不同禽源副鸡禽杆菌的人工交叉致病试验

为探讨鸡源和鹅源副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)对鸡、鹅的跨禽种感染致病力情况,试验将3株鹅源Apg和4株鸡源Apg培养物经鼻窦腔接种60日龄鸡和鹅,观察接种禽的临床症状并进行表征评分。通过组织病理学检查、细菌分离培养和Apg种特异性PCR鉴定,研究鸡源和鹅源Apg对不同宿主的致病性情况。结果显示:鸡源和鹅源Apg均可导致鸡、鹅出现典型症状与病变,且对原宿主禽种致病性高于非原宿主禽种;发病鸡、鹅的病理变化相似,以面部皮下和鼻窦黏膜水肿、充血出血、纤维素性渗出,鼻甲骨变形为特征;发病鹅和鸡组织病理变化相似,鼻窦黏膜与鼻甲黏膜出现大量炎性细胞浸润,黏膜上皮水肿、坏死、崩解脱落,固有层结构疏松,局部可见纤维结缔组织增生;3株鸡源Apg接种鸡试验组能从鼻窦部、肝脏和脾脏中重新分离到接种菌,而接种鹅试验组仅从鼻窦部分离接种菌,未能从其他组织中分离到。研究表明,鸡源和鹅源Apg均可感染鸡或鹅并引起发病,但在致病程度上以本禽源菌株强于非本禽源菌株。

广东鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、耐药表型和耐药基因的检测及相关性分析

为了解广东地区鹅源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行情况、药物敏感性、耐药基因的携带情况以及耐药表型与耐药基因的相关性,本实验对2019年~2022年从广东地区采集的193份疑似感染Pm病鹅的心脏血液和肝脏组织划线接种于不同的培养基分离细菌,对分离菌纯化后采用PCR扩增分离菌的KMT1基因并测序,采用多重PCR扩增分离菌的5个荚膜基因及8个脂多糖基因,分析分离菌的荚膜分型与脂多糖(LPS)分型。结果显示分离到83株鹅源Pm,其中82株为荚膜A型,1株无法通过荚膜定型;LPS分型为L1型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌的药物敏感性;通过PCR检测分离菌7类药物的15种耐药基因,包括β-内酰胺类(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)、bla_(OXA))、氨基糖苷类(aadA1、aph(3’)Ila)、喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS)、酰胺醇类(floR)、四环素类(tetM、tetX)、大环内酯类(ermF、ereD)、磺胺类(sul1、sul3)耐药基因。采用统计学软件SPSS22中的完全随机设计两样本率的卡方检验分析分离菌的耐药表型和相应耐药基因的相关性。药敏试验结果显示,83株鹅源Pm对多种药物敏感性较高,其中对喹诺酮类的环丙沙星和氧氟沙星、氨基糖苷类的丁胺卡那和大观霉素、β-内酰胺类的头孢曲松、磺胺类的复方新诺明、大环内酯类的阿奇霉素敏感的菌株占比均在63%以上;对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素耐药的菌株占比高于50%,对氨基糖苷类的新霉素和四环素类的四环素耐药的菌株分别占49.40%(41/83)和46.99%(39/83)。耐药基因的检测结果显示,分离菌检出耐药基因qnrB、sul3、blaTEM、aadA1、aph(3’)Ila、ereD、ermF、tetM、floR,检出率分别为9.63%(8/94)、27.71%(23/83)、28.92%(24/83)、48.19%(40/83)、14.46%(12/83)、49.40%(41/83)、3.61%(3/83)、1.20%(1/83)、32.53%(27/83),未检出耐药基因qnrA、qnrS、sul1、tetX、bla_(CTX-M)、bla_(OXA)。相关性分析结果显示,aadA1基因与Pm对新霉素、链霉素、卡那霉素、大观霉素的耐药性具有极显著的相关性(P<0.001);bla_(CTX-M)基因、floR基因分别与Pm对头孢拉定、氟苯尼考的耐药性具有显著相关性(P<0.05)。上述结果表明,广东地区鹅源Pm主要为A∶L1基因型,对多种药物敏感,耐药基因携带率不高,部分药物的耐药表型与耐药基因具有相关性。本研究为广东地区鹅源Pm病的监测和防治提供参考依据,为Pm耐药机制的研究奠定基础。

鹅源副鸡禽杆菌全基因组重测序及比较基因组学分析

为了分析鹅源副鸡禽杆菌(Apg)与鸡源菌株的基因组差异,对3株鹅源Apg和4株鸡源Apg进行全基因重测序及基因组分析。全基因重测序结果显示7株菌株基因组片段大小为2.567 832~2.607 127 Mb, GC含量介于40.80%~40.93%之间。SNPs同源性分析结果显示,3株鹅源菌株和鸡源C-AP3株聚集在p4chr1株的小分支上,另外3株鸡源菌株分布在其它国内菌株分支上。基因同源性分析结果显示鹅源菌株特有基因76个,鸡源菌株特有基因37个。对鹅适应性基因的筛查共聚类出79个基因,其中编码已知蛋白的基因有22个,其余编码假定蛋白;对鸡适应性基因的筛查聚类出39个基因,其中10个编码已知蛋白,29个编码假定基因。通过比较基因组学发现与Apg宿主适应性有关的基因为118个,为进一步阐释Apg跨物种感染的分子生物学机制奠定了基础。

广东部分地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和耐药性分析

【目的】了解广东部分地区鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的流行、耐药及耐药基因携带情况。【方法】本试验于2020-2022年从广东地区采集101份疑似RA感染病死鸭、鹅的肝脏、心脏、脑等组织,对采集的组织进行细菌分离,通过革兰染色、生化试验及PCR鉴定分离株。对分离鉴定为RA的菌株进行血清型鉴定,并使用K-B纸片扩散法和PCR对分离株进行药敏试验和相应的耐药基因检测,采用统计学软件SPSS 22.0对分离株的耐药表型及耐药基因型进行统计,分析其相关性。【结果】分离菌在含5%新生牛血清的TSA平板培养后可见圆形、稍突、表面有光泽、乳脂状小菌落,革兰染色镜检为阴性短小杆菌。生化鉴定结果显示,分离株不发酵碳水化合物,氧化酶阳性,硝酸盐还原、西蒙氏枸椽酸盐、蛋白胨水、MR试验、VP试验、H_(2)S阴性,部分菌株能液化明胶和产生尿素酶。经PCR鉴定ompA基因阳性,本试验共分离得到51株RA。对分离株进行血清型鉴定,共检测到5种血清型,分别为血清1、2、4、11、18型,分析不同宿主来源的分离株血清型发现,血清18型仅在鹅上检测到。药敏试验结果显示,选择的25种药物中,RA对氟苯尼考、氧氟沙星、多西环素、大观霉素、头孢噻呋和头孢拉定6种药物敏感;对β-内酰胺类、氨基糖苷类耐药性最为严重,其中,对β-内酰胺类大部分药物耐药率在50.0%以上,对氨基糖苷类药物耐药率在80.0%以上。多重耐药统计结果显示,三重及以上耐药性菌株高达96.08%。分析不同宿主来源耐药性发现,鹅源RA分离株对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢唑啉4种药物的耐药率高于鸭源,其余药物鸭源和鹅源差异不明显。对15种耐药基因进行检测,其中blaCTX-M、aph(3′)Ⅱa、qnrB、qnrS、floR、tetM、ermF基因检出率较高,检出率分别为70.59%、68.63%、76.47%、96.08%、88.24%、82.35%和96.08%。耐药表型与耐药基因的相关性分析结果表明,耐药基因aph(3′)Ⅱa与新霉素、链霉素耐药株的产生具有显著相关性(P<0.05),耐药基因ermF与阿奇霉素耐药株的产生具有显著相关性(P<0.05),耐药基因tetX与多西环素耐药株的产生具有显著相关性(P<0.05)。【结论】本研究成功分离到51株RA,分离株对多种药物耐药,多重耐药现象严重。本试验结果可为指导广东地区制定RA感染的临床治疗用药方案提供参考。

六株鹅源新城疫病毒全基因序列分析及对雏鹅的致病性

为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6株毒株间核苷酸和氨基酸相似性最高,但与基因Ⅶ型、La Sota等常用疫苗株相似性较低。F蛋白和HN蛋白部分功能位点氨基酸残基出现不同程度的变异。致病性试验结果表明基因Ⅻb亚型Goose/GD/F424/2019毒株对雏鹅有较强的致病性,死亡率高达87.5%,并出现脾脏肿大,呈“树枝状”样充血、腺胃乳头出血、十二指肠黏膜出血、胰脏变性出血、脑组织充血及水肿等典型病理变化症状。研究表明:从广东地区分离的6株鹅源NDV均是Ⅻb亚型且对雏鹅有较强的致病性,为进一步研究广东地区鹅源NDV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。

珠三角及邻地鸭疫里默氏杆菌主要生物学特性的研究

为明确珠三角地区鸭疫里默氏杆菌(RA)的药物敏感性、血清型类型及其同源性,本研究对100株鸭源及鹅源RA进行分离与鉴定,并采用琼脂扩散试验进行血清型分类及其对12种药物的敏感性试验;选取10个代表株测定其对7日龄雏鸭的致病性及ompA基因序列,比较相互间的同源性以及其它生物特性的关系。结果表明:分离株的生化特性基本一致,代表株对雏鸭具有强的致病性;所有菌株具有一重以上的耐药性,63株细菌具有双重或多重耐药性,97%的菌株对奥格门丁敏感,其它药物敏感度依次为壮观霉素、青霉素、环丙沙星、氨苄西林、链霉素、诺氟沙星、罗红霉素、磺胺甲噁唑、利福平和卡那霉素;93%的菌株对庆大霉素耐药,表明该地区RA对大部分常用药物产生一重或多重耐药;100株菌株分属于4种血清型,其中83株属于血清1型,属于其它3个血清型的菌株分别有10株、5株和2株,以第4种血清型致病性最强;10个代表株中9株的外膜蛋白基因序列同源性达96%以上,5株为100%,1株与其它株的同源性为90.1%～90.4%,表明10株菌的外膜蛋白基因序列的同源性较高,外膜蛋白基因与血清型和菌株的致病性无直接关系。

白鸭禽流感H5亚型疫苗免疫促进剂的筛选

选用禽源干扰素、黄芪多糖、人参皂苷、禽用抗菌肽、蜂灵散和植物血细胞凝集素分别按常用剂量单一及两两组合在接种疫苗前后3d连续喂服3次,对14d首免(0.3mL/只)、21d二免(0.6mL/只)禽流感H5亚型疫苗的白鸭进行免疫促进试验。结果显示,各免疫组雏鸭H5AI HI抗体于第6周龄达到峰值,单独作用组分别为8.0log2、7.3log2、7.73log2、9.0log2、9.18log2、9.0log2,免疫对照组为7.75log2。两两组合作用组抗体在6～7周龄达到峰值的7.3log2～9.6log2,其中干扰素+蜂灵散组、干扰素+黄芪多糖组、人参皂苷+抗菌肽组抗体峰值比单用组高1log2～2log2,高于免疫对照组峰值近2个滴度(9.64∶7.75)。试验结果表明,单一促免试验,以蜂灵散、抗菌肽、血凝素三种免疫促进效果最好,高于免疫对照组1个滴度以上。组合免促,以干扰素+蜂灵散效果最好,植物血凝素、蜂灵散单一免促组与之相近。试验初步筛选出了效果较为明显的雏鸭禽流感疫苗免疫促进剂,为以后的进一步研究及应用奠定了基础。

番鸭体内H5亚型禽流感HI抗体与抗感染关系研究

对经过H5N1油苗免疫的50日龄番鸭,按HI抗体水平分组后,进行人工接种HPAIV,通过试验鸭的临床症状、病理变化和排毒情况综合判断HI抗体水平与保护力之间的关系。结果表明,HI抗体水平在5.0log2以下时,番鸭群可感染HPAIV,出现临床症状,表现不同程度的病理变化,并有排毒现象。抗体水平达到3.0log2-5.0log2的免疫番鸭群已具有一定的抵抗力,可以延缓发病时间,降低发病程度。随抗体水平的升高,发病与排毒的程度有所下降。当抗体水平达6.0log2及以上时,番鸭对人工接种HPAIV具有完全抵抗能力,不排毒。因此,番鸭对H5N1亚型HPAIV具完全抵抗力的HI抗体水平的临界保护滴度为6.0log2。

肉鹅H5亚型禽流感疫苗免疫效果的研究

选用H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗（H5N1，Rel株）对马岗鹅作首免日龄、免疫次数与免疫剂量的免疫试验。结果表明，雏鹅在7、14或21日龄作1次免疫均产生免疫应答，其中14与21日龄免疫组免疫后第5周抗体水平均达4log2以上，抗体动态变化均值与峰值均高于7日龄免疫组2～3个滴度。用0．5、l和2ml／只3个剂量对14日龄雏鹅的免疫试验中，0．5ml组抗体水平上升过程缓慢，免疫后4周抗体水平才达4log2以上，1与2ml组在免疫l周后上升速度较快，免疫后2周即达4log2以上，抗体水平相近，但2ml免疫组免疫后5～7周抗体水平均低于1ml免疫组。说明接种剂量为1或2ml H5N1油苗比接种0．5ml的免疫效果好，尤以1ml免疫剂量效果最好。雏鹅在7、14日龄或14、21日龄作2次免疫和7、14、21日龄作3次免疫，首免后抗体上升速度快，各检测点抗体水平均值相近，均在首免后3周达到4log2以上，4～5周达6log2以上，4～7周的抗体水平均高于14日龄1次免疫组，且提前2周达到4log2以上，说明2次、3次免疫组的抗体水平高于1次免疫组，而2次与3次免疫组的抗体水平无明显差异。以上结果说明，在肉鹅生产的禽流感免疫中，选择以14日龄首免0．5ml／只，21日龄2免接种1ml／只可取得较为理想的免疫效果。

鸭肝炎Ⅰ型琼脂扩散试验的研究

本试验用不同的鸭肝炎病料 ,通过氯仿去脂和反透析法进行病毒的提纯浓缩 ,研究鸭肝炎的琼脂扩散试验。结果显示用抗原检测抗体或用抗体 (血清 )检测病毒病原 ,均可达到 80 %的阳性检出率。试验中还发现 ,试验最佳的凝胶配方为 p H为 7.2 ,w(Na Cl)为 8%和琼脂糖的质量分数为 1 % ,病雏鸭肝浓缩抗原最为理想。

3种消毒剂对鸭肝炎病毒的杀灭效果试验

以 1 0日龄鸭胚为试验载体 ,检验 3种消毒剂对鸭肝炎病毒 (DHV Ⅰ )野毒株的杀灭效果。将一定剂量的DHV Ⅰ感染鸭胚尿囊液分别与四烷铵络合碘、二氯异氰脲酸钠、百毒杀(双链季铵盐类消毒剂 ) 3种消毒剂的不同浓度混合作用后 ,接种鸭胚继续孵化 ;计算鸭胚死亡比例 ,测定各种消毒剂对DHV Ⅰ的杀灭效力。结果显示 :0 .0 4%的二氯异氰脲酸钠能有效灭活DHV Ⅰ ,显著降低试验鸭胚的死亡率 ;显示了较好的消毒效果 。

广东水禽源大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类耐药基因研究

为了调查广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物耐药现状和耐药基因的流行情况,探索大肠埃希菌的氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型之间的关系,本研究采用琼脂梯度稀释法测定251株广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药性和采用PCR方法检测耐药基因。药敏试验结果显示,大肠埃希菌对链霉素耐药较严重,鸭源和鹅源的耐药率分别为81.58%和75.43%,对庆大霉素和卡那霉素较敏感,耐药率分别为25%和54.86%,对阿米卡星最为敏感,其中鸭源的菌株耐药率仅为1.32%。PCR方法检测显示,aadA1和aph(3′)-1检出率较高,为84.6%和91.9%,表明携带aadA1和aph(3′)-1耐药基因的水禽源大肠埃希菌在广东地区呈流行趋势。耐药基因型与耐药表型相关性分析结果显示,耐药基因rmtB的携带与4种药物(庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素和壮观霉素)耐药株的产生具有显著相关性,表明耐药基因rmtB对大肠埃希菌耐药株的产生起重要的作用。本试验结果可为指导广东地区水禽大肠埃希菌病的临床用药提供理论基础和研究大肠埃希菌的耐药基因提供相关的数据。

广东地区水禽源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药性及耐药基因检测

为了调查广东地区水禽源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性和耐药基因的流行情况,本试验于2012—2014年从广东地区患病水禽中成功分离鉴定243株大肠杆菌,采用琼脂二倍稀释法测定大肠杆菌分离株对4种β-内酰胺类药物的敏感性,并通过PCR方法检测耐药株的耐药基因blaCTX-M、blaTEM和blaOXA。药敏试验结果显示,广东各地区的分离株对氨苄西林和阿莫西林耐药率较高,耐药率为80.00%~100.00%;而对头孢他啶和头孢噻呋耐药率较低,耐药率为9.09%~50.00%。PCR检测结果显示,在4种药物的耐药菌株中,耐药基因blaCTX-M、blaTEM和blaOXA的检出率分别为88.46%~90.87%、67.21%~88.52%和51.28%~59.02%。结果表明,水禽大肠杆菌对β-内酰胺类药物普遍具有耐药性,其中青霉素类尤为严重。blaCTX-M、blaTEM和blaOXA基因为广东地区水禽源大肠杆菌携带的主要耐药基因,且耐药基因的普遍存在与临床日益严重的耐药现象有着很大的关系。

水禽源大肠杆菌耐药性及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因检测分析

为了解广东珠三角地区水禽源大肠杆菌（E.coli）耐药性以及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的情况，本研究通过琼脂稀释法测定251株水禽源E.coli对β-内酰胺类和喹诺酮类药物的敏感性，采用PCR方法检测β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的携带情况。药物敏感性试验结果显示，水禽源E.coli对氨苄西林和阿莫西林的耐药率均高于85 %，对头孢他啶和头孢噻呋的耐药率为24.7 %和31.5 %，对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和萘啶酸耐药率为62.9 %～89.6 %。耐药基因检测结果显示，blaCTX-M、blaTEM和blaOXA的检出率分别为89.2 %、78.4 %和49.4 %；251株水禽源大肠杆菌中均没有检测到qnrA；qnrB和qnrD检出率较低，仅为2.5 %和4 %，qnrS检出率为41.1 %；另外，有43.0 %的E.coli同时携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因。研究结果表明广东地区水禽源大肠杆菌对青霉素类和喹诺酮类药物耐药情况较严重，而且β-内酰胺类耐药基因（blaCTX-M、blaTEM和blaOXA）和喹诺酮类耐药基因（oqxB）的检出率均高于49 %，提示临床日益严重的耐药现象与耐药基因普遍存在相关性。

番鸭“花肝病”的研究现状

番鸭“花肝病”是番鸭的一种新的急性烈性传染病 ,主要引起 1～ 3周龄雏番鸭发病 ,发病率为 2 0 %～ 10 0 % ,死亡率为 10 %～ 95 %以上。病鸭的主要症状为严重下痢 ,迅速脱水、衰竭死亡 ;特征病理变化为肝、脾、胰、肾及肠等内脏器官形成大小不等、斑点状、白色至灰白色的坏死性病灶。研究者目前均认为该病的病原为病毒 ,但在病原的理化特性与生物学特性、实验宿主系统及各地疫区免疫防制效果等方面均存在较大差异。

广东地区水禽大肠杆菌血清型鉴定

禽大肠杆菌病是由大肠埃希菌的某些致病性菌株或某些致病血清型引起的一种非接触性传染病。表现为大肠杆菌性败血症、肠炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、肝周炎、眼炎和大肠杆菌性肉芽肿等多种症状。防治大肠杆菌病的主要措施是应用疫苗及抗生素。制备疫苗的最大困难是大肠杆菌血清型众多,仅国内报道就有80余种,并且不同动物及不同地区流行的主要血清型不完全一样。O抗原又称菌体抗原,是大肠杆菌重要的抗原,

一株鸭源禽Ⅰ型副黏病毒毒力测定及诱导免疫应答研究

试验旨在测定一株从番鸭中分离获得的禽Ⅰ型副黏病毒(GSFY株)的生物学特性和遗传特性,并将其制成油乳剂灭活疫苗,进行番鸭免疫保护试验。结果显示,GSFY株的平均致死时间(mean death time,MDT)为71h,脑内接种致病指数(intracerebral pathogenicity index,ICPI)为1.75,静脉接种致病指数(intravenous pathogenicity index,IVPI)为2.49;GSFY株F基因核苷酸序列同源性分析显示,其与鸡源Chicken/China/Guangxi 9/2003株同源性最高,为97.1%,且二者均处于基因Ⅶ型分支,综合以上结果确定其为禽Ⅰ型副黏病毒基因Ⅶ型强毒株。免疫保护试验结果显示,疫苗进行3次免疫后对番鸭有良好的免疫保护效果,3次免疫后第7天抗体效价平均值达到6log2,第21天抗体效价平均值达到8log2,用GSFY毒株攻击免疫番鸭,当抗体滴度>5log2时,保护率达100%。本研究结果为生产实践制订鸭预防禽Ⅰ型副黏病毒病的免疫程序提供参考。

ND不同免疫程序诱导鸡体的免疫动态比较

用鸡新城疫 (ND)Ⅳ系、Ⅰ系冻干苗 ,由NDV强毒制成的蜂胶灭活疫苗、油乳灭活苗 ,组合成不同的免疫程序对鸡群分别于 2 0 ,2 7,35日龄进行免疫 ,以探讨ND疫苗弱毒苗和灭活苗诱导鸡体的免疫动态 ,为临床上合理地安排ND的免疫程序提供理论依据。试验结果表明 :弱毒苗加油乳剂苗诱导免疫应答效果较为优越 。

鸽衣原体病的血清学调查

衣原体病为一种人畜共患病,在畜禽中广泛存在[1],家禽中以鸽最为易感,引起鸽群的长期带菌或发病,导致鸽只生长不良,消瘦,眼炎,抵抗力与生产性能下降等[2],甚至会传染给与病鸽接触的饲养员、兽医工作者及销售人员等,危害人类的健康.部分鸽场的鸽群类似衣原体的病症时有出现,为了了解广东的养鸽场的鸽群衣原体的感染情况,我们对部分鸽场的鸽群进行了本病的血清学调查,以积累一些相关资料.