Hcy促血管平滑肌细胞增殖迁移相关的miRNAs筛选研究

目的明确同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人源血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖迁移的影响以及分析Hcy干预下VSMC增殖迁移相关差异miRNAs,为探讨Hcy促VSMC增殖迁移的分子机制提供依据。方法体外培养VSMC,分为Control组和100μmol·L^(-1) Hcy组。采用CCK-8法测量VSMC的增殖活性;采用划痕实验分析VSMC在0 h和48 h的迁移情况。高通量测序分析各组VSMC中差异化表达的miRNAs,采用miRanda和TargetScan软件进行靶基因预测,使用BLAST软件将预测靶基因序列与GO和KEGG数据库比对,分析靶基因的功能,获得与VSMC增殖和迁移相关的靶基因信息。通过RT-qPCR对其中表达上调的miRNAs进行验证。结果Hcy干预能增加VSMC的增殖活力(P<0.01),且VSMC的划痕面积减少(P<0.01)。两组细胞共检测到576个miRNAs,其中已知miRNAs 404个,新预测miRNAs 172个。与Control组相比,Hcy组存在88个差异表达的miRNAs,其中表达上调的20个,表达下调的68个。与VSMC增殖和迁移相关的miRNAs有20个,表达上调的包括miRNA39、miRNA206和miRNA212-5p,表达下调的包括miRNA35等17个。RT-qPCR结果显示,Hcy组miRNA212-5p的表达上调(P<0.05)。结论Hcy致VSMC增殖迁移过程中存在差异表达的miRNAs,miRNA212-5p可能参与了Hcy对VSMC的作用。

血管紧张素-(1-7)对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其机制研究

目的复制人脐静脉平滑肌细胞(HUSMCs)钙化模型,观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对HUSMCs钙沉积的影响,探索Ang-(1-7)延缓或抑制HUSMCs钙化的机制。方法采用β-甘油磷酸盐(β-GP)复制HUSMCs钙沉积模型,Ang-(1-7)干预后,对细胞进行Von Kossa染色及图像分析、检测碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞钙含量;检测细胞培养液中转化生长因子β1(TGFβ1)活性、骨钙素(OC)含量及细胞中核心结合因子1(Cbfα1)蛋白表达。结果 Ang-(1-7)可明显减轻钙化HUSMCs聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻(P<0.01),且10-5、10-7、10-9mol.L-1Ang-(1-7)与钙化组相比钙化细胞百分比、细胞钙含量和ALP活性均明显降低(P均<0.01),细胞TGFβ1分泌水平、Cbfα1表达、骨钙素含量均较钙化组降低(P均<0.01)。结论 Ang-(1-7)可减轻HUSMCs钙化程度,其作用机制与减弱TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1的表达有关。

临床前基础医学综合实验教学体系的构建与实践——以国家级一流本科线上线下混合课程为例

目的为建设适应新时代要求的一流本科课程,全面开展一流本科课程建设,树立课程建设新理念,推进课程改革创新,实施科学课程评价。以国家级一流本科临床前基础医学综合实验课程(线上线下混合)为例,介绍国家级一流本科课程教学体系的构建与实践。方法以五年制本科三年级各专业本科学生为研究对象,遵循两性一度原则,秉持学生中心、问题导向、持续改进的教育理念,从聚焦教学问题、厘清教学思路、课程教学创新实践、革新课程考核、多元评价反馈等维度,构建以线上线下相结合、虚拟实体相结合为特色的国家级一流本科线上线下混合课程。通过对2018级和2019级各专业1315名本科生进行问卷调查和同行评教评价教学效果。结果学生学习效果有所提升,科研思维和创新能力增强。经过改革实践,课程已被全国50所高校选用,累计5449人学习,1.60万人次互动,累计浏览量超过22.5万人次。结论临床前基础医学综合实验教学体系的构建为实验类国家级一流本科课程的建设和基础医学实验教学改革提供有益的经验和范例,具有推广应用价值。

MicroRNA-145在动脉粥样硬化血管平滑肌细胞增殖迁移及表型转化中的研究进展

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类长度为22~28个核苷酸的内源性非编码单链RNA,通过降解mRNA或抑制蛋白质翻译后修饰调控转录后基因的表达,是调控蛋白质生物合成的一类重要的非编码RNA。研究发现,miRNAs参与了动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块的形成、脂质代谢障碍、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)损伤等过程的调节。miRNAs在VSMCs中的表达水平,为阐明As的发病机制提供了新视角,也为As的治疗提供了新靶点。miRNA-145是血管壁和新鲜分离的VSMCs中含量最丰富的miRNA,是VSMCs表型和增殖的关键调节因子。文章就miRNA-145对As发生发展过程中的VSMCs增殖、迁移及表型转化的调控作用进行了综述。

靶向PI3K通路抑制同型半胱氨酸诱导的hVSMCs增殖、迁移和表型转化

目的 探究PI3K/Akt/mTOR信号通路在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cells,hVSMCs)增殖、迁移和表型转化中的作用。方法 体外培养hVSMCs,给予100μmol·L-1Hcy刺激48 h,复制高Hcy血症细胞模型。采用MTT法检测hVSMCs增殖,细胞划痕实验检测hVSMCs迁移;RT-qPCR和Western blot法检测hVSMCs表型标志蛋白α-SMA、SM22α和OPN的mRNA表达和蛋白表达;Western blot法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。给予PI3K信号通路的抑制剂LY294002和激动剂740Y-P刺激hVSMCs,检测对Hcy所致hVSMCs增殖、迁移变化和表型转化的影响。结果 Hcy刺激可以诱导hVSMCs发生增殖、迁移及表型转化,并且hVSMCs中PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K和p-Akt的蛋白表达均升高(P均<0.05);给予PI3K信号通路抑制剂LY294002干预后,与Hcy组比较,hVSMCs增殖降低(P<0.05);hVSMCs划痕面积增大(P<0.05);α-SMA和SM22α mRNA和蛋白表达量均增加(P均<0.05),OPN的mRNA和蛋白表达量均降低(P均<0.05)。给予PI3K信号通路激动剂740Y-P干预后,与Hcy组比较则得到了相反的结果。结论 Hcy通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导hVSMCs增殖、迁移及由收缩表型向合成表型转化,抑制PI3K信号通路对Hcy诱导的hVSMCs增殖、迁移及表型转化起到保护作用。

枸杞多糖对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的探索枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及其限速酶hTERT表达的影响。方法采用皮下接种法建立小鼠移植性肝癌模型,将96只小鼠随机分成正常对照组,模型组,LBP高、中、低(20,10,5 mg/kg·d)剂量组和环磷酰胺(20 mg/kg·d)组。观察LBP对小鼠肿瘤体积、抑瘤率的影响。PCR-TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性,Western blot测定hTERT蛋白表达。结果 20,10,5 mg/kg·d的LBP能明显减小肿瘤细胞的体积和质量(P<0.05),抑瘤率分别为42.23%、25.10%和9.16%;同时,LBP(20,10mg/kg·d)能明显抑制肝癌组织hTERT蛋白表达(P<0.05),降低端粒酶的活性(P<0.05)。结论 LBP可通过抑制小鼠肝癌组织hTERT蛋白表达、降低端粒酶的活性,从而对小鼠移植性肝癌的生长起到抑制作用。

苦参素对感染性休克大鼠肺组织NF-κB等细胞因子的影响

目的:观察苦参素(oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠肺组织NF-κB等细胞因子的影响。方法:采用大鼠盲肠节扎穿孔法(CLP)复制大鼠感染性休克模型,随机将56只大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP+OMT高、中、低剂量组、阳性对照(CLP+地塞米松)组。采用免疫组化法检测肺组织NF-κB(p65)及IkB-α的活性;放射免疫分析法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的含量改变。结果:OMT能显著抑制肺组织NF-κB(p65)及IkB-α的活性(P<0.05),降低肺组织匀浆中TNF-α及IL-6的含量(P<0.05),并提高动脉血PaO2,SaO2含量,降低PaCO2,HCO3-含量;降低肺组织W/D比值及肺系数(PWI)。结论:OMT能通过抑制诱导NF-κB的激酶(NF-κB-inducing Kinase,NIK)的活化从而抑制细菌、病毒等对NF-κB的激活作用,减少TNF-α,IL-6等促炎因子的表达,进而对感染性休克大鼠肺损伤性病变发挥治疗作用。

氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌线粒体结构和功能的保护作用

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠心肌线粒体结构和功能的保护作用。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠感染性休克模型,随机将56只SD大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP+OMT(52、26、13 mg/kg)组、阳性药物对照(CLP+地塞米松10mg/kg)组。观察OMT对感染性休克大鼠心肌线粒体超微结构改变的影响。采用比色法测定各组大鼠心肌组织琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)活性以及心肌钙含量的改变。结果不同剂量的OMT能明显升高感染性休克大鼠心肌组织中SDH活性(P<0.01)及降低心肌钙含量(P<0.01),改善感染性休克所致的心肌线粒体超微结构损伤,并且该作用在OMT 52、26 mg/kg剂量组与阳性药物对照组的结果相一致。结论 OMT(52、26、13mg/kg)能对抗大鼠感染性休克引起的心肌线粒体结构和功能损伤,其机制与OMT改善感染性休克过程中心肌细胞能量代谢状况、减少心肌细胞内钙超载有关。

显微图像分析法与人工计数法在免疫组化结果判读中的应用

为探讨显微图像分析法与人工计数法在免疫组化结果判读中的优劣,实验组为18例感染性休克大鼠肺组织NF-κB(P65)免疫组化切片,对照组为18例正常大鼠肺组织NF-κB(P65)免疫组化切片,各组均为显色较好且非特异性背景染色控制良好的标本,所有切片分别用Motic Images Advanced 3.2显微图像分析系统和人工计数方法进行分析。结果使用显微图像分析系统判读,实验组肺组织NF-κB(P65)阳性细胞的平均灰度值、阳性细胞百分比与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);人工计数方法判读,实验组肺组织NF-κB(P65)表达与对照组定性比较差异有统计学意义(P<0.05)。显微图像分析方法能对免疫组化结果进行定性、定量分析,同时避免了观察者的主观因素对判读结果的影响,增加试验结果的可信性和说服力。

氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织损伤的保护作用

目的探讨氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠心肌组织损伤的保护作用。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠感染性休克模型,将SD大鼠随机分成7组,每组8只,分别为假手术(CON)组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP+OMT 52、26、13 mg·kg-1三剂量组、阳性对照(CLP+地塞米松10 mg·kg-1)组。观察OMT对感染性休克大鼠心肌组织结构及超微结构改变的影响。采用放射免疫分析法测定血清中肿瘤坏死因子-a(tumour necrosis factor-α,TNF-α)含量,比色法测定各组大鼠血浆乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的活性改变。结果不同剂量的OMT能明显降低感染性休克大鼠血浆中LDH活性(P<0.01)及血清TNF-α的含量(P<0.05或P<0.01),改善感染性休克所致的心肌组织结构及超微结构损伤,并且该作用在OMT 52、26 mg.kg-1剂量组与阳性对照组的结果相一致。结论 OMT(52、26、13 mg·kg-1)能对抗大鼠感染性休克引起的心肌损伤。

氧化苦参碱对脓毒症大鼠心肌组织p38-MAPK/caspase-3信号通路的影响

目的观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对脓毒症大鼠心肌组织p38-MAPK/caspase-3信号通路的影响。方法采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠脓毒症模型,随机将48只SD大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组和CLP+OMT(52、26、13 mg·kg-1)组。采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI);RT-PCR法测定大鼠心肌组织p38-MAPK、caspase-3 mRNA的表达;Western blot法测定心肌组织磷酸化p38-MAPK、caspase-3的蛋白表达。结果 52、26、13 mg·kg-1的OMT可明显降低心肌细胞凋亡指数(P<0.05);下调p38-MAPK和caspase-3 mRNA的表达(P<0.05),降低心肌组织磷酸化p38 MAPK、caspase-3含量(P<0.05)。结论 OMT可以通过抑制p38-MAPK/caspase-3信号通路活化,减轻脓毒症引起的心肌细胞凋亡。

组织块贴壁法原代培养人脐血管平滑肌细胞的改良

目的提高人脐血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)体外培养的成功率。方法以传统的平滑肌细胞贴壁培养法为基础,选择人脐血管为材料,对培养基配置,组织块的大小和接种间距,培养液的pH等多个重要环节进行改进;采用倒置相差显微镜和α-actin免疫组化染色,对VSMCs进行鉴定。结果光镜下见培养细胞呈典型的"峰、谷"样结构特征;α-actin免疫组化染色显示98%的细胞含有肌动蛋白,证实为VSMCs。结论此培养方法能提高人脐血管平滑肌细胞体外培养的成功率,为心血管疾病发病机制的体外研究,提供了一种实用而充足的细胞材料。

苦参素对感染性休克大鼠肺损伤防治作用的实验研究

目的观察苦参素(Oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠肺损伤的防治作用。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠感染性休克模型,将56只大鼠随机分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP+OMT 52、26、13 mg/kg剂量组、阳性对照(CLP+地塞米松)组。通过观察血气、肺组织W/D比值、肺系数及肺含水量、肺病理学检查(大体改变及肺病理组织切片)等指标,对肺损伤进行评估。结果CLP组较假手术组比较PaO2、SaO2及BE值均降低(P<0.01);PaCO2、HCO3、W/D比值、肺系数及肺含水量均升高(P<0.05)。CLP+OMT 522、6、13 mg/kg剂量组及CLP+地塞米松组较CLP组比较PaO2、SaO2及BE值均升高;PaCO2、HCO3、W/D比值、PWI及肺含水量均降低(P<0.01或P<0.05);CLP+OMT 52、26、13 mg/kg剂量组及大鼠双肺肉眼观察与CLP组相比,体积膨大程度有所减轻,淤血较轻,颜色较浅。结论OMT 13、26、52mg/kg对感染性休克大鼠肺损伤性病变有明显的抑制作用。

ESP虚拟病人系统在基础医学实验教学中的应用效果——以预防医学专业失血性休克及其抢救虚拟仿真实验为例

文章首先分析了预防医学专业失血性休克及其抢救虚拟仿真实验的教学目的,其次对ESP虚拟病人系统直行了概述,并阐述了ESP虚拟病人系统在基础医学实验教学中应用的创新性,再次论述了ESP虚拟病人系统在基础医学实验教学中的应用,最后总结了ESP虚拟病人系统在基础医学实验教学中的应用效果。

基于转化医学理念的病理生理学教学改革

文章以宁夏医科大学2015级麻醉医学专业本科生为研究对象,从在理论教学中引入病案式教学法,丰富教学内容;开设专门的病例讨论课,加强基础与临床有机融合;科研辅助教学,培养学生创新思维能力和实践能力;建立形成性评价体系,综合评定学生能力;利用调查问卷,分析转化医学理念的作用五方面论述了基于转化医学理念的病理生理学教学改革。

关于临床前基础医学综合实验课程教学改革成效的思考

为了使学生以更扎实的基础知识及技能、更明确的学习目的进入临床学习,文章以宁夏医科大学基础医学院为例,总结并分析了临床前基础医学综合实验课程在实践教学过程中的经验及现存问题,并提出了应对措施。

地方高校硕士研究生创新能力培养

研究生创新能力的培养是确保研究生教育质量的核心,地方高校在这一过程中扮演重要角色。目前我国高校研究生的招生规模日益扩大,但研究生的创新能力仍有待提高。探讨如何提高地方高校硕士研究生创新能力,是一项重大而紧迫的课题。本文以宁夏医科大学基础医学专业硕士研究生创新能力培养为例,谈一些体会。

病案教学法在病理生理学教学中的实践

目的探讨病案教学法(casebasedstudy,CBS)在病理生理学教学中的应用效果。方法对实施CBS的学生进行问卷调查,评价CBS在病理生理学教学中的满意度及其优缺点。结果发放问卷调查表共计270份,收回有效调查表259份,回收率95.93%。91.5%的学生完全同意或同意此教学法能激发学生学习的热情,对学习内容更感兴趣;92.7%的学生完全同意或同意此教学法能提高学生参与课堂教学的主动性;84.9%的学生完全同意或同意能提高学生的语言表达和交流能力;83.3%的学生同意或完全同意能挖掘学生的潜力,有利于培养临床思维能力;60.6%的学生同意或完全同意有利于提高学生听课效率。结论CBS可激发学生的学习热情,提高他们参与课堂教学的主动性;充分挖掘学生潜能培养他们的临床思维;同时也有利于教师的综合素质提高。

西北地区病理生理学专业硕士研究生培养过程评估指标体系的构建

文章针对西北地区病理生理学专业硕士研究生科研培养全过程进行研究,通过问卷调查,了解西北地区病理生理学学术学位硕士研究生教学管理、论文选题、实验设计、导师指导等现状,并构建由一级指标和二级指标构成的病理生理学专业硕士研究生培养过程评估指标体系,采用德尔菲专家咨询法和层次分析法确定各指标权重,结果表明,在充分考虑病理生理学专业特点的基础上构建的指标体系符合病理生理学专业硕士研究生的培养特点和培养目标的要求。

ERO1α及其 DNA 甲基化在同型半胱氨酸抑制肝细胞增殖中的作用

目的探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1-α,ERO1α)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)抑制肝细胞增殖中的作用。方法以0μmol·L-1Hcy为正常对照组(NC group),以100μmol·L-1Hcy为干预组(Hcy group),干预肝细胞48h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测肝细胞增殖活力的变化;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot分别检测ERO1αmRNA和蛋白表达水平;构建ERO1α真核表达质粒,转染肝细胞后,荧光显微镜下观察转染效率并以qRTPCR及Western blot验证ERO1α是否过表达,后用MTT法检测肝细胞增殖活力的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt MS-PCR)检测ERO1αDNA甲基化水平。结果与正常对照组相比,Hcy干预组肝细胞内ERO1αmRNA及蛋白表达水平降低,且细胞增殖活力减弱(P<0.01)。测序结果证明ERO1α重组质粒构建成功,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白大量表达,qRT-PCR及Western blot验证结果显示ERO1α过表达(P<0.01),而MTT法结果表明ERO1α过表达可缓解Hcy导致的肝细胞增殖抑制(P<0.01)。Hcy刺激后ERO1αDNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Hcy通过下调ERO1α表达抑制肝细胞增殖,而ERO1α启动子区DNA甲基化是其重要的调控机制。