结核分枝杆菌潜伏感染抗原Rv2628c-Rv1737c融合蛋白的原核表达与免疫原性分析

目的原核系统表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染抗原Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,并检测其能否被结核感染者外周血PBMC细胞识别,通过小鼠模型判定其免疫原性。方法按照原核系统密码子特点,全基因合成Rv2628c-Rv1737c表达核酸序列,构建表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c,原核细胞内诱导表达、亲和层析纯化Rv2628c-Rv1737c蛋白;分离不同患者样本PBMC细胞,抗原刺激后,通过q-PCR分析IFN-γmRNA表达差异,判定融合蛋白能否被TB感染者识别;联合融合佐剂DMT免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫应答水平。结果原核克隆的重组表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c测序正确,融合蛋白以包涵体表达形式存在,经复性、亲和纯化后,分子量为57 kDa,纯度90%以上。以Rv2628c-Rv1737c融合蛋白刺激TB感染者,尤其TB潜伏感染(LTBI)者,外周血PBMC细胞IFN-γmRNA水平高于健康对照者(P<0.05);同时,BCG+Rv2628c-Rv1737c/DMT诱导小鼠能产生高水平的IgG抗体。结论原核重组可获得高纯度Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,其作为潜伏感染抗原,可被TB感染者PBMC细胞识别,具有较强的免疫原性,是具有潜力的TB候选亚单位疫苗靶抗原,可用于TB感染尤其是潜伏感染的预防及实验室诊断。

基于Style 3D虚拟仿真技术的袖子样板设计

袖子作为服装结构中的重要部分,绘制样板不仅要考虑人体尺寸,还要考虑面料特性和服装整体造型的美观性。为了设计出更符合要求的袖子样板,运用二维CAD调整袖山吃势和袖山高,绘制不同的袖子造型结构图,将绘制的二维样板导入Style 3D系统进行模特虚拟试穿,直观地体现不同袖子结构穿着效果。Style 3D虚拟仿真技术为服装样板设计提供了很好的验证方法,对比样衣制作节省了90%的时间,同时节省了人力和原材料成本。此外,服装3D虚拟设计方法还可以运用至高校技术研发和教学,为服装行业实现碳达峰、碳中和提供思路。

基于AI软件辅助的服装色彩设计的研究

在时尚产业迅速发展的背景下,如何在海量的数据中捕捉色彩趋势成为了设计师的迫切需求。AI软件的引入,为设计师提供了预测服装色彩发展趋势的有力工具,使设计师能够准确地捕捉市场的脉搏,为品牌带来新的商业契机。同时,AI软件的介入,也为设计师的创意生成带来了更大的可能。基于此,本文将分析基于AI(Adobe Illustrator)软件辅助的服装色彩设计思路,以期引领时尚创意的发展。

基于服装CAD技术的可视化针织编织工艺

计算机辅助设计(CAD)是在电脑应用基础上发展起来的一项高新技术,已有40多年的发展历史。国内外的服装CAD软件有很多,且在应用操作上区别较大,但基本原理相同。服装CAD将人和计算机有机结合起来,最大限度地提高了服装企业的快速反应能力,实现了服装的款式设计、结构设计、推档排料、工艺管理等计算机化,在服装工业生产及其现代化进程中具有不可替代的作用。文章分析了基于服装CAD技术的可视化针织编织工艺,以期推动编织工艺的不断改进。

DsbC介导HCV优势抗原表位原核可溶性表达与间接ELISA分析

目的DsbC蛋白与丙型肝炎病毒(HCV)优势抗原表位原核融合表达并纯化,获得一种特异优良的HCV血清抗体诊断抗原。方法通过生物信息学软件,筛选我国HCV主要流行株优势抗原片段并进行串联融合形成组合肽命名为P367,将P367与DsbC蛋白进行融合后在原核系统内可溶性表达并纯化获得重组抗原DsbC-P367,建立HCV-IgG血清学检测方法,通过对HCV阴阳性血清的检测,评价DsbC-P367与P367在血清学诊断差异,获得一种新型HCV-IgG血清学诊断抗原制作方法。结果通过信息学软件筛选获得的优势抗原表位来源于不同基因型,全长367个氨基酸。通过原核表达系统发现,DsbC-P367以可溶性表达形式存在,亲和纯化后其相对分子质量为63×10^(3),纯度为92%,Western blot实验初步证实重组DsbC-P367与P367蛋白均具有抗原性;对100份明确HCV阴阳性血清进行检测,DsbC-P367与P367灵敏度分别为96%、90%,特异度均为100%,与“金标准”比较,McNemer检验显示均P=1.00,Kappa分别为0.95、0.87,提示DsbC-P367相对于P367具有更优的灵敏度。结论重组获得的DsbC-P367融合肽在HCV血清学抗体检测中具有良好的灵敏度和特异度,可开发为HCV-IgG体外诊断试剂盒用于HCV感染的实验室诊断。

三维数字化服装设计及人才培养

剖析服装设计专业二维数字化课程的教学现状,结合国内服装三维数字化的需求,案例分析服装三维数字化设计在课程体系、软硬件平台建设、师资培训、教材编写等方面改进措施和实施效果。

西藏结核病流行状况

西藏自治区由于特殊的气候和地理环境,结核病疫情具有独特的特征。在相关的期刊和学术论文中屡见关于西藏地区结核病防治和结核分枝杆菌的耐药性分析的报道和研究[1～4],但是对于西藏地区结核病的流行规律及防治策略的整体研究不多,而且目前的研究都是分散的、零星的,缺乏全面、宏观的数据。

几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的 了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法 常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm ) ,取二者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5UPPD及 0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部两侧 ,每批 6只 ,共 3批。注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm) ,取二者的平均值。结果 常规皮肤试验 0 .8μgM、A、M +E及E +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 0 .8μgE抗原及M +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。时间效应 :重组抗原及其混合物诱发豚鼠DTH的平均直径 2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后 ,结果与常规皮肤试验结果一致。结论 从试验结果?

rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究

应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA ,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌 1 6S - 2 3SrDNA间隔区序列进行扩增 ,同时加入生物素标记 ,制成 2 50bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究 ,并对 90份结核病人 ,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为 1 0 0pg。rDNA探针与受试 2 4种分枝杆菌和 1 1种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交 ,特异性较高。而rDNA探针对 90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为 80 .2 % ,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64% )。rDNA探针与 30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。

16S-23S rDNA间隔序列PCR与RFLP对分支杆菌临床分离株的鉴定价值

为阐明分支杆菌同种临床分离株不同菌株之间以及与标准株之间１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔序列是否有差异，以及结核分支杆菌耐药性和１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔序列有无关系。本文对５８株结核分支杆菌临床分离株（２０株敏感株，３８株耐药株）和淡黄、副偶然、母牛等分支杆菌的临床分离株的１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔序列进行了扩增，并对扩增产物进行了聚丙烯酰胺凝胶电和琼脂糖凝胶电泳及限制性内切酶ＨａｅⅢ、ＭａｐⅠ消化反应。同种分支杆菌各菌株之间扩增产物及限制性内切酶消化产物均无差异。不同种各株之间均不相同。结果说明同种分支杆菌不同临床分离株１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔序列没有差异，结核分支杆菌１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔序列与菌株耐药性没有关系。１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔序列ＰＣＲ扩增与ＲＦＬＰ分析对分支杆菌临床分离株的鉴定有价值。

16S～23SrDNA间隔区序列在分枝杆菌分类鉴定中的应用研究

采用聚合酶链反应 (PCR)技术对分枝杆菌 1 6S～ 2 3SrDNA间隔区序列进行扩增 ,其产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,并通过计算机聚类分析 ,在基因水平上评价其对分枝杆菌分类与鉴定的意义。退火温度 45℃时 ,PCR扩增的敏感性为 50 0fg/μL ,而 50℃时的敏感性为5pg/μL。已通过对 2 2种分枝杆菌和 9种非分枝杆菌的特异性实验 ,结果表明 :扩增条带多集中在 30 0～ 60 0bp之间 ,多数受试快速生长分枝杆菌和非分枝杆菌扩增条带多且分子量较大 ,缓慢生长分枝杆菌扩增条带相对较少 ,分子量较小。PAGE和计算机聚类分析结果显示 ,分枝杆菌种间条带特异性的相似性系数均小于 70 % ,且绝大多数菌种间小于 50 %。可将被试菌株鉴定到种的水平。PAGE和聚类分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法。

16s～23s rDNA间隔区序列RFLP分析在分枝杆菌分类鉴定中的应用

目的：通过对分枝杆菌１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡＰＣＲ扩增和限制性酶切分析，评价其在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法：对２１种分枝杆菌和９种亲缘关系较远的非分枝杆菌和４种亲缘关系较近的非分枝杆菌的１６ｓ－２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增并对扩增产物进行限制性内切酶ＨａｅⅢ．ＭｓｐＩ消化反应，分析不同菌种扩增片段及其限制性片段长度多态性的差异。结果：ＰＣＲ扩增结果显示：分枝杆菌一般扩增出１～２带，非分支杆菌一般有１～３条带。８０％的缓慢生长分枝杆菌扩增片段集中在３４０～４００ｂｐ，快速生长分枝杆菌扩增片段集中在４７０～５７５ｂｐ。单从扩增产物的琼脂糖凝胶电泳只能鉴定４２％的受试菌种。酶切结果显示：３种分枝杆菌酶切图谱没有区别，大部分分枝杆菌的酶切图谱彼此不同，而大部分非分枝杆菌不能被ＨａｅⅢ．ＭＳＰⅠ消化。结论：说明１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡＰＣＲ扩增和限制性片段长度多态性分析是分枝杆菌菌种分类鉴定的一种快速、有效的方法。

Ag85a-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定

目的构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85a的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得约800bp的ag85a基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明ag85a基因正确插入到pYUB295质粒中。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-ag85a重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:ag85a-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85a蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了ag85a-卡介苗重组疫苗。

16S-23SrDNA间隔区序列PCR扩增及探针杂交用于偶然分支杆菌暴发感染的研究

目的 从基因水平上确认福建省南平市注射后偶然分支杆菌暴发感染的致病菌 ,并建立PCR结合DNA探针杂交快速鉴定偶然分支杆菌的方案。方法 根据偶然分支杆菌 16S 2 3SrDNA间隔区序列 ,设计合成一段寡核苷酸探针 ,采用PCR扩增、RFLP和DNA斑点杂交技术 ,对 2 9株偶然分支杆菌临床分离株进行鉴定。结果 2 9株偶然分支杆菌临床分离株均被PCR扩增出一条约 4 70bp的DNA条带 ,DNA探针杂交也出现特异的杂交斑点。结论 16S 2 3SrDNA间隔区序列PCR扩增及DNA探针杂交在基因水平上确认引起此次注射后暴发感染的致病菌为偶然分支杆菌 ,该方法具有灵敏、特异的特点。

16S-23SrDNA间隔区序列寡核苷酸探针对龟分枝杆菌暴发感染的鉴定

目的 :该研究旨在采用分子生物学技术 ,从基因水平上对深圳市某医院及河北辛集地区发生术后及注射后龟分枝杆菌暴发感染的临床分离株进行鉴定 ,并建立一套快速的的鉴定龟分枝杆菌脓肿亚种的探针杂交方法。方法 :根据龟分枝杆菌脓肿亚种标准株 16S - 2 3SrDNA间隔区序列测序结果 ,设计一对寡核苷酸探针 ,对其敏感性、特异性及其对临床标本和临床分离株的检测进行了研究。结果 :探针检测PCR扩增产物敏感性为 1ng ,只与龟分枝杆菌脓肿亚种杂交 ,与 5 6株龟分枝杆菌脓肿亚种临床分离株全部杂交 ;检测 5 7株临床标本阳性率为 6 6 .6 %。结论 :探针检测从基因水平上再次确认引起这两次暴发感染的致病菌为龟分枝杆菌脓肿亚种 ,结果快速可靠。

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的 :结核分枝杆菌重组Ag85A抗原诱发豚鼠迟发型超敏 (DTH)反应。Ag85A剂量、观察时间对DTH的影响。方法 :常规皮肤实验法 :灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5IUPPD标准品为阳性对照 ,0 .1、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8及 1.0 μg重组抗原分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8及 72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5IUPPD及 0 .4、0 .6、0 .8、1.0 μgAg85A抗原 ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部一侧 ,每批 6只 ,共 3批。于注射后 2 4、4 8、72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。结果 :常规皮肤试验 0 .1、0 .2 μg重组Ag85A抗原诱发DTH的平均直径与PPD相比有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而 0 .4、0 .6、0 .8、1.0重组Ag85A抗原诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比 ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后结果与常规皮肤试验结果一致。结论

四种卡介苗重组疫苗对结核病的预防作用

目的:评价esat6-卡介苗重组疫苗、mpt64-卡介苗重组疫苗、ag85a-卡介苗重组疫苗、ag85b-卡介苗重组疫苗对结核病预防效果。方法:观察四种卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、T细胞及B细胞免疫功能等指标。结果:卡介苗重组疫苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果最显著,与卡介苗组比差异有统计学意义。实验结束时,esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器大体病变较其他各组轻。脏器结核分枝杆菌培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器内结核分枝杆菌较少,其他各组间无显著区别。抗体检测结果表明,ag85a-卡介苗重组疫苗免疫小鼠抗体水平显著升高,其他各组之间无差别。淋巴细胞增殖实验结果,各组之间差异无统计学意义。结论:初步实验结果表明esat6-卡介苗重组疫苗对结核菌的预防作用强于卡介苗。