拟穴青蟹抗菌肽SCY2在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

为深入研究拟穴青蟹Scylla paramamosain阴离子抗菌肽SCY2的抗菌活性,将抗菌肽SCY2的成熟肽序列与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-SCY2,用电击法将其转化至毕赤酵母GS115菌株中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得目的蛋白,并进行质谱鉴定和抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-SCY2,用0.5%甲醇诱导表达24 h后,分泌表达上清液中获得了相对分子质量约11 000的稳定表达产物,与预期的抗菌肽SCY2成熟肽的大小相符;纯化后的目的蛋白经质谱鉴定,有6个肽段的氨基酸序列与预期一致;抗菌活性结果表明,抗菌肽SCY2能抑制革兰氏阳性菌生长,对被测的革兰氏阴性菌无抑杀活性(>50μmol/L);抗菌肽SCY2同抗生素进行协同抗菌试验,发现SCY2与四环素协同使用对荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens的抑杀存在协同作用,SCY2与青霉素协同使用对施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri的抑杀具有增强作用。研究表明,较低浓度的抗生素与抗菌肽协同使用可有效地减少抗生素的使用,降低食品中抗生素的残留风险。

杂合抗菌肽Scy-Hep3在毕赤酵母中的分泌表达及其抗菌活性

为获得体外稳定表达的高抗菌活性新型抗菌肽,通过重叠延伸PCR技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin (简记为Scy)和斜带石斑鱼抗菌肽Hepcidin 3 (简记为Hep3)的杂合抗菌肽基因scygonadinhepcidin3 (简记为scy-hep3),将scy-hep3与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-scy-hep3,用电转化法将其转化至毕赤酵母GS115菌中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽Scy-Hep3,并进行抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-scy-hep3,用体积分数为0. 5%的甲醇诱导表达24 h,分泌表达上清液中获得了稳定表达的相对分子质量约24 000的表达产物,与预期杂合抗菌肽Scy-Hep3的大小相符;抗菌活性结果表明,杂合抗菌肽Scy-Hep3具有广谱抗菌活性,对被测的3种革兰氏阳性菌(溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus、谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus)和4种革兰氏阴性菌(施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri、荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和弗氏志贺氏菌Shigella flexneri)具有较强的抗菌活性(最小抑菌浓度MIC<12μmol/L);对比于单一的抗菌肽Scy和Hep3,杂合抗菌肽Scy-Hep3的抗菌活性显著增强。本研究结果将为杂合抗菌肽Scy-Hep3的生产和开发应用提供数据资料。

海洋鱼类和甲壳类抗菌肽的研究进展与应用前景

抗菌肽的发现与研究已有几十年的历史,抗菌肽是一类生物体中普遍存在并具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,被科学家誉为"天然抗生素"。海洋动物抗菌肽是鱼、虾、蟹、贝等海洋动物的非特异性免疫防御系统的重要组成部分,在海洋环境中对于防御外源病原菌的入侵起到重要作用。海洋抗菌肽的研发与应用,不仅具有重要的医学开发价值,也是减少抗生素污染、实现海水健康养殖的重要保障。本文主要以鱼类抗菌肽和甲壳类抗菌肽为例,从抗菌肽的来源与分类、结构特点以及生物学活性等方面,简要概述近年来海洋鱼类和甲壳类抗菌肽的一些研究进展及其开发利用前景。

增加家蚕微粒子病母蛾抽样检查集团蛾数的探讨

在农村原蚕区不断扩大 ,蚕种检验批增多的情况下 ,研究在不影响检种质量的前提下减少检种工作量的抽样检查方法十分必要。提出了在家蚕微粒子病母蛾集团检查中接收概率的近似公式 ,以及增加集团母蛾数 ,减少镜检次数的设想。通过接收概率和平均检查次数的计算、计算机模拟、实际检查操作 ,以及与现行方法的比较 ,证明了接收概率的近似公式的适用性 ,同时也表明集团母蛾数为 6 0蛾的抽样方案与现行集团母蛾数为 30蛾的抽样方案的生产方风险和使用方风险基本相同 ,而平均检查次数大大减少 ,从而证明了其可行性。在检验错误较多情况下 ,这种方法的风险也较大 ,使用时应谨慎。

轮胎模态试验分析的研究

为寻求对轮胎高阶模态参数的提取,对一子午线轮胎分别进行了单、双点激振模态试验分析的研究,并用LMS Cada-X中的FDPI方法及LMS Test.Lab中的PolyMAX方法进行了分析比较。结果表明,FDPI方法只能识别出低频范围的模态参数,而PolyMAX方法对高频段难以识别出的模态参数也可给出较好的结果。对轮胎这种具有很好的对称性的结构,双点激振可给出很好的重根模态。

两个基因座位的遗传平衡原理

由于许多教科书中关于连锁平衡的介绍 ,多是引用结论或是推导不太严谨 ,使学生在学习群体遗传学时对理解连锁平衡的原理感到困难。此文从遗传平衡的基本条件出发 ,通过较严谨的数学推导 ,介绍了两个基因座的连锁平衡条件、平衡过程等原理 。

家蚕微粒子病母蛾检查五次抽样方案研究

为了保证蚕种质量 ,提出了家蚕微粒子病母蛾抽样检查的五次抽样方案。理论计算、计算机模拟和实际检验的结果证明 ,通过适当的设计 ,可以找到与现行二次抽样方案抽样特征曲线相近的五次抽样方案 ,即具有相近的生产方风险和使用方风险 ,而使平均镜检次数明显减少。五次抽样方案的操作步骤相对繁琐 。

从抽样检查原理谈家蚕微粒子病母蛾检查的几个误区

在蚕种生产和家蚕微粒子病母蛾抽样检查过程中 ,部分蚕种生产者和蚕种检验者由于对抽样检查的原理和现行的抽样检查方案不甚理解而擅自调整抽样方案的现象时有发生。为此 ,通过介绍计数抽样检查的接收概率、抽样特征曲线和两类风险 ,对蚕种生产上减少袋蛾数量 ,调整抽样方案和以样本毒率判断蚕种是否合格等错误观点做了分析和讨论 ,指出了这些做法的危险性。

皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究

为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h,分泌表达上清液中得到相对分子质量约为25 000的稳定表达产物,纯化后的蛋白经质谱鉴定为目的蛋白;体外活性测定发现,该蛋白清除羟自由基(·OH)能力强于维生素C,并对H2O2引起的细胞损伤具有一定的保护作用。研究表明,皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化物酶HdhTPX2在毕赤酵母表达系统中得到高效表达,重组表达产物具有抗氧化活性功能。

家蚕微粒子病蛾不同制种日分布状况分析

对 194个原种带毒批微粒子病母蛾在不同制种日之间的分布状况做了统计分析 ,结果表明 :72 4 6 %的带毒批在不同制种日之间微粒子孢子带毒集团检出率未见显著差异 ;2 7 5 4 %带毒批在不同制种日之间微粒子孢子带毒集团检出率有显著差别 ,制种首、末日带毒蛾数的多少没有明显的规律。在家蚕母蛾微粒子病抽样检查时 ,应采取逐日分层抽样方法 ,以提高送检样本对全批毒率的代表性。如果有选择地在某一天袋蛾 ,不仅不能正确反应该批的微毒情况 ,反而可能使检验样本的毒率增高 ,造成合格蚕种的误淘汰 ;也有可能造成检验样本的毒率降低 ,导致不合格蚕种流入市场。

岛津电子天平的计算机控制

利用岛津天平提供的接口控制指令,采用Visual Basic 6.0结合Access 2,000开发设计了岛津天平的计算机控制系统。使用该系统可将操作者从烦琐的天平按键步骤中解放出来,同时将数据直接汇集到计算机,方便日后的数据分析。本文着重从硬件、软件两个方面介绍了实现电子天平计算机控制的原理、方法并简单介绍了程序实现的功能。

税收管理在企业成本控制中的应用探讨

税收管理作为企业财务管理体系中不可或缺的组成部分,其重要性不仅体现在对企业短期经济效益的直接影响上,更在于其对企业长期战略规划及生存能力的深远影响。同样,成本控制作为企业日常运营的核心要素,其管理效率的高低直接关系到企业的盈利能力和市场竞争力。鉴于此,本文旨在深入探讨如何在企业成本控制的实践中有效融入税收管理策略,旨在为企业的税务决策提供实证支持和策略指导,助力企业在复杂多变的经济环境中实现稳健且可持续的发展。

抗菌肽作为饲料添加剂的研究进展

抗菌肽是生物体抵抗外界病原体侵袭而产生的一类小分子活性多肽,是生物体内先天性防御系统的重要组成部分。抗生素污染问题是目前影响我国畜牧与水产养殖业可持续健康发展的重大科技问题,由此引起的养殖产品中违禁抗生素残留成为制约我国出口创汇和食品安全的瓶颈,饲料中大量添加抗生素是导致抗生素超标的主要原因之一。寻找能够替代抗生素的环保型饲料添加剂,研制出无抗生素的环境友好型饲料,是我国畜牧与水产养殖业健康发展的迫切需求。就抗菌肽的来源,不同功能以及作为饲料添加剂在养殖中的应用作一简要综述。。

拟穴青蟹血细胞原代培养及条件优化

本研究通过对拟穴青蟹血细胞原代培养条件的摸索与优化,成功在体外培养了青蟹血细胞。结果表明,pH 4.6的海洋甲壳类血细胞抗凝剂培养青蟹血细胞的形态优于海洋蟹类抗凝剂(ACD);高血清浓度(>15%)培养血细胞形态较差,易出现空泡;添加5%FBS与1.2%NaCl的L15培养基是培养拟穴青蟹血细胞最适培养基,并可在培养的青蟹原代血细胞中检测到稳定的管家基因表达,表明该细胞可用于拟穴青蟹体外功能试验研究。

拟穴青蟹抗菌肽Crustin新变体的表达特性与抗菌功能

Crustins是一类较早发现并广泛分布在甲壳动物中且富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽,能够参与抗菌免疫应答.从拟穴青蟹( Scylla paramamosain )中克隆获得一个 Crustin 基因新变体,命名为 SpCrus1a ,其cDNA序列全长744 bp,开放阅读框编码113个氨基酸,成熟肽分子质量10.03 ku,理论等电点8.30.表达分析结果发现其转录本主要存在于鳃、卵巢、上皮组织中,经脂多糖刺激后 SpCrus1a 表达会上调.体外合成 Sp Crus1a 的第29~47位氨基酸( Sp Crus1a 29-47 )进行抗菌活性实验,发现其对革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性,而对被测的革兰氏阴性菌抗菌活性较弱或无抗菌活性.浓度24 μmol/L的合成肽 Sp Crus1a 29-47 能够在5 min内杀死大多数的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),在120 min内杀死全部的金黄色葡萄球菌.扫描电镜分析发现合成肽 Sp Crus1a 29-47 可造成金黄色葡萄球菌表面结构崎岖不平,高浓度 Sp Crus1a 29-47 会引起细菌大量死亡.上述结果表明 Sp Crus1a是抗菌肽Crustin的新变体.

政府金融支农政策研究

我国政府制定了一系列支农政策,但我国的支农政策多以保障性政策为主,其中,关于金融支农的政策较少。随着我国经济社会的发展和农业供给侧改革的推进,我国的支农政策也在不断推陈出新,侧重点也在不断改变。2014年出台了《国务院关于开展农村承包土地的经营权和农民住房财产权抵押贷款试点的指导意见》,渐渐强化了农民这个主体在支农政策中的作用。这一改变是有着其深刻的现实原因的,不论是农村经济的日渐发展,农民主体作用的加大,还是现实发展的需要,都需要来一场自上而下的政策改革。选取国内外一些地区不同的金融支农政策,通过分析不同的金融支农政策,试着为湖南省衡阳市衡南县各地区正在进行的"五权抵押贷款"政策提供有益借鉴。

舒芬太尼自控镇痛对骨科手术后下肢血栓预防性给药效果的影响及护理体会

目的观察舒芬太尼自控镇痛对骨科手术后下肢血栓预防性给药效果影响并总结相应护理要点。方法选择我院2012年1月到2015年8月收治113例骨科手术患者作为研究对象,分为A组(n=57)与B组(n=56)。A组应用0.5μg/kg舒芬太尼自控镇痛,B组为0.75μg/kg舒芬太尼自控镇痛,比较两组术后不同时间点疼痛、凝血功能(血栓弹力图测定)、不良反应发生率及下肢深静脉血栓形成发生率。结果两组各时间点疼痛VAS评分的差异均P>0.05,提示两组术后镇痛效果接近。麻醉前两组各项指标的差异均P>0.05,血栓弹力图指标:术后2 h、4 h、12 h、24 h,两组R、K具降低、MA、ANG、CI均升高,前后差异均P<0.05;同时A组术后2 h、4 h、12 h、24 h的R、K均高于B组、MA、ANG、CI低于B组(P<0.05)。A组下肢深静脉血栓形成发生率为12.3%(7/57),低于对照组28.6%(16/56)(P<0.05)。结论骨科手术患者应用0.5μg/kg舒芬太尼自控镇痛不仅可确保镇痛效果,同时不会对下肢血栓预防性给药造成明显影响,在有效护理措施配合下可取得较好下肢深静脉血栓预防效果。

海水青鳉雌激素受体基因的克隆、组织表达特性及环境雌激素EE2对其表达的影响

为了获得海水青鳉Oryzias melastigma雌激素受体的基因信息及其表达特性,采用RACE-PCR技术和实时荧光定量PCR方法,进行了雌激素受体基因的克隆、表达特性分析及其在17α-炔雌醇(EE2)暴露下的基因响应研究。结果表明:海水青鳉雌激素受体基因与其他脊椎动物雌激素受体基因同源性较高,特别是DNA结合结构域(DBD)在进化上高度保守,配体结合结构域(LBD)次之;OM-ERα/β1/β2在所检测的10种组织中均有表达,其中在青鳉肝脏、性腺、脾脏和肠中表达量较高;OM-ERα在肝脏中的表达和OM-ERβ1/β2在性腺中的表达,雌雄间存在显著性差异(P<0.05);在EE2浓度为5、50、500ng/L的水体中暴露96 h后,海水青鳉仔鱼中的分子标志物卵黄蛋白原基因(vtg1)被显著诱导(P<0.05),且呈浓度依赖关系;中浓度(50 ng/L)的EE2诱导仔鱼OM-ERβ1基因表达,OM-ERβ2对EE2暴露呈现低浓度诱导、高浓度抑制的趋势;攻毒试验结果表明,OM-ERα和vtg1之间存在一种正相关关系,暗示EE2可能主要通过ERα调控vtg1基因的表达;EE2攻毒下,β亚型存在一种倒U型的剂量-反应关系。研究表明:克隆获得的海水青鳉3个雌激素受体亚型基因OM-ERα/β1/β2,为后续开展海水模式鱼类雌激素受体相关研究提供了基础信息;OM-ERα/β1/β2的组织表达特性及EE2对仔鱼OM-ERα/β1/β2表达的不同调控,显示出海水青鳉3种ER亚型基因存在着不同的生理功能,且其对环境污染物的应答模式不同。

口服投喂抗菌肽Scygonadin对黑鲷免疫及抗氧化指标的影响

本实验以黑鲷(Sparusmacrocephlus)为研究对象,利用抗菌肽基因工程表达产物Scygonadin进行口服试验,探讨抗菌肽口服后是否对鱼体内免疫学指标或者抗氧化反应指标有影响。黑鲷空腹三天后,口服投喂不同浓度(0.2、0.4、0.8 mg/m L)的Scygonadin各100μl,以PBS为对照组,采集不同时间点(6、12、24、48、72 h)血清及肝、肠组织样品,测定超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)等抗氧化指标。实验结果表明黑鲷口服投喂基因工程表达产物Scygonadin对其免疫及抗氧化指标无显著性影响,表明口服抗菌肽Scygonadin不会影响鱼类的正常免疫功能,从而为抗菌肽在水产养殖业的应用提供了科学依据。

农杆菌介导细基江蓠繁枝变种转化体系的建立

为建立细基江蓠繁枝变种遗传转化体系,以细基江蓠繁枝变种类愈伤组织为受体材料,采用农杆菌介导的方法,建立一种细基江蓠繁枝变种遗传转化方法.研究结果发现,往细基江蓠繁枝变种培养液中添加20μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯、2.0 mg·L^(-1)2,4二氯苯氧乙酸、0.5 mg·L^(-1)激动素的植物激素组合,其类愈伤组织诱导效果最好,诱导率高达56.98%.类愈伤组织转化子的GFP绿色荧光检测和PCR鉴定结果均为阳性.这说明细基江蓠繁枝变种外植体的类愈伤组织可作为受体材料,采用农杆菌介导方法可实现外源gfp基因在类愈伤组织中的表达,为江蓠品种的遗传改良提供一个强有力的工具.