MXD3表达水平与前列腺癌患者预后和免疫浸润的相关性研究

目的 探究MAX二聚化蛋白3(MXD3)在前列腺癌中的表达及与患者预后和免疫浸润的相关性。方法从TCGA数据库获取前列腺癌样本和正常样本的RNA测序数据和临床信息,比较肿瘤和相邻正常组织之间的MXD3表达水平。进行Kaplan-Meier生存分析,评估MXD3表达水平的预后价值和MXD3和临床特征之间的关联。采用GO和KEGG进行基因富集分析,使用ESTIMATE算法分析前列腺癌中MXD3表达与免疫细胞浸润之间的相关性。通过qRT-PCR和蛋白质印迹验证前列腺癌组织中的MXD3 mRNA和蛋白质表达水平。结果MXD3的表达水平在前列腺癌中显著高于正常前列腺组织,其高表达与不良预后显著相关,而且MXD3表达水平与肿瘤的临床分期呈正相关(P<0.05或P<0.001)。GO功能和KEGG通路富集分析结果显示MXD3与前列腺癌细胞的分裂增殖密切相关。MXD3的表达与调节性T细胞和滤泡辅助T细胞的免疫细胞浸润水平呈正相关(P<0.001和P<0.05),而与肥大细胞和CD4^(+)T细胞呈负相关(P<0.01和P<0.001)。与癌旁正常组织相比,MXD3在前列腺癌中mRNA和蛋白质表达显著增加(P<0.01)。结论 MXD3在前列腺癌中高表达,与前列腺癌患者不良预后有关,参与前列腺癌的分裂增殖并与免疫浸润相关,是潜在的预后生物标志物和免疫靶点。

润滑油总承包项目QHSE管理分析

此次对QHSE管理的内涵进行了梳理,从润滑油总承包项目综合质量管理、润滑油总承包项目主要质量控制手段(包括建立并不断健全项目质量管理体系、针对润滑油总承包项目开展的质量风险评估及管控措施)等进行了分析,提出构建“全过程、阶段化”的现场质量控制机制。不断加强对生产原材料、设备、半成品的质量控制水平。督促分部分项工程分包商严格按照规定规程开展施工作业等提高润滑油总承包项目综合管理水平的相关建议,以供参考。

结合混合注意力的双判别生成对抗网络

图像生成任务中,如何提升生成图片的质量是一个关键问题。当前,生成对抗网络采用的多层卷积结构存在局部性归纳偏置的问题,无法准确聚焦关键信息,导致图像特征丢失严重,生成图像效果较差。为此,提出了结合混合注意力的双判别生成对抗网络(DDMA-GAN)。设计了一种混合注意力机制,利用通道注意力和空间注意力模块,从两个维度充分捕获图像特征信息;为解决单判别器存在判别误差的问题,提出一种双判别器结构,使用融合系数将判定结果融合,使回传参数更具客观性,并嵌入数据增强模块,进一步提升模型鲁棒性;采用铰链损失作为模型损失函数,最大化真假样本间的距离,明确决策边界。模型在公开数据集LSUN和CelebA上进行验证,实验结果表明,DDMA-GAN生成的图像更加真实,纹理细节更加丰富,其FID和MMD值均显著降低且优于其他常见模型,证明了模型的有效性。

四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响

为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法的延伸步骤之后 ,增加一个短暂的 (5s)恒温和荧光检测步骤 ,使这个步骤的温度高于PDs的Tm,但低于扩增产物的Tm,简称该法为四步法 .PDs的Tm 通常高于 72℃ ,但低于扩增产物的Tm .将四步法第四步的温度设置在高于PDs的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时 ,四步法能够有效地消除PDs的影响 .对三步法和四步法SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR进行了比较 ,发现三步法根本不能用于RNA的实时定量 ,而四步法能够实现包括低丰度RNA在内的RNA的定量 .选择Tm 值尽可能小的引物 ,使PDs与扩增产物Tm 值之间有足够的差距 ,将更有利于四步法的应用 。

一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立

为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法.

pH敏感型海藻酸钙多孔凝胶微球的制备及溶胀性能的研究

以海藻酸钠作为基材,制备了一种在pH值为7.4环境下具有敏感性的多孔水凝胶微球。通过正交试验得到了较佳的制备条件为:海藻酸钠溶液浓度为2%(质量分数),氯化钙溶液浓度为3%(质量分数),水浴温度为60℃,保温时间为40min。在此条件下制得的凝胶微球,在pH值为7.4(结肠pH值环境)的磷酸盐缓冲溶液中溶胀30min后,溶胀比可达21.8;而在去离子水(pH值6左右)和pH值1.2(胃液pH值环境)的缓冲溶液中同样时间的溶胀比仅为1.5。通过添加不同类型和浓度的成孔剂,如PEG200、NaCl等,提高了凝胶微球的溶胀响应速率。结果表明,在没有成孔剂存在的条件下,此凝胶微球在pH值为7.4的缓冲溶液中溶胀到最大溶胀比所需时间为30min,而在添加了适量PEG200、NaCl后,均提高了其溶胀响应速率,分别在10、15min即可达到最大溶胀比。

RNAstructure软件不同版本对FORS-D分析的影响

目的:研究RNAstructure两个不同版本(4.2和3.6版)对FORS-D分析的影响。方法:以H IV-1 CRF01_AE基因组为对象,将其分隔成连续的含200碱基的片段,两个连续片段之间互相重叠150碱基。用序列打乱程序将每个片段打乱成10个碱基组成相同的随机片段。用RNAstructure软件分别计算每个片段核酸二级结构的最小自由能。结果:两个不同版本RNAstructure软件获得的FONS、FORS-M和FORS-D值在基因组上具有完全一致的分布。用Z检验分别比较两组数据的平均值,发现4.2版获得的FONS(P<0.05)和FORS-M(P<0.01)值明显低于3.6版,而对FORS-D(Z=0.127 1,P>0.05)值没有明显影响。另外,发现GC含量不是两个版本软件造成FONS(P=0.29)和FORS-M(P=0.40)差异的主要因素。结论:使用不同版本的RNAstructure不会影响FORS-D值,但因4.2版可以产生更稳定的二级结构,并具有更高的预测准确性,使用RNAstructure 4.2版进行FORS-D分析将是更好的选择。

HIV-1感染对T和B细胞核内UNG2 mRNA表达的影响

目的:探讨HIV-1感染是否影响细胞中UNG2的表达。方法:采用四步法SYBR greenⅠ实时定量RT-PCR,对HIV-1感染者的T和B淋巴细胞,以及HIV-1感染的C8166细胞核内UNG2 mRNA的表达进行测定。结果:UNG2 mRNA的表达在HIV-1感染者的T细胞和HIV-1感染的C8166细胞中被明显上调,分别是对照的8.76倍和8.14倍,而在HIV-1感染者的B细胞中却没有被上调。结论:HIV-1感染导致的UNG2表达上调,可能通过减少TCR的多样性削弱Th的功能,另一方面可能有利于病毒对UNG2的包装。

SARS-CoV由果子狸向人类跨种传播中S蛋白的适应性进化研究

目的:研究SARS-CoV表面S蛋白由动物向人类跨种传播过程中的适应性进化过程。方法:用系统进化树构建和群体遗传学方法,对100个S基因序列进行了分析。这些序列均从GenBank获得,并能反映整个SARS流行期。结果:依据系统进化树和流行病学资料,将SARS病毒分为三个流行群:02-04跨种传播群、03-早中期流行群和03-晚期流行群。它们分别代表SARS-CoV克服种间障碍实现跨种传播阶段、进入人类后的最初适应阶段以及在人类中建立感染后的阶段。在前两个流行群中,S蛋白受到了阳性选择压力,而在03晚期流行群中却遭受了很强的负选择压力。三个流行群选择压力的比较显示,SARS-CoVs从动物向人类跨种传播过程中,S蛋白受到的阳性选择压力依次减小。结论:从最初的阳性选择到最后的负选择,S蛋白经历了变化的自然选择压力。这种变化的选择压力不仅反映了SARS-CoV由动物向人类跨种传播的适应性进化过程,也为研究其他病毒的跨种传播机制提供重要线索。

HIV-1的表型及其感染的细胞嗜性

HIV-1的表型分为合胞体诱导型 (syncytium inducing ,SI)和非合胞体诱导型 (non syncytium induc ing ,NSI)。依据所用辅助受体和感染靶细胞的不同 ,HIV 1又被分为R5、X4和R5X4型。R5和X4型病毒分别利用CCR5和CXCR4作为辅助受体 ,而R5X4型病毒可利用这两种辅助受体。在病毒的复制力、细胞嗜性以及合胞体诱导能力上 ,SI型与X4型病毒一致 ,NSI型与R5型病毒一致。在HIV 1感染过程中 ,疾病的发展伴随着病毒从NSI型向SI型、及R5型向X4型的转变。HIV 1的表型影响和决定着HIV 1的感染、传播及AIDS的疾病进程。HIV 1的表型和细胞嗜性主要由病毒gp12 0的V3区 (特别是第 11和 2 5位的氨基酸 )决定。V3区的氨基酸序列信息 ,将为预测HIV 1的表型 ,以及病毒感染后的疾病进程提供生物信息学的依据。

与植物多糖硫酸酯结合的HIV-1ⅢB灭活病毒免疫小鼠的研究

目的:为了探讨植物多糖硫酸酯(M33A)与gp120结合后,能否诱导H IV-1ⅢB的gp120暴露出中和抗体的表位,用它作为灭活疫苗以便诱导产生中和抗体。方法:用M33A结合的灭活H IV-1ⅢB作为免疫原,与佐剂混和后,免疫BALB/c小鼠,制备出免疫血浆。用ELISA检测血浆内抗H IV-1特异性IgG抗体的滴度,用改良的活细胞染色法中和试验检测免疫血浆的抗H IV-1ⅢB的中和活性。结果:从与M33A结合的H IV-1ⅢB免疫组的动物获得的免疫血浆内抗H IV-1抗体的滴度(C组:1.5×106;D组:1.5×106)比未结合M33A的H IV-1ⅢB免疫组(4.9×105)高,雌性小鼠的免疫血浆的特异性抗体滴度比雄性的高3倍。所有免疫组获得的免疫血浆均没有抗H IV-1中和活性。结论:M33A与gp120相互作用不能诱导暴露出gp120的中和抗体表位,但M33A可以增强机体免疫原的抗体反应强度,提示它可以作为免疫增强剂用于疫苗研究。

porD和oorD基因突变与幽门螺杆菌对呋喃唑酮耐药的关系

目的:调查镇江地区幽门螺杆菌对呋喃唑酮耐药情况,初步探索幽门螺杆菌对呋喃唑酮的耐药机制。方法:临床分离幽门螺杆菌菌株通过E-test法和琼脂稀释法测其耐药率,对药敏试验阳性菌株扩增其porD和oorD两基因并测序、比对。结果:镇江地区幽门螺杆菌临床分离株对呋喃唑酮耐药率为8.7%,且以低水平耐药为主;扩增产物测序、比对后发现porD基因有三个位点突变(C357T,A356G,G353A),以C357T为常见;oorD突变位点为A041G,A122G和C349A(G)。结论:porD和oorD基因的突变可能与幽门螺杆菌对呋喃唑酮产生低水平耐药相关。

髓系单核细胞来源的HIV-1限制性因子——SAMHD1

天然抗病毒限制因子是HIV-1研究最热点的领域。继APOBEC3G、Trim5α、Tetherin被发现之后,SAMHD1于2011年被发现为新的抗HIV-1限制因子。它主要在髓系来源的单核细胞中表达,如巨噬细胞和树突状细胞。该文对SAMHD1的结构、抗病毒机制、与Vpx的相互作用以及进化等方面的研究进行了综述。SAMHD1的发现为深入研究SAMHD1在慢病毒致病机理中作用打开了一扇门。

伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株的制备

目的:为探讨z66鞭毛抗原阳性伤寒沙门菌的fljA样基因的功能,制备沙门菌fljA样基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌fljA样基因序列,设计PCR特异性引物并在5'末端加接酶BglII位点,扩增fljA样基因上、下游片段,用BglII消化后,定向连接成fljA样基因的缺损性同源性核苷酸片段,先克隆至pGEM T质粒,再经BamHI酶切后导入自杀质粒pGMB151,电转化入伤寒沙门菌(GIFU10007),进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为fljA样基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的fljA样基因缺失231个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌鞭毛抗原表达的调控作用奠定了基础。

树鼩细胞周期蛋白T1 cDNA的克隆和序列分析

树细胞不能感染HIV 1,但支持HIV 1进入靶细胞后的转录 ,可能是因为树细胞周期蛋白T1(tsCycT1)能结合HIV 1的Tat蛋白。通过设计引物 ,用RT PCR技术 ,获得全长为 2 175bptsCycT1基因的cD NA。其核苷酸序列与人的CycT1(hCycT1)基因的cDNA有 92 6 %的相似性 ;由此推导出的氨基酸序列有94 1%相似性。其中 ,hCycT1和tsCycT1氨基端的 1～ 2 72个氨基酸的相似性高达 98 8% ,氨基酸第 2 6 1位点为半胱氨酸。这些结果提示 ,tsCycT1会和HIV 1的Tat结合 ,形成高亲和的、锌依赖的复合物 ,支持HIV 1转录。

浅谈肖邦c小调革命练习曲

《c小调革命练习曲》,是肖邦最早期的成熟作品。整曲以波兰华沙起义为背景,描写出波兰人民反抗沙俄侵略的斗争场景及作曲家强烈的爱国主义精神。本文对《c小调革命练习曲》的创作及演奏进行简要分析,通过对其结构的简要叙述,使读者了解本曲的艺术特性。有利于在演奏时,对该曲有更深刻的理解。

伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株制备与分泌蛋白初析

目的观察伤寒沙门菌调节蛋白OmpR的调节作用，制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株，并比较分析野生株和OmpR缺陷变异株在不同渗透压环境培养下的分泌蛋白。方法用自杀质粒pGMB151介导同源性重组方法制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株，用PCR方法观察重组现象，变异株经测序和外膜蛋白的SDS—PAG电泳鉴定，用SDS—PAG电泳结合Western blot比较分析野生株和OmpR缺陷变异株在高、低渗透压环境培养下的SipC等分泌蛋白。结果成功制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株，并发现变异株中，包括SipC、鞭毛素蛋白在内的多种蛋白的表达分泌有明显差异。结论伤寒沙门菌OmpR在不同的渗透压下分别影响SipC、鞭毛素蛋白等多种蛋白的表达分泌。

FORS-D分析软件“Random_fold_scan”和不同碱基随机打乱算法对FORS-D分析的影响

目的:开发FORS-D分析软件,并比较不同碱基随机打乱算法对FORS-D分析的影响。方法:根据单、双、三碱基及密码子随机打乱算法,用ActivePerl-5.8.8.820编写"Random_fold_scan"软件,它通过系统命令调用RNA-structure4.2来计算FORS-D值。用4种碱基随机打乱算法分别计算来自不同物种的12个mRNA序列,并且比较它们对FORS-D值的影响。结果:4种随机打乱策略不影响核酸序列的FORS-D分布趋势,但是单碱基打乱算法可以获得比其他3种算法更低的FORS-D值。比较4种打乱算法获得的FORS-D值的Z-score分布,发现单碱基打乱产生的FORS-D值显著小于0的比例最高,相反,FORS-D值显著大于0的比例最低。结论:单碱基随机打乱算法能够彻底破坏原始核酸的序列信息,在概念和理论上能够真正反映FORS-D的生物学涵义。这表明FORS-D分析中单碱基打乱足以给出准确、可靠的数据信息。此外,我们开发了软件"Random_fold_scan"用于FORS-D分析。