非可控性炎症状态密切相关,靶向抑制炎症介质、炎症相关转录因子或炎性细胞可以减少肿瘤的发生和播散。本文就近期肿瘤微环境中慢性炎症及多种细胞因子在肿瘤的发生、发展、侵袭转移等方面作用的相关文献进行了综述,简明介绍了一些炎-癌恶性转化过程中的关键节点及分子,希望能够为今后研究非可控性炎症恶性转化的机制及肿瘤的预防和治疗提供新的思路。

紫杉醇-PECT原位凝胶抗肿瘤作用的初步评价

目的对紫杉醇-PECT温敏型可注射原位凝胶进行药效学评价。方法建立小鼠肿瘤EAC实体瘤动物模型,分别植入空白凝胶材料PECT(实验1)、肿瘤组织旁及肿瘤组织中植入载药凝胶材料(试验2、3)。以肿瘤生长速率、抑制率、动物体质量增长率为评价指标。结果接受空白凝胶材料植入动物的肿瘤生长抑制率为-3.94%～8.91%;瘤旁植入载药凝胶10 mg/kg,肿瘤生长抑制率为56.62%(P<0.05),效果优于同等剂量静脉注射给药组的2.99%(P>0.1);相同剂量下瘤内植入,肿瘤生长抑制率为38.16%(P<0.05),与同等剂量静脉注射效果相当(25.49%,P>0.1)。结论 PECT凝胶材料原位植入对肿瘤生长没有影响,紫杉醇-PECT载药材料植入给药与注射剂相比能够显著提高疗效,降低毒性反应。

P2X7R拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究

目的探讨嘌呤能P2X7受体(P2X7R)拮抗剂——氧化三磷酸腺苷(OxATP)和亮蓝G(BBG)在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体活化和慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。方法 40只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、CP模型组、Ox ATP组和BBG组。除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外,其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作CP小鼠模型(6周)。造模结束后,CP模型组、Ox ATP组和BBG组分别予以腹腔注射生理盐水、Ox ATP(20μL,300μmol/L)和BBG(20μL,10μmol/L)处理,连续注射2周。然后处死各组小鼠并取胰腺组织,行病理学检查,以HE染色对胰腺病理组织学(炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度)进行评分,天狼星红染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估;免疫组化法检测胰腺P2X7R、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)中的累积光密度(IOD)值。结果与正常对照组比,CP模型组炎症损伤组织学评分增加,胰腺纤维化程度显著增加,P2X7R、NLRP3和Caspase-1免疫组化IOD值显著升高(P<0.05);与CP模型组相比,Ox ATP和BBG组炎症损伤组织学评分降低,HE染色纤维化评分、天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色均显著减轻(P<0.05),胰腺P2X7R、NLRP3和Caspase-1 IOD值均明显降低(P<0.05)。结论 P2X7R拮抗剂Ox ATP和BBG能够显著减轻CP小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度,阻断P2X7R-NLRP3炎性体信号通路,这有望成为治疗CP及其纤维化进程的一种潜在新策略。

扶正解毒祛瘀方联合奥沙利铂对人结直肠癌裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨扶正解毒祛瘀方(简称“扶正方”)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)对人结直肠癌HT-29裸鼠移植瘤的影响。方法:构建裸鼠移植性结直肠癌HT-29肿瘤模型,将其随机分为空白组、扶正方组、L-OHP组及扶正方+L-OHP组,每组10只。空白组给予生理盐水灌胃,扶正方(50g/kg)为灌胃给药;L-OHP(10mg/kg)为腹腔注射给药(ip)1次。扶正方+L-OHP组为L-OHP腹腔注射给药(ip)1次,扶正方灌胃(ig)给药,每日1次,连续21d。观察扶正方对皮下移植瘤的作用及与L-OHP合用的效果;并用RT-PCR及Westernblotting法检测细胞周期相关因子细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21(P21)的表达,比较各组的变化。结果:扶正方组、L-OHP组、扶正方+L-OHP组的抑瘤率分别为9.36%、29.69%、44.54%,均能抑制结肠癌移植瘤的生长。免疫器官脾的脏器指数空白组(0.41±0.04)、合用组(0.45±0.11),而扶正方组为(0.47±0.05),均高于L-OHP组(0.40±0.11);且扶正方组显著高于空白组(P<0.01)。PCR与Westernblotting结果均显示,与空白组比较,L-OHP组、扶正方+L-OHP组cyclinD1、CDK4、PCNA的表达下调(P<0.05,P<0.01),P21的表达上调(P<0.01);与L-OHP组比较,扶正方+L-OHP组PCNA(P<0.01)表达下调,P21的表达上调(P<0.01)。结论:扶正方与L-OHP单独和联合应用均对结肠癌小鼠移植瘤的生长有抑制作用,且两药合用不仅能增强化疗效果,同时在一定程度上抑制了L-OHP的毒性,其机制可能与影响周期相关因子的表达有关。

论反刍动物饲料蛋白质的保护方法

对于维持饲养和低生产水平的奶牛，靠微生物蛋白和饲料未降解蛋白，甚至仅靠微生物蛋白就可满足需要，但对于快速生长犊牛和高产奶牛（尤其是泌乳初期），微生物蛋白和饲料未降解蛋白就不能满足需要了。由于在能量一定、氮源充足的情况下，微生物产量相对稳定，所以解决此...

麦冬提取物“抗肿瘤Ⅰ号”小鼠体内抑瘤作用

目的观察植物药抗肿瘤Ⅰ号体内抑瘤作用。方法选用白血病L615、人巨细胞肺癌PG实体型、Lewis肺癌3种瘤株,接种肿瘤后分为5组:阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组、样品药物高、中、低3个剂量组,分别给药。其中,对照组灌胃生理盐水,环磷酰胺组50 mg/kg腹腔注射1次,高剂量组以1 g/kg·d连续灌胃给药3 d,中剂量组以同等剂量连续给药2 d,低剂量组仅给1 d。结果样品药能够明显延长615小鼠的带瘤生存时间,生命延长率可达到68.42%,能明显提高615小鼠的生存质量;而其对实体瘤的抑制作用也是非常明显的,监测结果显示其对裸鼠PG抑制作用可达73.54%,对Lewis肺癌抑瘤作用可达61.98%。结论植物药抗肿瘤Ⅰ号具有明显的体内抗肿瘤活性。

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。

新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测

新城疫以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。目前出现的鸡新城疫发病率一般在10％～25％，死亡率在15％～35％，产蛋鸡产蛋率下降30％左右，是危害养禽业的一种主要传染病。禽流感（AI）则是由A型流感病毒引起的一种禽类急性、热性、败血性、高度接触性传染病，不仅给畜牧业造成了巨大的损失，而且给人民身体健康带来严重威胁。我国政府将其列为一类动物疫病，家禽一旦感染高致病性禽流感病毒，死亡率为100％。

山东临沂地区治疗奶牛乳房炎的药物效果调查

在治疗奶牛乳房炎上,可以考虑选择几种比较敏感的药物合用或交替使用,以减少单个药物的奶牛耐药性,怎么看待药物敏感效果呢?

链霉素人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

利用直接化学交联法将链霉素(SM)与蛋白载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用紫外扫描和麦芽酚试验鉴定偶联成功。用免疫原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA测IC50,获得了效价为1:51200,IC50为23.62ng/ml的链霉素多克隆抗体,与双氢链霉素的交叉反应率为107%,与同类的其它药物均无交叉反应。

奶牛乳房炎致病菌的分离和鉴定

本试验对临沂兰山区养殖户45份乳样进行乳房炎致病菌的分离鉴定,共分离得到4种主要致病菌分别为大肠杆菌、无乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌。药敏试验表明该地区奶牛乳房炎治疗首选药物为先锋V、氯霉素和阿米卡星。

费县养鸡场新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测

本次检测费县某蛋鸡场血样30份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测。结果表明,该鸡场新城疫HI抗体效价≥5log2的占87%,新城疫免疫合格;而禽流感抗体效价≥5log2的占67%,禽流感H5亚型免疫失败,鸡场必须补免或重免禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。

沂南县某蛋鸡场新城疫、禽流感H_5亚型(Re-5株)抗体水平的监测

新城疫、禽流感作为危害养禽业的主要传染病,通过其抗体水平监测,分析免疫状态,对鸡群合理饲养,确保养鸡业健康发展。本次检测沂南县某蛋鸡场血样50份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测。试验结果表明,新城疫平均HI抗体效价为9.4 log 2,禽流感H5亚型(Re-5株)平均HI效价为7.64 log 2,说明整场免疫合格,但鸡群需要补种禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。

沂南县养鸡场新城疫抗体水平监测

新城疫是危害养禽业的一种主要传染病,通过其抗体水平监测,分析免疫状态,对鸡群科学饲养,确保养鸡业健康发展。本次检测沂南县某蛋鸡场血样50份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫抗体水平监测。试验结果表明样品平均HI抗体效价为9.4log2,说明整场免疫合格,不需要补种,新城疫疫苗能达到最佳效果,能抵抗新城疫病毒的侵入。

中国境内不同地理型东方蜜蜂线粒体DNA tRNA^(leu)～COⅡ基因多态性研究

【目的】从线粒体水平上探讨中国境内不同地理型东方蜜蜂的系统发育关系,为东方蜜蜂亚种分化的研究及我国境内东方蜜蜂资源的保护与合理开发利用提供基础资料。【方法】采用公开的E2、H2引物对11个不同地理型东方蜜蜂线粒体DNA tRNAleu～COⅡ基因进行了PCR扩增、测序,并利用相关软件和网站进行了序列比较分析。【结果】该序列长度为471bp;序列中共有9个位点发生变异;序列相似性均在99%以上;限制性酶切分析表明:云南保山东方蜜蜂缺少一个SwaⅠ酶切位点;部分编码蛋白序列比对表明,海南海口和吉林安图东方蜜蜂各有一个氨基酸发生变异。与GeneBank上公开登录的国内外有关东方蜜蜂相关序列的比较表明,单纯利用非编码区序列对比,不能把日本蜜蜂同中国大陆的东方蜜蜂区别开来;COⅡ基因部分序列对比显示,东方蜜蜂的线粒体类型包括:日本-韩国型、中国大陆型、中国台湾型、马来西亚沙巴州-印度黑色蜜蜂型、中国海南型、印度黄色蜜蜂型、泰国南部型和印度黑色蜜蜂型。【结论】中国境内不同地理型东方蜜蜂存在着较明显的遗传分化,其中海南东方蜜蜂由于长期的海岛隔离形成了一个独特的类群,支持了通过形态学认定的海南东方蜜蜂为东方蜜蜂的一个新亚种的观点。本研究部分测序结果已在美国国家生物信息中心(NCBI)网站GeneBank上登录,登录号为:DQ385854,DQ388602～DQ388609。