产毒性大肠杆菌CFA/Ⅰ基因表达与DNA超螺旋状态的关系

将CFA／I结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A,并将其转入大肠杆菌topA野生株E.coli HB101和topA缺陷株E.coli DM800中.Western blot测定的结果表明,在CFA／I的正调控基因cfaD基因缺失时,两株重组菌株都能够表达CFA／I抗原.分别抽提两个重组菌株对数前期和对数中期的质粒pJGX15A DNA,并对其进行氯喹琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示E.coli DM800细胞中质粒pJGX15A的负超螺旋水平比野生型细胞E.coliHB101中的较低.同时,菌落免疫酶斑分析的结果显示DM800受体菌中CFA／I的表达水平比HB101受体菌中的表达水平高.实验结果表明,CFA／I结构基因的表达与DNA负超螺旋水平有明显的负相关性,与负超螺旋促进基因表达的看法不同.

大肠杆菌topA-菌株中质粒pBR322的超凝集结构

超凝集DNA是质粒DNA的一种特殊拓扑结构形式,最初在大肠杆菌SD108(topA+gyrB225)细胞中被发现.现在大肠杆菌DM800(topA-gyrB225)细胞中也发现了这种结构,这说明超凝集DNA的形成与细胞内旋转酶活性降低有直接关系,而与拓扑异构酶Ⅰ的存在与否无关.体外实验的结果显示,具有很强的正超螺旋松弛活性的拓扑异构酶Ⅳ可以将超凝集DNA完全松弛,这也证明质粒DNA的超凝集结构与超螺旋结构在细胞内是可以互变的.使用原子力显微镜对分离到的pBR322DNA超凝集结构进行分析,并与普通超螺旋进行比较,结果表明,超凝集DNA分子的结构发生了巨大的变化,其分子长度比正常超螺旋分子缩短了约30%,宽度和高度则增加了60%,结构更接近于A型DNA.另外,原子力显微镜研究结果表明,氯喹的嵌入并非改变了超凝集DNA的超螺旋状态,而是使其打结并最终压缩成一团.

大学生认知风格与职业兴趣倾向之间的相关研究

本文采用随机取样法,随机抽取大学生样本67名,调查他们认知风格与职业兴趣倾向之间的关系情况,结果显示:(1)从整体上看,被试的认知风格在职业兴趣的不同维度上存在着显著性相关。场独立认知风格在企业型职业兴趣维度上表现出显著的正相关;场依存认知风格在艺术性维度、社会性维度上表现出显著的正相关。(2)从性别差异上看,场依存性认知风格的男性与艺术型职业倾向有显著正相关,场独立性认知风格的男性与企业型职业倾向有显著正相关;场依存型认知风格的女性与社会型职业倾向有极其显著的正相关。

动态测验对“数学学习困难”儿童的进一步甄别

本研究意在考查动态测验对数学学习困难儿童作进一步程度区分的有效性。以传统且常用的数学学习困难鉴别方式和标准选取30名四年级数学学习困难儿童为实验组,30名同年级智力匹配儿童为对照组,以Swanson认知加工测验(S-CPT)的4个子测验为测量工具对被试进行动态测验。结果发现:(1)在传统数学学习困难鉴别方式的基础上,动态测验的"潜在认知能力"指标可以对儿童数学成绩增加19%的预测力;(2)以"潜在认知能力"指标为依据能够将数学学习困难儿童进一步区分为"发展落后"和"发展缺陷"两个水平;(3)"发展落后"儿童一年内数学成绩发生了增长性变化,与正常儿童水平相当,而"发展缺陷"儿童的数学成绩没有变化。研究证实关注潜能指标的动态测验范式在快速、准确甄别数学学习困难儿童上具有独特效用。

智能翻身防褥疮气垫的设计

阐述了由AT89S52单片机、气囊、压力传感器、气泵和电磁阀门等构成智能翻身防褥疮气垫的设计过程。介绍了定时翻身、遥控翻身、声控翻身、按摩和背部托起功能的实现方法,以及测控系统硬件控制电路和软件程序的设计。该气垫在某医院使用,达到了预设的智能翻身效果。

DNA双链区的切割导致碱变性超螺旋质粒pBR322的分子内结节（英文）

为进一步研究碱变性超螺旋D NA(Ⅳ型D NA;DNAⅣ)的结构,对碱变性质粒p BR322进行了酶学分析并利用原子力显微镜(AFM)对新形成的D NA结构进行了观察和比较.在所有已检测的限制酶中只有PstⅠ可以切割质粒p BR322的Ⅳ型DNA分子,说明在这种变性的DNA分子中仍存在少数完整的限制酶识别位点.与碱变性DNA分子的闭合环状结构相反,AFM成像的结果显示PstⅠ处理后的DNAⅣ分子均为开放结构,同时这种分子包含明显的DNA结节.与DNAⅣ分子相比,这种D NA分子的表观长度缩短了大约11%.有意思的是,大肠杆菌拓扑异构酶Ⅳ(一种Ⅱ型拓扑异构酶)也可以在p BR322 DNAⅣ分子中引入分子内结节,而这种结节D NA分子仍然保持闭合状态.AFM的结果表明上述两种结节的DNA分子在表观长度及结节结构的尺寸上均比较相似.这些发现证实,在碱变性的超螺旋DNA分子中仍然保留着一些长度较短的、含有特异性碱基配对的D NA双链区,而在这些区域内的D NA双链断裂可以导致D NA结节.

质粒pUC18DNA的螺线管型超螺旋结构

理论上,游离的超螺旋DNA可以采取两种结构形式:互缠式超螺旋和螺线管型超螺旋。前者早已被透射电子显微镜和原子力显微术的研究所证实,而后者却仍然缺乏足够的证据。使用温和的清亮裂解液法,从DNA拓扑酶野生型大肠杆菌HB101细胞抽提质粒pUC18 DNA。经CsCl-EB平衡密度梯度超离心分离获得超螺旋pUC18 DNA和松弛型pUC18 DNA(DNA Ⅱ)。纯化DNA分别用疏水性溶剂系统和亲水性溶剂系统的细胞色素单分子层展开技术制备电子显微镜标本。观察结果显示:在疏水性的甲酰胺-水展开系统中,DNA采取通常的互缠式结构;在含有1.5mmol/L醋酸铵的水介质中制备的超螺旋DNA标本,DNA采取线圈型结构,测得pUC18 DNA(单体)分子这种结构的外直径约为43.8nm,内直径约为2nm。在相同亲水介质中松弛型pUC18DNA采取典型的螺线管型结构,其单体平均外直径约为53.1nm,内直径约为17.2nm。表明:在疏水介质中超螺旋DNA趋向于采取互缠式结构,而在亲本介质中DNA则采取螺线管型结构。DNA链之间可能存在非共价相互作用以维持这种结构。螺线管型结构可能是水溶液中的超螺旋DNA分子普遍的存在形式。

在拓扑异构酶Ⅰ缺失的大肠杆菌中拓扑异构酶Ⅲ参与高负超螺旋的消除(英文)

在拓扑异构酶Ⅰ缺失的大肠杆菌突变株中,抑制转录和翻译可以消除高度负超螺旋.为了检测起作用的拓扑异构酶,在拓扑异构酶Ⅰ缺陷的菌株中,以萘啶酮酸抑制旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ的活性,结果表明并未影响高度负超螺旋的消除.进一步作了拓扑异构酶Ⅰ,旋转酶,拓扑异构酶Ⅲ和拓扑异构酶Ⅳ的体外松弛实验,结果表明,拓扑异构酶Ⅲ可以松弛高度负超螺旋到正常的超螺旋水平.可以认为拓扑异构酶Ⅲ负责松弛高度负超螺旋并受到某种信号机制的调控.

大肠杆菌topA^-细胞中tetA-cfaABCE的高效转录促进DNA凝集

为深入了解大肠杆菌top A-突变体中转录对DNA结构的影响,以编码一个tet A-cfa ABCE共转录单元的质粒p JGX15A为研究对象,利用氯喹-琼脂糖凝胶电泳比较了大肠杆菌HB101(top A+,gyr B+)与DM800(top A-,gyr B225)细胞中p JGX15A质粒的拓扑结构状态,发现DM800细胞中p JGX15A存在一种特殊的凝集结构。这种结构在氯喹-琼脂糖凝胶电泳中具有较高的迁移率,而且呈现"弥散"状态而不是清晰的拓扑条带。进一步的研究表明培养基中的四环素质量浓度以及细胞生长时相均会影响p JGX15A在DM800细胞中的结构,而凝集结构只出现在四环素质量浓度低于6μg/m L时的对数期DM800细胞中。原子力显微镜照片显示这种结构并非典型的互缠式超螺旋结构,而是含有不同程度的分子内凝集,部分DNA分子高度凝集为一团。

产低温淀粉酶的海洋真菌筛选及研究

从黄、东海的近海海底泥样中分离到6株产淀粉酶活力较高的丝状真菌,对其中产淀粉酶活力最高的Penicillumsp.FS010441号菌株产酶条件及酶学性质进行了初步研究。该菌最适生长温度为15℃,最高生长温度为40℃,在0℃也可生长,是典型的耐冷菌。对Penicillumsp.FS010441进行固体培养每克干曲酶活达2622U。Penicillumsp.FS010441所产低温淀粉酶最适作用pH值为6.0,最适反应温度为40℃,但在0℃也表现出一定酶活,而在15℃有较强的酶活。该低温淀粉酶在洗涤、食品、饲料。

探秘生命的第三种形式——我国古菌研究之回顾与展望

古菌是生命的第三种形式,蕴含着生命演化早期的信息.古菌广泛分布于地球上的各种环境(包括极端自然环境),遗传与代谢多样性极为丰富,是元素生物地球化学循环的重要驱动者.同时,古菌及其代谢产物也展现出了独特的生物技术开发潜能.20世纪70年代,我国科学家即开始研究古菌.世纪之交以来,我国古菌研究队伍迅速壮大,如今已经成为国际古菌领域的一支主要研究力量.他们在古菌系统发育与进化、生物地球化学作用、基本生物学过程、病毒与宿主免疫、开发利用等方面开展了系统的工作,取得了一系列具有国际水平的研究成果,为提升对古菌的认知做出了重要贡献.本综述简要介绍了我国科学家在古菌研究中取得的主要研究成果,并对学科的未来发展方向进行展望.