周围神经损伤再生后肌肉nAChRε亚单位基因表达的变化

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性。同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。结果:用该方法检测nAChRε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6 个数量级,最低检测下限为1×102 拷贝,最高检测上限为1×107 拷贝。大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3 周降到最低后又逐渐增高,但到术后30 周仍处于低水平(P<0.01)。结论:采用Taq Man实时荧光定量RT PCR检测nAChRε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点。神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低。

烟碱型乙酰胆碱受体亚型的表达调控及其生理意义

位于哺乳动物神经肌肉接头突触后膜上的烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)直接参与神经肌肉之间兴奋传递,对肌肉完成正常收缩功能具有十分重要的意义。nAChR是一种杂合五聚体蛋白,按亚单位组成的不同分为成熟型受体εAChR(α2βεδ)和胚胎型受体γAChR (α2βγδ)。本文主要对两者在表达时期、分布范围、调控机制和生理意义方面的差异进行综述。

动物外科教学中学生思维能力培养的探讨

在动物外科教学中,有意识地从如何认识手术、如何分析和解决手术中碰到问题等方面对学生进行培养,取得一定的效果。

难治性感染缺损创面的整形外科修复

目的探讨各种难治性感染缺损创面的治疗方法。方法21例各种难治性感染缺损创面的患者,经全身支持治疗、积极换药后分别行两次清创手术,通过异体皮移植暂时覆盖创面,后再行自体皮肤移植或皮瓣转移最终修复创面。结果移植皮肤和皮瓣均完全愈合,创面得到有效修复,平均住院时间42d。结论通过异体皮移植暂时覆盖创面结合两次彻底清创手术,再综合应用整形外科的各项技术进行难治性感染缺损创面修复的方法,可行有效,值得推广。

保留乳头乳晕感觉功能的改良双环法巨乳缩小术

目的探讨改良双环法巨乳缩小整形手术的方法,以提高疗效,减少手术并发症。方法以乳头为中心做近似双同心圆切口,滚轴取皮刀去除两同心圆之间的表皮,切除外环以外,包括外上象限、内上象限、内下象限肥大的腺体组织.保留外下象限和中央的乳腺组织,以便保持第4肋间神经对乳头乳晕的支配和充足的血供。将去表皮的真皮帽边缘与乳腺基部的筋膜紧密缝合固定在胸壁上,重塑乳房外形。以可吸收线荷包式缝合外环皮下组织,收紧荷包缝线将外环切口缩小到与内环相近,直接缝合切口。结果本组患者31例,术后乳房形态自然挺拔、质感柔软;乳头乳晕对称,感觉正常;瘢痕隐蔽并且有效地保留了乳房的泌乳功能。结论本法术后乳房形态良好,功能正常,是一种较理想的巨乳缩小整形方法。

前臂伸肌内神经血管分布的解剖学研究及其临床意义

目的:观察前臂伸肌内神经血管解剖分布,探讨前臂肌是否可被分割为若干个功能单位,以提供新的功能性骨骼肌游离移植供区。方法:解剖10具10%甲醛固定的成人尸体共20侧前臂伸肌,观察其肌外神经血管的分布形式。5具新鲜成人尸体标本共10侧前臂伸肌,用Sihler’s染色法观察肌内神经的分布。4具新鲜成人尸体标本共8侧前臂伸肌,经30%硫酸钡、乳胶混悬液血管灌注并行X线钼靶摄片,而后对照观察各肌的神经、血管在肌内分布关系。结果:按前臂肌肌内神经的分布及其形状分为3类:I类肌肉为扁平形肌肉,主要肌内神经干垂直于肌纤维的走行方向。Ⅱ类肌肉为纺锤形肌肉,Ⅱa类肌肉,单羽肌为主,神经分支多为单干支配,神经多在其肌腹的上1/3入肌,神经入肌后多平行肌纤维纵向走行至肌远端。Ⅱb类肌肉,可分为两个部分,每个部分都有独立的神经支配,部分肌肉在其神经入肌门处还有一个返支配肌腹的上1/3。Ⅲ类肌肉,多个止点,神经在肌内呈横向穿越或纵向平行于肌纤维走行,在其肌肉起始部,有神经返支支配肌腹的上1/3。前臂伸肌血供是多源性的,以节段血管蒂型为主。结论:前臂伸肌内中Ⅱb类肌肉的第1,2种类型和Ⅲ类肌肉可将其分为不同的功能单位,供节段性游离肌肉移植。

家兔再造阴茎再生神经纤维轴浆流的恢复

目的:观察家兔再造阴茎植入神经轴浆流恢复情况,以探讨感觉神经末梢再生以及阴茎再造后感觉功能恢复的可能性.方法:将游离隐神经移植体与阴茎背神经吻接后植入腹壁浅血管筋膜蒂岛状皮瓣内,以建立阴茎再造重建感觉功能的动物模型.术后不同时间切取S2～S4节段双侧背根神经节(dorsal root ganglia,DRG),应用辣根过氧化酶法(horseradish peroxidase method,HRP)对实验组(植入神经)和对照组(未植神经)进行逆行神经示踪,观察DRG内辣根过氧化酶法(HRP)阳性标记细胞出现的时间和数量.结果:术后1个月实验组动物吻接侧DRG内开始出现HRP阳性细胞,且随着时间延长,阳性细胞数逐渐增多,植入隐神经束也可见HRP阳性;而对照组术后始终未见DRG内HRP阳性标记细胞出现.术后1个月、3个月和6个月3个时间点的HRP阳性神经元计数结果:S2为35.0±9.3、97.0±12.5、106.6±17.9,S3为22.1±7.7、71.3±16.7、103.8±29.4,S4为17.8±6.5、35.0±7.1、81.1±6.2.结论:家兔阴茎再造术后,植入神经轴浆流恢复,提示其感觉神经末梢再生与感觉功能重建是可能的.

外科手术学无菌术教学中应强化几个观念

无菌术是临床医学的一个基本操作规范,外科的所有手术操作都是在无菌条件下进行,在操作过程中如不严格无菌操作,病原微生物就可能进入伤口,引起感染。培养学员掌握外科无菌技术,是外科手术学教学的核心内容和最重要的目标[1]。学习无菌技术除了学习常规的操作技术外。

再造阴茎感觉功能重建动物模型的建立

目的:建立再造阴茎感觉功能重建的动物模型,为临床上改善阴茎再造术后感觉功能探索新术式。方法:以成年新西兰雄兔为实验对象,采用腹壁浅血管筋膜蒂岛状皮瓣行阴茎再造术,切取一段隐神经游离移植,与阴茎背神经端端吻合植入皮瓣后阴茎成形。术后不同时间对再造阴茎进行组织形态学观察和感觉神经肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)免疫组化标记。结果:再造阴茎术后1个月时少量CGRP阳性神经纤维仅见于真皮深层,术后3 个月数量明显增多,并开始出现在真皮浅层以及真皮乳头内,术后6个月真皮与表皮交界层以及皮肤附属器周围也可见CGRP阳性纤维。结论:隐神经游离移植与阴茎背神经吻接植入再造阴茎皮瓣内可以获得良好的神经再生,这一动物模型可为临床应用该术式重建再造阴茎感觉功能提供实验依据。

家兔阴茎皮肤和阴茎背神经躯体感觉神经元的示踪定位

目的：明确家兔阴茎感觉神经躯体纤维来源及其节段性分布规律。方法：健康成年雄性新西兰家兔8只，随机均分为A、B两组，采用辣根过氧化物酶（HRP）逆行神经示踪技术，A组用微量注射器将50％HRP多点注射于阴茎皮下，B组注射于右侧阴茎背神经近侧断端内，留针时间30min，动物存活5d后，4％多聚甲醛心脏灌注，取出腰骶段脊髓及相应背根神经节（DRG），对躯体传入和传出纤维来源的节段分布进行观察。结果：A组s2一s。节段脊神经节内出现大量HRP阳性标记感觉神经元，以S：和S。为多，呈明显节段性分布，各节段阳性神经元计数分别为：S：（215．0±10．2）、S，（242．2．4-8．3）、S。（109．7．4-8．4），组间差异具有统计学意义（P〈0．01）。B组同侧S2-S4节段脊髓灰质前角腹外侧部出现部分阳性标记细胞，同侧S2-S4 DRG内也出现了大量的HRP阳性细胞。结论：家兔阴茎皮肤感觉神经躯体传入和传出纤维投射来源与阴茎背神经一致，均源自骶髓前角及相应的脊神经节，并呈现明显的节段性分布。

大面积皮肤软组织缺损伴严重感染创面的修复

目的探讨大面积皮肤软组织缺损感染创面的修复方法。方法对15例大面积皮肤软组织缺损伴创面严重感染的患者,经积极换药后均行两次清创手术,首先采用异体皮片移植暂时覆盖创面,再行自体皮肤移植或皮瓣转移修复创面。结果术后经6个月至4年的随访,自体的皮肤和皮瓣移植后均完全成活,创面修复良好。患者平均住院时间38d。结论两次彻底清创和异体皮片移植暂时覆盖创面是修复大面积皮肤软组织缺损严重感染创面的有效方法,值得推广应用。

小鼠水通道蛋白1基因shRNA慢病毒载体构建与鉴定

目的应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因重组慢病毒载体并鉴定。方法对小鼠AQP1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并经测序验证。测序正确后与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,收集病毒上清经高速离心浓缩后感染小鼠小胶质细胞BV-2,Western blot法分析筛选有效shRNA序列。结果成功退火合成3对发夹shRNA序列并将其克隆到pLKO.1-TRC载体中,构建重组质粒pLKO-AQP1-SH1、2、3,经菌液PCR鉴定和测序验证载体构建成功。Real-time PCR检测发现重组质粒pLKO-AQP1-SH2感染BV-2细胞后AQP1 mRNA表达最低,Western blot结果进一步验证结果的准确性。结论成功构建出AQP1基因shRNA慢病毒载体。

足部恶性黑色素瘤21例临床分析

目的探讨足部恶性黑色素瘤的临床表现、诊断与治疗。方法回顾性分析我科1994年至2006年收治的21例足部恶性黑色素瘤患者。其中男性19例,女性2例,平均年龄63.8岁(42～86岁)。结果所有患者均经病理证实为足部恶性黑色素瘤。21例患者确诊后均接受了外科手术治疗,术后5例接受化疗,2例接受生物学治疗。19例随访3～41个月。2例患者分别于术后6个月及31个月死亡,其余患者目前均存活。结论目前恶性黑色素瘤仍是不能根治的疾病。足底为负重功能区,应根据手术切除后缺损的部位和范围,选择合适的皮瓣修复对足部功能恢复起着十分重要的作用。

膨体聚四氟乙烯假体联合单侧耳软骨在鼻部延长和抬高中的临床应用

目的:探究膨体聚四氟乙烯假体(e-PTFE)联合单侧自体耳软骨在中国人隆鼻术(鼻延长、鼻背抬高及鼻尖成形)中的临床效果。方法:1生物力学实验:利用材料实验机对传统国产硅胶假体、目前常用国产硅胶假体及e-PTFE进行弹性模量及其纵向抗压强度测量,了解各假体纵向抗压能力;2手术:2012年4月-2015年10月对在我科就诊的40例鼻梁低平,鼻长正常或轻度偏短的女性患者进行膨体聚四氟乙烯假体联合单侧耳软骨隆鼻术,观察术后效果,如鼻长、鼻尖抬高情况。结果:随访半年至3年,术后鼻延长4~6mm(平均4.7mm),鼻尖突度增加6~8mm(平均6.9mm);术后感染、假体偏斜等并发症发生率极低,未见假体脱出、鼻背皮肤发红、破溃等。结论:对于鼻长正常或轻度短小,伴鼻梁低平的中国人来说,e-PTFE假体既可用以垫高鼻背,又能使鼻延长隆鼻。

乳鼠肌源性干细胞向许旺样细胞的诱导分化

背景:有证据显示,肌源性干细胞能够促进肌纤维的再生,增强再生肌组织的功能,并具有分化为神经外膜组织细胞和具有许旺细胞表型细胞的潜能。目的:分析许旺细胞条件培液诱导小鼠乳鼠源肌源性干细胞向许旺细胞的分化,探讨其作为神经组织工程的种子细胞的可行性。方法:取C57BL/6乳鼠四肢骨骼肌,采用改良的Preplate技术纯化培养肌源性干细胞,利用抗体Desmin和Sca-1对纯化后的细胞进行免疫细胞化学鉴定。采用许旺细胞条件培液诱导其向许旺细胞分化,并行许旺细胞特异性抗体S100β、P75NTR免疫细胞化学鉴定。结果与结论:从小鼠骨骼肌中分离得到肌源性干细胞,能在体外稳定增殖传代,Desmin和Sca-1免疫细胞化学染色阳性。肌源性干细胞经体外诱导分化后部分细胞S100β、P75NTR染色阳性。说明应用改良的Preplate方法,可从新生小鼠骨骼肌中分离得到肌源性干细胞;采用许旺细胞条件培液能将其诱导分化为许旺样细胞,有可能成为神经组织工程神经较理想的许旺细胞替代物。

再造阴茎感觉重建过程中背根节胶质细胞源性神经营养因子基因表达的变化及意义

目的:研究兔再造阴茎感觉重建过程中背根节感觉神经元内胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的表达变化及其意义。方法:建立成年新西兰雄兔再造阴茎感觉重建的动物模型,分别于术后1,2周,1,3个月灌注取材S2节段背根节,用RT-PCR法检测不同时间背根节感觉神经元内GDNFmRNA的表达情况。结果:GDNFmRNA在正常背根节感觉神经元内存在少量表达;感觉重建早期背根节内GDNFmRNA的表达显著增强,1个月时轻度下调,至术后3个月恢复正常水平。结论:GDNF是再造阴茎感觉重建过程中参与“胞体-轴突-靶器官”途径恢复重建的重要保护性因素。

CXCR4靶向shRNA质粒载体的制备和体外鉴定

目的:设计并构建CXCR4靶向shRNA质粒载体,转染黑色素瘤细胞株,验证shRNA对黑色素瘤CXCR4基因的沉默效应。方法:设计合成CXCR4特异性shRNA,将其插入pSilencer质粒载体,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染黑色素瘤MV3细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久性克隆。应用RT-PCR技术检测shRNA对黑色素瘤细胞内CXCR4 mRNA表达,应用Westernblot法检测CXCR4蛋白变化。结果:成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体及稳定抑制CXCR4表达的永久性细胞克隆。阳性克隆测序结果表明合成的寡核苷酸链序列插入正确。稳定转染CXCR4-shRNA的高转移性黑色素瘤细胞MV3的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调。结论:脂质体介导shRNA体内表达法制备的CXCR4-shRNA在黑色素瘤细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,有望为转移性黑色素瘤的靶向基因治疗提供一条新途径。

机械振动吸脂的自体脂肪移植隆胸术

自体脂肪移植因为具无异体组织排斥反应，且能躲过仪器检查的优点，所以一直有患者要求用此法行隆胸术。如何获取足量和高活力的脂肪颗粒，是决定手术效果的关键因素。我科自2004年以来采用Lipomatic脂肪抽吸机，吸取较大量的大小均匀的纯净脂肪颗粒，进行自体脂肪移植隆胸术7例（14侧），经3～26个月随访，

增生性瘢痕增生期与成熟期相关基因谱表达的差异

目的:从基因水平探索增生性瘢痕退行性变的机制,筛选调控增生性瘢痕从过度增殖向成熟稳定期转化的退行性变相关基因。方法:实验于2003-05/2005-03在解放军第二军医大学整形外科实验室和上海联合基因集团博星基因芯片公司进行。收集8例烧伤后增生性瘢痕患者的病理标本,每张芯片以同一患者同一部位退变成熟期的瘢痕组织为实验组,增生活跃期的瘢痕组织为对照组。按一步法抽提出瘢痕组织总RNA,纯化mRNA,分别制成Cy3和Cy5荧光标记cDNA探针,与含有14112个cDNA的高密度基因微矩阵芯片杂交,通过计算机扫描生物信息学分析筛选差异表达基因。结果:在14112个基因中,8例患者退变后稳定期的增生性瘢痕组织与增殖活跃的增生性瘢痕组织之间比较存在差异表达基因共有840条,其中上调基因438条,下调基因362条,新基因102条;包括细胞凋亡基因、原癌基因和抑癌基因、细胞骨架和运动基因、细胞受体、免疫相关、细胞信号和传递蛋白、代谢蛋白、发育相关等多种基因。结论:增生性瘢痕的退行性变与多种基因的差异表达有关。