ELISA检测华支睾吸虫病患者血清特异性IgG_4的诊断价值

目的 探讨用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 的诊断价值。 方法 用华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行ELISA分别检测华支睾吸虫病患者 (76例 )血清中的特异性IgG和IgG4 抗体及日本血吸虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病患者 (分别为 63、3 5、41例 )和健康者 (65人 )血清中的交叉抗体。 结果 检测 76例华支睾吸虫病患者血清中IgG4 的检出率为 93 .42 % ,检测 65例健康者血清中的IgG4 均为阴性 ,分别与检测IgG结果比较差异均无显著性意义 (P均 >0 .0 5 ) ;与其它寄生虫病的交叉反应率 ,IgG4 显著低于IgG ;诊断效率及阳性、阴性预告值分别为 96.45 %、10 0 %和 92 .85 %。 结论 用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 具有较高的诊断应用价值。

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG_4考核疗效的比较研究

目的探讨ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法，用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常人和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ＞０．０５）；用ＳｊＭＡｇ和ＫＬＨ分别检测治疗后１２个月血清中ＩｇＧ和ＩｇＧ４的阴转率均显著高于ＳＥＡ（Ｐ＜０．０１）、检测治疗后２４个月血清中ＩｇＧ４的阴转率均达９７．６％。结论ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２具有与ＳＥＡ相似的诊断价值和较高的疗效考核价值；特异性ＩｇＧ４可能系一种疗效敏感抗体，可望成为疗效考核评价指标。

日本血吸虫成虫表膜抗原的诊断效果及疗效考核价值

[目的 ]探讨日本血吸虫成虫表膜抗原 (Sj MAg)检测日本血吸虫病患者的特异性和敏感性及考核疗效价值。 [方法 ]采用 Sj MAg- EL ISA检测治疗前、后不同时期血吸虫病患者血清中特异性 Ig G、 Ig G4及健康人、并殖吸虫、华支睾吸虫及囊尾蚴病患者血清中的交叉抗体。 [结果 ]Sj MAg的敏感性和特异性与可溶性虫卵抗原(Sj SEA)比较 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;用 Sj MAg- EL ISA检测治疗后 12个月患者血清中 Ig G的阴转率为80 .0 % ,显著高于 SEA- EL ISA的 43.3% ,而检测 Ig G4的阴转率为 93.3% ,显著高于 Sj SEA- EL ISA的 6 0 % ,检测治疗后 2 4个月患者血清中 Ig G和 Ig G4的阴转率分别达 92 .9%和 97.6 %。 [结论 ]Sj MAg- EL ISA检测日本血吸虫病具有与 Sj SEA- EL ISA相同的诊断价值和较高的考核疗效价值。

重组日本吸虫成虫32kDa抗原用于疗效考核的研究

目的探讨重组日本血吸虫成虫３２ＫＤ抗原（ｒｓｊ３２）检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及考核疗效的价值。方法采用ｒＳｊ３２－ＥＬＩＳＡ法检测治前及治后不同时期血吸虫病人血清中特异性ＩｇＧ及正常人、肺吸虫、肝吸虫和囊虫病人血清中交叉抗体。结果ｒＳｊ３２在敏感性和特异性方面与ＳＥＡ比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；用ｒＳｊ３２－ＥＬＩＳＡ检测治后１２个月血清ＩｇＧ的阴性率为７６．７％，显著高于ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ的４３．３％，检测治后２４个月血清ＩｇＧ的阴性率达９０．５％。结论ｒＳｊ３２－ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫病具有与ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ相同的诊断价值和较高的考核疗效价值。

日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的应用研究

目的 探讨日本血吸虫快速酶联免疫吸附试验 (F- EL ISA )抗体检测试剂盒检测日本血吸虫病的特异性、敏感性及与其他寄生虫病的交叉反应。方法 采用 F- EL ISA法检测日本血吸虫急性、慢性及晚期病人血清中抗 SEA抗体和健康人、并殖吸虫、肝吸虫、囊虫及旋毛虫病患者血清中的交叉抗体。结果 检测急性、慢性及晚期血吸虫病人的敏感性分别为 10 0 %、95 .19%和 77.78% ,检测正常人的特异性为 98.46 % ,与并殖吸虫、肝吸虫、囊虫及旋毛虫病人的交叉反应率分别为11.6 3%、7.5 5 %、0和 13.33%。结论 F- EL ISA检测日本血吸虫病具有敏感性高、特异性强、快速简便等优点 。

ELISA检测特异性IgG4诊断肺吸虫病的效果观察

目的 探讨用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测特异性 Ig G4诊断肺吸虫病的效果。 方法 采用 EL ISA法检测了肺吸虫病病人血清中的特异性 Ig G和 Ig G4抗体及肝吸虫、囊虫、旋毛虫、日本血吸虫病病人和正常人血清中的交叉抗体。 结果 检测肺吸虫病病人血清中 Ig G4的敏感性为 95 .35 % ,检测正常人血清的特异性为 10 0 % ,与常规使用的酶联葡萄球菌 A蛋白 (HRP- SPA)检测结果及检测 Ig G结果比较差异无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ;与其他寄生虫病病人血清中的交叉反应率 ,Ig G4显著低于用常规 HRP- SPA检测结果。 结论 EL ISA法检测肺吸虫病病人血清中特异性 Ig G4具有较高的诊断应用价值。

4种抗原诊断血吸虫病效果的比较研究

目的 寻找特异性、敏感性较高 ,且价廉和制备简易的血吸虫病诊断抗原。方法 用酶链免疫吸附实验(ELISA)比较 4种抗原检测 5 8例慢性血吸虫病人的阳性率及 41例正常人血清和 10 4例其它寄生虫病人的阴性率。结果 SEA、SjMAg、rSj32和KLH 4种抗原的敏感性分别为 94 8%、 98 3%、 93 1%和 96 6 % ,特异性分别为 95 2 %、 97 9%、97 2 %和 99 3 %。 4种抗原之间敏感性和特异性的差异均无显著性 (Se :χ2 =2 0 9,Sp :χ2 =5 19,均P >0 0 5 )。结论 Sj MAg、KLH和rSj32具有与SEA相似的诊断价值 。

Cu-Si合金的高温氧化行为

通过氧化动力学曲线的测定以及对氧化膜形貌和构成的分析,研究Cu-0.6Si和Cu-3.6Si合金在800℃、0.1MPa纯氧气条件下的高温氧化行为.结果表明:两合金氧化24 h后形成的氧化膜结构依次为CuO,Cu_2O,Cu_2O和SiO_2的混合氧化物,均未形成连续的SiO_2氧化膜.随着Si含量的提高,合金氧化膜内层SiO_2含量明显提高,这有利于通过限制合金元素和氧的扩散提高合金的氧化抗力.Cu-3.6Si合金较Cu-0.6Si合金氧化膜内孔洞减少,致密度增加,这得益于SiO_2对合金氧化膜内孔洞的补偿.SiO_2对Cu较大的PBR值是两种合金氧化膜容易开裂的重要原因.

洞庭湖渔民血吸虫感染情况及化疗效果分析

目的 调查洞庭湖渔民感染血吸虫的严重程度 ,评估其化疗防治效果。 方法 2 0 0 1年 11月选择湖南省岳阳县麓角镇洞庭湖水上作业渔民 ,询问血吸虫感染与化疗史。用改良加藤法检查虫卵和毛蚴孵化法检查毛蚴 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)和间接血凝试验 (IHA)检测抗可溶性虫卵抗原 (SjSEA )的抗体 ,B超检查肝 /脾病变程度。人群顿服吡喹酮 40mg/kg ,一个感染季节过后复查。用SPSS软件进行分析。 结果 ①询问调查渔民 2 68人 ,“经常”或“间常”接触疫水的人数占 90 7% ;近 5年每年平均化疗人数占 2 4 0 % ,从未化疗者占 3 9 4% ;②粪检阳性率为 68 1% (111/163 ) ,克粪虫卵数 (EPG )为 48 77,男性均显著高于女性。 11～ 2 0岁阳性率最高(83 3 % ) ,“经常”或“间常”接触疫水与从未化疗的两种人群阳性率分别为 76 3 % (10 6/13 9)和 79 7% (5 1/64 ) ;③IHA检测阳性率为 88 0 % ,ELISA检测阳性率为 78 7% ,均明显高于粪检阳性率 ;④肝 /脾受损率为 77 4% (82 /10 6) ,其中 ,肝实质呈Ⅱ～Ⅲ级纤维化病变者占 3 7 7% ,肝肿率为 5 8 5 % ,脾肿率为 19 8% ;⑤多次化疗人群感染率和EPG显著低于从未化疗人群 ;⑥复查结果表明 ,化疗人群粪检阳性率 (3 5 4% )和EPG (3 6 13 )较未化疗人群(5 6 5 %和 68

日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果 EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论 DNA疫苗 VR10 12 -

重组日本血吸虫铁蛋白粘膜免疫诱导小鼠保护力的研究

目的 探讨重组日本血吸虫铁蛋白 (r Sj Fer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫的保护性免疫。 方法 实验鼠分为 8组 ,每组 10只 ,包括 r Sj Fer、霍乱毒素 B亚单位 (CTB)和 r Sj Fer+CTB灌胃免疫组 ,以及 r Sj Fer、CTB和r Sj Fer+CTB滴鼻免疫组 ,PBS灌胃及滴鼻对照组。在第 3次免疫后 2 wk,经腹部感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 ,4 5d后解剖观察减虫率和减卵率。在免疫前和感染前尾静脉采血和取粪样 ,EL ISA检测血清 Ig A、Ig G及粪内 s Ig A水平。 结果 灌胃及滴鼻各组减虫率依次为 3.98%、3.77%、2 5 .5 7%及 7.6 9%、4 .5 0 %、33.35 % ,每克肝减卵率依次为3.76 %、2 .4 6 %、34.75 %及 4 .4 0 %、0 .0 6 %、6 0 .10 %。 结论 r Sj Fer粘膜免疫能诱导小鼠产生抗血吸虫的保护性免疫。

日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的 观察日本血吸虫 31k Da组织蛋白酶 B DNA疫苗 (Sj31B1 N)在小鼠体内的保护性免疫效果。方法 用 Sj31B1 N和 Sj31B1 N +p UC DNA疫苗肌注免疫 BAL B/ C小鼠 ,用空白质粒载体VR10 12做对照 ,在 0、4、8周共免疫 3次 ,每次免疫前及末次免疫后 4周从尾静脉采血收集血清 ,经EL ISA法检测小鼠血清抗体升高时 ,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠。结果 Sj31B1 N和 Sj31B1 N+p U C减虫率分别为 2 4.2 %和 2 2 .0 % ;肝卵减少率分别为 34 .9%和 39.5 % ,每雌肝卵减少率分别为 30 .4%和 35 .3%。结论 小鼠接种 Sj31B1 N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用。加质粒佐剂 p

Cystatin-ELISA法诊断日本血吸虫病的研究

目的 建立一种敏感、高特异性的血吸虫病诊断方法。方法 应用 Cystatin捕获血吸虫吐出物中的半胱氨酸蛋白酶 ,再进行 EL ISA试验检测日本血吸虫 (Sj)病人血清中相应的特异抗体。结果 检测 12 0例慢性血吸虫病人血清 ,84例非疫区正常人血清和 36例华支睾吸虫病人血清 ,Cys-tatin- EL ISA检测 Sj病人阳性率为 98.4 % ,与正常人及华支睾吸虫病人无交叉反应。其敏感性(98.4 % )与 SEA- EL ISA法的敏感性 (93.4 % )比较无明显区别 (P>0 .0 5 ) ,但特异性显著高于后者(P<0 .0 5 )。 Cystatin- EL ISA敏感性和特异性亦均高于 AWA- EL ISA和 ES- EL ISA。结论 Cys-tatin- EL ISA敏感性高 ,特异性强 ,是一种有效的诊断血吸虫病的方法。

日本血吸虫重组铁蛋白的粘膜免疫效果研究

目的 构建日本血吸虫铁蛋白 (SjFer)原核表达质粒。以壳聚糖作佐剂 ,探讨重组日本血吸虫铁蛋白(rSjFer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫感染的保护力。 方法 用PCR扩增SjFer基因 ,亚克隆入原核表达载体pTWIN1上intein 2的N端 ,经PCR、限制性酶切筛选阳性重组子并经测序鉴定。将阳性重组子转化大肠埃希菌 ,在低温和低浓度的异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)条件下诱导表达可溶性重组融合蛋白。利用重组融合蛋白的壳聚糖结合功能域 (CBD)结合位点 ,使其与壳聚糖结合 ,经滴鼻免疫小鼠 ,于第 3次免疫后 2周攻击感染 ,用减虫率和减卵率表示保护力。感染前采血和唾液用ELISA检测抗体。 结果 成功克隆并表达了rSjFer。rSjFer以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了 3 5 .5 1%的减虫率和 5 2 .17%的减卵率。免疫后小鼠血清IgG和IgA及唾液SIgA抗体水平与对照组比较均明显升高。 结论 获得了rSjFer ,该蛋白以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。

日本血吸虫三个新跨膜蛋白基因的克隆和分析

目的 克隆并分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新的抗原基因 ,为血吸虫病防治提供有效的疫苗候选分子。方法 以旋毛虫感染鼠血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对获得的阳性克隆进行PCR鉴定及测序。通过互联网对测序获得的核苷酸序列进行同源性分析 ,并预测新基因编码蛋白质的结构与功能。结果 共筛选出 9个阳性克隆 ,其插入SjcDNA片段大小在 0 .6～ 2 .1kb之间。测序分析获 5个新基因 ,其中Sj Ts1,Sj Ts3及Sj Ts5 (登录号为AY0 0 5 816 ,AF2 990 80 ,AY0 2 4 35 2 )分别编码 83,83,2 33个氨基酸组成的跨膜蛋白。Sj Ts1蛋白含 1个潜在的跨膜区 ,2个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和 1个N 肉豆蔻酸化位点。Sj Ts3蛋白含两个跨膜区 ,1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。Sj Ts5蛋白为具有 5个跨膜区的跨膜蛋白 ,含 1个N 糖基化位点、2个cAMP与cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、4个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和 1个N 肉豆蔻酸化位点。结论 Sj Ts1、Sj Ts3与Sj Ts5基因编码的蛋白质均为受磷酸化激活控制的跨膜蛋白 。

洞庭湖渔民血吸虫病感染程度与免疫状态关系的研究

摇目的了解洞庭湖频繁接触疫水渔民的免疫状态及其与感染度和肝病变程度间的关系。方法采用询检、粪检、肝B超、流式细胞术(FCM)、免疫比浊法和ELISA法,检测血吸虫感染度、肝脾病变程度和血中CD4+和CD8+T细胞百分率及抗体水平等指标,用SPSS10.0统计软件分析数据。结果与非疫区人群比较,疫区渔民人群外周血中的CD4+T细胞百分比和CD4+/CD8+细胞比值显著降低,而且粪检阳性患者均随血吸虫感染度增高和肝脾病变加重而更为突出。相反,疫区渔民血清总IgM抗体和特异性IgG水平增高,并随感染度增加或肝脾病变加重而更为明显。血清总IgA水平在肝脾病变严重的人群中有显著增高。总IgG水平仅粪检阳性者有增高现象。结论长期作业于洞庭湖的血吸虫感染渔民表现为细胞免疫功能降低而体液免疫亢进,这种免疫失调程度与其感染度和肝脾损害程度相关。

日本血吸虫重组32×10^3蛋白诱导小鼠保护力的研究

目的用重组日本血吸虫32×103蛋白(rSj32×103)免疫Balb/c鼠,检测特异性IgG抗体水平,并观察抗日本血吸虫的保护效果。方法用rSj32×103加佐剂免疫小鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染后42d剖杀,计算减虫率。并用ELISA方法检测免疫后的抗体反应。结果间接ELISA测得免疫鼠特异性IgG抗体滴度达1∶12800。与对照组相比,减虫率为21.9%。结论用rSj32×103免疫小鼠后可诱导特异性IgG抗体,并能发挥一定的免疫保护作用。

日本血吸虫新基因SjF1的克隆、表达及免疫保护效果研究

目的 构建日本血吸虫中国大陆株SjF1原核表达重组质粒,并进行免疫保护效果测定。方法 用聚合酶链反应(PCR)法将SjF1基因从已剪切阳性克隆中扩增出来,克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,经PCR和限制性酶切筛选阳性重组子。将阳性重组子转化大肠杆菌,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白。经鉴定后分别以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫昆明鼠,观察诱导产生的减虫和减卵效果。感染前采血和唾液用ELISA法检测抗体。结果 成功克隆并表达了rSjF1。rSjF1以FCA作佐剂经皮下免疫获得了29.92％的减虫率和51.08％的减卵率;rSjF1以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了25.74％的减虫率和44.04％的减卵率。结论 获得了rSjF1,该蛋白以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫均能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。