应用反义寡核苷酸沉默PDGFR-α表达对RPE细胞增生和凋亡的影响

背景视网膜色素上皮（RPE）细胞能分泌血小板源性生长因子（PDGF），又具有PDGF受体（PDGFR），已有研究表明PDGF对增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的形成起着关键性作用。目的应用反义寡核苷酸（ASODN）技术抑制血小板源性生长因子受体-α（PDGFR-α）基因的表达，观察其对RPE细胞增生和凋亡的影响。方法将人RPE细胞株在含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行培养，取对数生长期细胞调节细胞密度为5×10^5个／孔，接种于96孔板，待细胞生长至80％～90％融合时进行转染。空白对照组不加PDGFR—dASODN及阳离子脂质体Lipofectamine 2000，1．0μmol／LLipo—ASODN组、2．0μmol／LLipo—ASODN组使用阳离子脂质体Lipofectamine2000将靶向PDGFR—a基因的ASODN转染至RPE细胞株。细胞转染48h后，MTT法检测各组细胞的吸光度（4）值并以A490表示，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测PDGFR—dmRNA在RPE细胞中表达的变化；hoechst33258荧光染色观察培养细胞的凋亡情况；流式细胞仪检测RPE细胞的细胞周期和凋亡率。结果空白对照组、1．0μmol／LLipo—ASODN组及2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞的A490值分别为1．45±0．12、1．07±0．06、0．65±0．05，差异有统计学意义（F=97．72，P=0．00），1．0μmol／LLipo—ASODN组和2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞A490值明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（P=0．00、0．00）；2．0μmol／L Lipo—ASODN组RPE细胞A490值明显低于1．0μmol／LLipo—ASODN组，差异有统计学意义（P=0．00）。Hoechst33258荧光染色显示，转染PDGFR—αASODN后RPE细胞凋亡数量多于空白对照组。流式细胞仪检测表明，转染PDGFR—αASODN后RPE细胞阻滞于G0／G1期（F=206．70。P=0．00），1．0μmol／LLipo—ASODN组和2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞凋亡率均明显高于空白对照组（37．8±1．3vs10．5±0．1，61．2±1．9∥s10．5±0．1）（F=1808．90，P=0．00）。PDGFR—α在RPE细胞中的表达随PDGFR—dASODN浓度的升高有降低的趋势。结论利用ASODN技术沉默PDGFR—α基因表达可以显著抑制PVR过程中RPE细胞的增生，并能诱导其凋亡，不同浓度PDGFR—OLASODN转染后能下调PDGFR—dmRNA的表达，PDGFR-α基因的ASODN靶向技术为PVR的基因治疗提供了实验依据。

非球面切削准分子激光原位角膜磨镶术后泪膜改变的研究

目的:观察非球面切削准分子激光原位角膜磨镶术(1aser in situ keratomileusis,LASIK)后泪液分泌、泪膜的变化,探讨其与干眼的关系。方法:对80名近视眼患者实施双眼LASIK非球面切削手术,分别用SchirmerⅠ试验(基础分泌试验)和荧光素染色测定患者术前、术后1周、1个月、3个月、6个月的泪液分泌值和泪膜破裂时间(break up time,BUT)。结果:(1)BUT值(单位:秒):术前为20.07±5.90,术后1周、1个月、3个月、6个月分别为8.47±2.64、10.51±2.63、13.29±2.74、19.85±5.75,术后1周、1个月、3个月分别与术前的BUT值比较,差异均有显著性意义(P<0.01),术后6个月BUT值与术前比较无显著性差异(P>0.05)。Schirmer值(单位:mm):术前为16.24±6.68,术后1周、1个月、3个月、6个月分别为12.86±6.14、14.65±9.92、15.38±6.27、16.18±5.77,术后1周、1个月和3个月Schirmer值分别与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05),而术后6个月Schirmer值与术前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LASIK非球面切削术后3个月内泪膜稳定性下降及泪液分泌减少,术后6个月泪膜稳定性和泪液分泌恢复术前水平。

光学相干断层扫描在测量8~12岁国人正常眼视网膜神经纤维层厚度中的应用

目的探讨视盘周围视网膜神经纤维层（retinal nerve fiberlayer，RNFL）厚度各相关参数与性别、年龄、眼别、民族的关系。方法应用光学相干断层扫描对8～12岁正常国人214例359眼正常眼进行研究，采用RNFL厚度分析程序，测量以视盘为中心直径3．4mm的全周以及不同象限和不同钟点位的RNFL厚度。所得资料应用SPSS19．0软件进行统计学处理，分析性别、年龄、眼别、民族等多个因素对RNFL厚度的影响。结果8、9、10、11、12岁各年龄段受检者的全周RNFL厚度分别为（108．32±9．42）μm、（108．52±8．78）μm、（112．36±11．14）μm、（110．27±10．21）μm、（113．11±8．81）μm，8～12岁男性受检者的全周RNFL厚度为（110．15±9．34）μm，女性为（109．97±10．01）trm；汉族受检者的全周RNFL厚度为（111．34±9．81）μm，非汉族受检者的全周RNFL厚度为（109．78±11．03）μm。右眼全周RNFL厚度为（110．41±9．89）μm，左眼全周RNFL厚度为（109．63±9．92）μm。8～12岁各年龄组间比较，以及男、女比较，左、右眼比较、汉族与非汉族比较全周RNFL厚度差异无统计学意义（均为P〉0．05）。结论本研究发现8—12岁正常我国儿童性别、年龄、眼别、民族对该年龄段RNFL厚度无明显影响。检查结果与成人测量值有明显差异，涉及RNFL改变的疾病诊断和随诊时不应使用成人标准。

PDGF-α受体反义寡核苷酸对增殖性玻璃体视网膜病变的影响

目的:研究PDGF-α受体反义寡核苷酸对实验性增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的防治作用。方法:选择PDGFR-αASODN/lip2000比值1∶1、1∶2.5、1∶5制备复合物转染至HRPE细胞中24 h后注射入家兔玻璃体腔。PVR模型健康成年有色家兔24只随机分为人视网膜色素上皮(HRPE)细胞稀释液组(A组)、1.0与2.0μmol/LPDGFR-αASODN脂质体转染的RPE细胞稀释液组(B组和C组),每组8只眼。间接眼底镜观察PVR程度;组织病理学观察眼底改变;免疫组织化学染色观察PDGFA浓度。结果:当PDGFR-αASODN/lip2000比值为1∶2.5时,HRPE细胞最佳转染效率。B组和C组PVR程度、组织病理学改变、免疫组织化学染色PDGFA浓度低于A组,C组比B组更低。结论:PDGF-α受体反义寡核苷酸能够抑制实验性增殖性玻璃体视网膜病变的发生发展。

PDGFR-αASODN玻璃体内注射对视网膜的毒性作用

目的:探讨PDGFR-αASODN对视网膜的毒性作用。方法:选择健康成年有色家兔24只,随机分为4组,每组6只;4组兔子3组右眼玻璃体分别注射0.1 m L不同浓度的PDGFR-αASODN/lipofectamine TM 2000溶液,另外1组注射0.1 m L平衡盐溶液作为对照组;4组兔子的左眼不注药。于注药后第1、7、14及28天,对4组兔子的右眼行裂隙灯、间接检眼镜、视网膜电图(ERG)检查;第28天,取4组兔子的眼球,对视网膜组织进行光镜HE、免疫组化及透射电镜的观察。结果:裂隙灯、间接检眼镜检查,各组在各个检查时间点均未发现异常。ERG b波振幅,实验组与对照组比较差异无显著性。注药后第28天,光镜下HE和免疫组化检查,各组视网膜组织均未发现任何病理变化。注药后第28天电镜检查,D组视网膜感光细胞:部分膜盘间隙扩张,部分膜盘融合,少数细胞核周围间隙略增大,其细胞核形态略不规则。结论:玻璃体内注射0.1 m L PDGFR-αASODN/lip2000时,PDGFR-αASODN的浓度≤1.5μmol/L是较为安全的。

老年性白内障患者超声乳化术中血压、心率变化的观察

目的通过对正常血压和合并高血压的两组老年性白内障患者超声乳化术中血压及心率变化曲线的分析,评价该手术对心血管系统的影响。方法对伴有高血压的老年性白内障患者46例、正常血压白内障患者44例在心电监护仪监测下进行超声乳化白内障摘除联合人工晶状体植入术,观察术前及术中不同时间血压及心率的变化。结果两组患者在进入手术室后血压与病区血压比较均有显著差异,高血压组在手术开始和术中10min血压及心率的变化曲线呈现明显升高然后回落的变化。结论手术相关刺激引起的应激反应在高血压组可以出现神经性血压升高,高血压患者手术中实施心电监护是十分必要的。

76例年龄相关性黄斑变性眼底荧光血管造影分析

目的探讨眼底荧光血管造影(FFA)在年龄相关性黄斑变性(AMD)患者中的临床应用。方法用日本Top-con TRC-50IA眼底照相机对76例115眼进行FFA检查,并结合常规眼科检查进行分析。结果76例115眼中萎缩型70眼,占60.87%,渗出型45眼,占39.13%。结论FFA可显示脉络膜新生血管(CNV)并可指导临床治疗,对于隐匿型CNV需行吲哚青绿血管造影(ICGA),以发现FFA未能显示的典型CNV。渗出型是AMD致盲的主要原因。

眼科学教学方法改革的探索与实践

眼科学在临床教学中有其一定的特殊性,针对不同教学阶段,进行教学方法改革探索和实践,取得明显效果。理论课采用多媒体教学方法极大的丰富教学内容,课件制作将教学内容由浅入深、归纳总结、直观明了等形式激发学生的学习兴趣。临床见习中强调把理论知识应用实践中,增强学生的感性认识和动手能力。临床实习采用后期分流,把职业道德教育、素质教育融入眼科学教学中,培养有专业特长的毕业生。对提高教学质量,培养优质医学人才起到积极作用。

后囊膜连续环形撕囊术联合前段玻璃体切除术治疗儿童先天性白内障

目的：探讨和评价后囊膜连续环形撕囊术联合前段玻璃体切除术治疗儿童先天性白内障,预防后囊膜混浊的临床疗效.方法：30例（56眼）先天性白内障的患儿中采用白内障超声乳化吸出及行后囊膜连续环形撕囊术的14例26眼（PCCC组）,白内障超声乳化吸出、后囊膜连续环形撕囊联合前段玻璃体切除术的16 例30眼（玻切组）.≥2岁的患儿施行一期人工晶状体植入.术后随访12～36个月,观察术后视力、并发症及眼部情况.结果：治疗后两组患儿视力有改善征象,视力提高.PCCC组与玻切组后发性白内障的发生率分别为46.15%（12/26）和 16.67%（5/30）,两组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：后囊膜连续环形撕囊术联合前段玻璃体切除术较后囊膜连续环形撕囊术能更有效减少儿童先天性白内障术后后发性白内障的发生.

LASIK手术并发症的临床观察分析

目的观察分析准分子激光原位角膜磨镶术的术中、术后并发症及其原因和预防处理措施。方法对385例(761眼)LASIK术中术后发生的并发症及处理进行记录、观察,随访时间6个月。结果术中并发症有游离角膜瓣、角膜瓣边缘出血、角膜瓣偏中心、角膜瓣下异物残留;术后并发症为角膜瓣皱褶、弥漫性层间角膜炎、屈光过矫、欠矫、屈光回退、眩光和干眼症。结论LASIK手术治疗近视是安全、有效的方法,对其并发症应予以重视。提高手术技巧、完善手术方案、熟练掌握机器性能和及时处理各种并发症有助于提高手术的效果和安全性。

超声乳化术联合人工晶体植入的临床分析

目的 :为探讨白内障超声乳化术的治疗效果和手术技巧 ,对小切口白内障超声乳化术联合后房型人工晶体植入的手术结果进行回顾性总结。方法 :随机选择白内障 60例 (67眼 )进行上述手术 ,对术后视力、角膜曲率、常见手术并发症等进行分析。结果 :术后 1周裸眼视力≥ 0 .5者 54眼 (80 .6% ) ,术后 2月裸眼视力≥ 0 .5者 60眼 (89.6% )。角膜曲率测量表明术后角膜屈光力与术前比较 ,差异无显著性 (t=1 .994,P>0 .0 5)。后囊膜破裂 7眼 (1 0 .4% ) ,虹膜损伤6眼 (9% ) ,角膜内皮水肿 1 9眼 (2 8.4% )。结论 :合适的手术切口、充分扩瞳及水分离、保持后囊膜完整、低能量超声、相对高负压是减少手术损伤和术后角膜散光 ,避免并发症 。

蛇毒降纤酶治疗外伤性玻璃体积血的实验研究

目的观察蛇毒降纤酶对实验性外伤性玻璃体积血的治疗效果。方法用20只新西兰大白兔右眼建立外伤性玻璃体积血的动物模型,随机分为生理盐水组和蛇毒降纤酶组,直接检眼镜分别观察两组玻璃体积血指数和增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)程度;酶联免疫吸附法(enzyme-liked immunosorbent assay,ELISA)检测玻璃体液中各细胞因子浓度。结果蛇毒降纤酶组玻璃体积血指数、PVR程度、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白9(matrix metallopro-teinase-9,MMP-9)浓度低于生理盐水组,两组分别比较差异均有统计学意义(P<0.05);白介素-1β、血小板源性生长因子、转化生长因子β1、表皮生长因子浓度与生理盐水组比较无统计学意义。结论蛇毒降纤酶能促进玻璃体积血的吸收、减轻外伤性PVR程度;并能下调玻璃体腔MMP-9、Ⅲ型胶原的浓度。

个体化切削准分子激光原位角膜磨镶术后泪膜改变的研究

目的:观察最优化屈光性角膜切削术(optimized refractive keratectomy,ORK)后泪液分泌、泪膜稳定性的改变,分析其与干眼的关系。方法:随机选择80名近视眼患者实施双眼ORK手术,分别用荧光素法和schirmerⅠ试验(基础分泌试验)测定患者术前、术后1周、1个月、3个月、6个月的泪膜破裂时间(break up time,BUT)和泪液分泌值。结果:①schirmer值(单位:mm):术前为18.22±5.29,术后1周、1个月、3个月、6个月分别为8.06±2.81,10.30±3.22,13.24±3.72,16.80±4.48;术后1周、1个月、3个月和6个月Schirmer值分别与术前比较,差异有显著性意义(P<0.01)。②BUT值(单位:s):术前为19.68±5.77,术后1周、1个月、3个月、6个月分别为9.69±2.91,12.11±3.32,14.99±4.15,18.83±5.05;术后1周、1个月、3个月和6个月分别与术前的BUT值比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:ORK术后6个月内,泪膜稳定性下降及泪液分泌减少,但有逐渐恢复的趋势。

后房型人工晶体植入术与角膜散光

本文观察人工晶体植入术31例(32眼)术前至术后3个月的角膜曲率半径及屈光状态,结果表明,散光程度均较术前有增加趋势,散光度随时间推移而减少,3个月后趋于稳定。角膜散光轴位随术后时间延长,循规性散光渐减少,逆规性散光渐增。平均角膜曲率半径、屈折力术前、术后结果相差甚微。文章讨论了影响术后角膜散光的有关因素。

角膜波前引导准分子激光原位角膜磨镶术治疗近视眼的疗效分析

目的通过与Lasic手术的比较,观察角膜波前像差引导的最优化切削术(ORK)治疗近视眼的手术疗效。方法施行ORK手术的10例199眼为试验组,同期施行Lasik手术的74例144眼为对照组,术后随访观察3个月,将两组的结果进行比较。结果两组术后3个月屈光度数、术后视力及最佳矫正视力无明显差异;屈光度数在±1.00D以内的试验组175眼(87.94%),对照组110眼(76.39%),两组比较差异有统计学意义(P<0.01);主观评价视觉质量表示满意的试验组192眼(96.48%),对照组130眼(90.27%),两组比较差异有意义(P<0.05)。结论ORK手术与Lasik手术一样有着良好的预测性、稳定性及安全性,在准确性和主观评价视觉质量方面优于Lasik手术。

眼弓形体病

眼弓形体病彭燕一综述杨希谋审校（广西桂林医学院附院眼科）弓形体病是一种人畜共患的寄生虫病。病原体系弓形虫。流行区域遍布世界各地，很多哺乳动物及鸟类亦受感染。Ｊａｎｋｕ于１９２３年首先报告了第１例人类弓形体病。于恩庶等于１９５５年在福建首次从家兔和猫体...

前节玻璃体切除联合人工晶体睫状沟悬吊缝合术治疗晶状体脱位

目的:评价前节玻璃体切除联合人工晶体睫状沟悬吊缝合术在晶状体脱位手术治疗中的临床效果。方法:回顾性分析我院采用前节玻璃体切除联合人工晶体睫状沟悬吊缝合术治疗23例26眼晶状体脱位的临床资料。结果:术后92.31%的患眼视力有不同程度提高,无严重并发症发生。结论:前节玻璃体切除联合人工晶体睫状沟悬吊缝合术治疗晶状体脱位效果好。

PDGF-α受体反义寡核苷酸对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,HRPE)细胞增殖和凋亡的作用。方法:使用阳离子脂质体lipofectamineTM2000将靶向PDGFR-α基因的ASODN转染至细胞株HRPE细胞,MTT法检测对HRPE细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞;流式细胞仪检测HRPE细胞的周期和凋亡率。结果:PDGFR-αASODN转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:沉默PDGFR-α基因表达可显著抑制HRPE细胞的增殖,并能诱导其凋亡。