去势骨质疏松症大鼠模型防治效果的参数比较

目的 评价防治骨质疏松症大鼠模型药物疗效的各项指标。方法 采用卵巢切除术建立骨质疏松症预防和治疗大鼠模型 ,分别灌喂阿仑膦酸钠和埃本膦酸钠 ,持续处理 6个月。以骨密度、骨生化标志物、骨矿含量、骨生物力学和骨组织形态学方面的参数为指标 ,评价它们的价值。结果 两组大鼠模型用药后 ,各部位的骨密度明显升高。评价药物疗效时 ,敏感度、特异度、准确度最高的是全身骨密度和骨小梁面积。用药大鼠的股骨最大弯曲载荷、骨挠度、股骨干重、灰重、骨钙含量虽有不同程度的增高 ,血清骨钙素有一定程度的下降 ,但与对照组相比基本均无统计学意义。结论 全身骨密度是评价防治骨质疏松症药物疗效的最佳指标 ,骨切片计算骨小梁面积也是评价防治骨质疏松症药物疗效的敏感指标。

人酸性铁蛋白H亚基固相免疫放射分析

从人心肌组织纯化酸性铁蛋白（ＡＩＦ），免疫家兔产生的ＡＩＦ血清用ＡＩＦ偶联的亲和层析柱纯化，将抗ＡＩＦ免疫球蛋白制成固相。１２５Ⅰ－抗ＡＩＦ－Ｈ亚基单克隆抗体用氯胺－Ｔ法制备；采用顺序法建立ＡＩＦ－Ｈ亚基因相免疫放射分析，数据用自动拟合样条函数处理，批内和批间ＣＶ分别为２．４４３％和１０．１６０％，灵敏度为０．７３６μｇ／Ｌ，回收率为９２．２９３％，可测范围为１．４７２－３２０μｇ／Ｌ，ＥＤ５０为２３．０５μｇ／Ｌ。与ＡＦＰ、ＣＥＡ和乳铁蛋白（ＬＦ）无交叉反应，与铁蛋白有３．１２５％的交叉反应。健全性试验证明血清基质对本方法无干扰。４０例男女血清ＡＩＦ－Ｈ亚基含量分别为３．７５±１．８５和２．９２±０．９６μｇ／Ｌ（Ｓ±２Ｓ），１０例肝癌患者血清ＡＩＦ—Ｈ亚基含量为８．３９±３．８７μｇ／Ｌ（Ｓ±２Ｓ），显著高于正常参考值。本方法可为肿瘤，尤其是肝癌的基础和临床研究提供一种有效的手段。

论终身教育时代图书馆服务继续教育的创新途径

终身教育在人们的后学历时期主要是靠接受继续教育的多种方式来实现的,而图书馆作为知识的宝库,理所当然地就成为服务继续教育的大课堂。终身教育时代的图书馆以其开放的特性和丰富的动态性馆藏、幽雅而个性的环境、各种完善的服务设备和现代化的服务手段,成为社会实施终身教育的重要基地,能在继续教育领域拥有重要地位和发挥不可缺少的作用。以服务继续教育为方向,成为当前图书馆建设的一大重要课题。

加强电子图书档案管理的思考

电子图书档案载体抵抗外界不利因素的能力一般都比较差,往往因为保存不善造成破碎、变形或其他物理、化学的损坏,因此必须做好控制温湿度、防止外来磁场、灰尘、光线、辐射和有害气体等工作。本文对此进行分析探讨。

论数字图书馆数字信息资源采集的途径

数字图书馆将成为未来社会的公共信息中心和枢纽,图书馆数字化将是图书馆的最终发展方向.加强提书馆数字信息资源的采集就成为一个重要的问题.本文试对此进行探讨.

关于加强高校图书馆纸型过刊管理和利用的思考

网络环境下,纸型过刊仍然是高校图书馆利用过刊文献信息资源的主要载体之一。笔者就如何有效地管理和利用纸型过刊,以便于更好地为教学和科研服务,结合自己的工作实际分六个方面进行了论述,并提出了一些意见和建议。

探析网络环境下高校图书馆期刊的管理与服务

本文从期刊的发展谈起,阐明了网络环境下期刊工作的特点,并就高校图书馆如何适应网络环境的变化,优化期刊管理、服务方面做了探讨。

网络环境下高校图书馆咨询服务面临的挑战与应对

高校图书馆参考咨询工作的主要对象是学生、教师、科研人员和管理人员。参考咨询是图书馆员对读者利用文献和寻求知识、情报提供帮助的活动,它以协助检索、解答咨询和专题文献报道等方式,向读者提供实施、数据和文献线索参考咨询。本文对网络环境下高校图书馆咨询服务工作面临的挑战与对策问题进行研究。

论当前图书馆经济效益实现的途径

目前，图书馆界面临的最大问题是经费。没有了经费，消遣娱乐型图书且不说。就是反映当前科技新动态、最新成果的图书、期刊也难以购全、购齐，这在很大程度上将影响图书馆的日常工作，更无从言及发展。而图书馆的经济效益为其经费的缓解乃至解决提供了新的思路，为图书馆取得良好的社会效益创造了丰厚的物质基础条件。因此，只有实现最大化的经济效益，才能凸现图书馆的社会效益。那么，目前图书馆实现经济效益的途径在哪里呢？

赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03￣1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.

中药虎杖中抗癌活性物质研究

目的:为虎杖药用价值的开发利用提供科学据依。方法:在生物活性测定指导下,从虎杖中分离得到一种较高抗癌活性的物质,并且用液质联用、红外光谱、紫外全扫描等方法鉴定其结构。MTT法测定它对L-02、HepG2、SHZ-888、MCF-7、MCF-7/ADM等细胞的抑制作用并用HE染色法观察其作用MCF-7/ADM细胞48 h、72 h后的肿瘤细胞形态学变化。结果:分离得到的物质为顺、反式-白藜芦醇,它能特异性抑制多种肿瘤细胞的生长,而对正常肝细胞毒性很小。同时,首次发现其对耐阿霉素的MCF-7乳腺癌细胞有直接的细胞毒性。结论:白藜芦醇是虎杖中一种活性强、低毒的抗癌物质。

黄曲霉毒素B_1的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1(AFB1)间接竞争免疫分析法(AFB1-TRFIA)。以AFB1-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗AFB1抗体;AFB1与辣根过氧化酶的联结物(AFB1-HRP)包被96孔板为固相抗原,与游离AFB1共同竞争有限的抗AFB1抗体;用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪。该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01—100μg/L,批内和批间变异分别为4.1%和6.8%,平均回收率为97.2%,与黄曲霉毒素B2的平均交叉反应为10%左右;黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B及HRP基本不干扰本方法对AFB1的检测。8条不同时间进行的AFB1-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L、(0.63±0.02)μg/L和(12.5±0.47)μg/L。比较AFB1-TRFIA和AFB1-ELISA检测AFB1,两者的相关系数为0.917。研究表明,AFB1-TRFIA是目前报导的AFB1检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。

改善稀有密码子和氨基酸残基限制提高重组人ADAM15去整合素结构域蛋白表达水平

【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。【结果】(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%。【结论】这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达。

重组水蛭素与血栓前体关系的研究

氯胺－Ｔ法碘标水蛭素，采用固相饱和法、固相竞争法分析水蛭素与凝血酶－纤维蛋白原复合物的亲和力及定量结合关系，并分析水蛭素－凝血酶－纤维蛋白原复合物形成的时间反应动力学。结果显示，水蛭素可特异地与凝血酶－纤维蛋白原复合物形成三元复合物，它们的分子配比为１４∶１４∶１（水蛭素：凝血酶：纤维蛋白原）。生理Ｃａ^（２＋）浓度是它们的最佳结合环境，水蛭素与凝血酶－纤维蛋白原复合物结合的亲和常数Ｋ_ａ为９．７２ ×１０~６Ｌ／ｍｏｌ；其结合反应可在３０－４５ｍｉｎ达到平衡，提示水蛭素有作为血栓显像配基的可能性。

肝ASGP受体功能显像剂的制备及显像研究

采用ＦＰＬＣ快速纯化人血清白蛋白，利用双功能试剂２－亚胺基－２－甲氧基乙基－１－疏代－ 半乳糖甙与伯胺基的成脒反应，将硫代半乳糖残基引入人血清白蛋白分子，得到平均糖密度为 ３０的新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）；用直接法制备９９ｍＴｃ－ＮＧＡ，其放化纯大于９０％，且室温下 可稳定６ｈ以上，符合显像要求。９９ｍＴｃ－ＮＧＡ小鼠体内分布实验及大鼠、兔和狗的显像研究均 表明９９ｍＴｃ－ＮＧＡ能够被肝脏特异摄取，且具有饱和性，主要通过胆道、肠道排泄，是一种较 好的肝ＡＳＧＰ受体功能显像剂。

苦参灵芝发酵液在2.2.15细胞中抗HBV作用

比较苦参的灵芝发酵液和苦参与灵芝发酵液的混合液体外抗乙肝病毒(HBV)的效果.用HBVDNA转染的2.2.15细胞作为模型,放射免疫法测定2种药物作用后细胞培养上清液中HB sAg和HBeAg量,计算其对HBsAg和HBeAg分泌的抑制率,用MTT法检测细胞毒性.结果表明:剂量在12.5～200μg/mL的范围内,均能不同程度地减少细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg量,发酵液细胞的毒作用不明显,而混合液具有一定的细胞毒作用.结果显示发酵液具有一定的体外抗HBV作用.

人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

利用重叠PCR技术在体外拼接IFNB和HSA基因,将得到的融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,置于启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白IFNβ-HSA。重组质粒pPIC9K-IFNβ-HSA经SalI线性化,电击转化毕赤酵母KM71,经G418筛选得到高拷贝转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达的融合蛋白IFNB-HSA,表明该蛋白分子量约为90kDa,且具有HSA的抗原性;用细胞病变抑制法测定发酵液上清中融合蛋白的干扰素活性约为640IU／ml。

水蛭素促尿激酶纤溶作用研究

目的研究水蛭素对尿激酶诱导的纤溶作用的影响,并分析可能的机制。方法采用尿激酶为纤溶激酶,复钙柠檬酸钠抗凝血浆为纤溶酶原来源的体外溶栓模型,通过测定纤溶产物D-D imm er生成量,微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,比较水蛭素与肝素对纤溶的影响。运用土豆羧肽酶抑制剂(CPI)对TAFIa的专一性抑制作用,分析水蛭素与肝素对TAFI活化的影响。结果水蛭素组D-D imm er较肝素组高(P<0.01),水蛭素加CPI组较水蛭素组更高(P<0.01);微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,肝素组有明显的纤溶停止和血栓再形成倾向,水蛭素组则可观察到明显的溶栓现象,水蛭素加CPI组效果最好。结论对尿激酶诱导的纤溶,水蛭素比肝素有更好的间接促纤溶作用,其原因主要是水蛭素能有效抑制再次血凝的发生,减少了尿激酶和纤溶酶原的短暂性耗竭。在这一过程中,水蛭素不能彻底抑制TAFI活化,表明对TAFI活化的抑制可能不是水蛭素促尿激酶纤溶作用的主要原因。

合欢皮提取物抑制血管生成作用的研究

本文采用体外细胞培养法和体内鸡胚尿囊绒膜模型、荷瘤模型检测合欢皮提取物抑制人微血管内皮细胞(HMEC-1)的增殖、迁移活性,观察合欢皮提取物的抑制血管生成情况。发现合欢皮提取物能显著抑制HMEC-1的增殖(IC50为30μg/mL)和迁移,并且呈明显的剂量依赖性。在体内同时具有抑制鸡胚尿囊膜和肿瘤组织中血管生成的作用。