白血病患者Prame基因的表达及其与WT1基因比较的临床意义

目的:探讨Prame(黑色素瘤特异性抗原)在白血病患者中的表达及其临床意义。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定58例白血病患者Prame mRNA的表达,并与WT1mRNA的表达相比较。结果:急性髓细胞性白血病(AML)患者Prame阳性表达率为52.2％,急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者Prame阳性表达率为66.7％,慢性粒细胞性白血病(CML)急性变患者Prame阳性表达率为55.6％;慢性及加速期CML患者11例、10名正常人外周血及10例非血液病患者骨髓细胞均未见Prame mRNA表达,其中1例AML和5例ALL患者Prame阳性而WT1阴性。对2例Prame阳性和4例Prame、WT1均阳性的患者短期随访发现所有患者化疗后Prame均有不同程度的下降。1例复发患者Prame表达再次升高且早于WT11个月,余3例白血病患者Prame和WT1表达的波动呈正比。结论:免疫抗原Prame是白血病的一个重要标记基因,与病程进展密切相关,有望成为白血病微小残留病灶检测和进行白血病免疫治疗的靶基因。

153例多发性骨髓瘤的细胞遗传学分析

目的评价细胞遗传学分析在多发性骨髓瘤(MM)中的应用价值。方法采用核型分析和间期荧光原位杂交(iFISH)对153例MM的细胞遗传学结果进行回顾性分析。结果MM患者染色体异常主要集中在13、9、14、1、8号染色体上;核型分析联合iFISH染色体异常检出率可达79.1%,多数为复杂的染色体异常,其中9例染色体核型异常,但iFISH阴性;在这9例中,有7例患者的无疾病进展时间(PFS)<3年,其中2例患者死于感染和心力衰竭。结论常规染色体核型分析能提供完整的细胞遗传学资料,虽然检出率偏低,但是在科学研究和临床应用中仍不可或缺。

白花丹醌对白血病细胞DNA甲基转移酶的作用

目的探讨中草药提取物白花丹醌对人白血病细胞系HL-60甲基化的影响机制。方法MTS法确定不影响细胞生长的白花丹醌研究浓度;白花丹醌研究浓度作用于HL-60细胞不同时间,ELISA法测定其甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNMT)活性;实时荧光定量PCR评估DNMT酶类基因mRNA表达水平。结果选定白花丹醌0.8μmol/L作为研究浓度,作用18h,HL-60细胞甲基化水平显著下降[(1.63±0.27)ng比(2.42±0.41)ng,P<0.05],这种去甲基化作用能被活性氧(ROS)阻滞剂所逆转,使得预处理组与对照组甲基化水平无显著差异[(2.11±0.16)ng比(2.27±0.21)ng,P>0.05];白花丹醌作用12h后,与对照组比较出现DNMT总体活性的下降[(0.91±0.09)OD·h^(-1)·μg^(-1)比(1.24±0.19)OD·h^(-1)·μg^(-1),P<0.05],作用24h后活性下降更明显[(0.69±0.08)OD·h^(-1)·μg^(-1)比(1.24±0.19)OD·h^(-1)·μg^(-1),P<0.01];白花丹醌对DNMT1、DNMT3b基因的表达具有明显抑制作用(P<0.05),对DNMT3a基因的表达作用不明显。结论低浓度白花丹醌以ROS为重要介质,能够诱导白血病细胞去甲基化,这种作用与抑制DNMT活性,抑制DNMT1和DNMT3b基因的表达有关。

白花丹醌诱导人白血病细胞-NB4凋亡的实验研究

目的:探讨白花丹醌诱导人白血病细胞-NB4的凋亡途径。方法:取白花丹醌终浓度10μmol/L作用于人白血病细胞-NB4不同时间,比色法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3,-8,-9(caspase-3,-8,-9)的活性;westenblot显示死亡受体凋亡途径中重要蛋白:caspase-8和Bid的裂解;流式分析caspase酶抑制剂作用下白花丹醌诱导NB4细胞凋亡的改变。结果:白花丹醌通过激活包括caspase-8和Bid在内的caspase依赖途径诱导NB4细胞凋亡。结论:caspase-8是白花丹醌抗白血病作用的重要环节。死亡受体途径可能在白花丹醌诱导白血病细胞凋亡过程中具有重要作用。

白花丹醌和亚砷酸对白血病荷瘤小鼠作用的比较。

目的观察白花丹醌对白血病异种移植瘤的体内作用。方法用NB4细胞构建白血病小鼠模型,白花丹醌组(2mg/(kg.d)),亚砷酸组(4mg/(kg.d)),分别腹腔给药15d,计算抑瘤率,凋亡指数(AI)并进行病理组织学检查。结果白花丹醌组抑瘤率为40.49%(P<0.01),AI为(8.52±1.49)%(P<0.01),未出现明显的病理组织损伤。亚砷酸组则无明显的抑瘤作用,凋亡作用不明显(P>0.05),部分伴有心肌组织的损伤。结论 :白花丹醌具有抑制肿瘤生长,诱导凋亡的作用,可能成为白血病治疗的新选择。

白花丹醌对白血病细胞去甲基化作用的实验研究及生物信息学分析

目的探讨中草药提取物白花丹醌对人白血病细胞系HL-60细胞去甲基化的影响,并定位主要的作用途径和关键基因。方法白花丹醌0.8μmol/L作用于HL-60细胞不同时间,酶联免疫吸附(ELISA法)测定其甲基化水平;蛋白免疫印迹法测定DNA甲基转移酶:DNA甲基转移酶1(DNMT1),DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)相对于内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白(GAPDH)的表达水平;应用Infinium 850K甲基化芯片筛选去甲基化作用的信号转导途径和关键基因。结果和对照组比较,白花丹醌作用18 h后HL-60细胞甲基化水平显著下降[(1.56±0.24)ng比(2.39±0.4)ng,(P<0.05)];经白花丹醌作用后DNMT1蛋白/GAPDH,DNMT3b蛋白/GAPDH表达下调[(0.41±0.06)比(0.79±0.17),(0.43±0.09)比(0.74±0.16),均P<0.05],而DNMT3a相对蛋白表达水平在研究时间内差异无统计学意义。甲基化芯片分析显示NUP93、CACNB2和ATP6V1B1等去甲基化明显的基因参与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和癌症中的微小核糖核酸(MicroRNAs)信号通路,是基因调控网络的中心环节。结论低浓度白花丹醌能够诱导白血病细胞去甲基化,这种作用与抑制DNMT1和DNMT3b蛋白的表达有关,甲基化芯片技术对作用途径和关键环节进行定位,为下一步的研究确定了方向。

白花丹醌对白血病小鼠生存期的影响

目的探讨白花丹醌对白血病小鼠生存期的影响,为临床应用提供实验依据。方法采用急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、尾静脉接种非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠建立急性白血病模型。腹腔给予白花丹醌2 mg/kg/d共7 d,观察小鼠的生存期。结果治疗组小鼠的生存期为(33.96±5.18)d,比对照组(27.55±4.01)d明显延长,差异有统计学意义(<0.01);白花丹醌治疗过程中无明显的毒副作用。结论白花丹醌能在NOD/SCID小鼠体内起到抗白血病,延长生存期的作用。

PRAME基因与肿瘤的研究

1 PRAME在各种肿瘤中的表达 1997年Ikeda等[1]首次在体外对1例黑色素瘤复发患者的自身淋巴细胞进行刺激,制得细胞毒性T细胞克隆17（CTL17）,从而引发特异性的免疫反应,由此对能被CTL溶解的由HLA-A24呈递并在黑色素瘤细胞表达的抗原命名为LB33-E,而将编码这一抗原的基因命名为黑色素瘤特异性抗原（preferentially expressed antigen of melanoma,PRAME）.PRAME基因位于22q11,编码509个氨基酸的蛋白质,无启动序列.在88%初发和95%转移黑色素瘤中都有表达[1],正常皮肤组织和良性黑素细胞则不表达,提示PRAME可能是黑素细胞恶性转变中发生[2].

急性髓细胞白血病微量残留病(MRD)的监测方法和指标的研究

白血病微量残留病 (MRD)被认为是白血病复发的主要根源 ,近年来 ,PCR ,FISH ,流式细胞技术的不断发展 ,及对MRD新标记物的探索 。

多发性骨髓瘤患者血清miRNA-181a水平与病理特征的关系

目的探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清miRNA-181a(miR-181a)水平与病理特征的关系。方法选取2013年4月~2015年4月我院收治的MM患者50例作为MM组,收集患者的病理特征资料,包括性别、年龄、体质指数、首诊症状、骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)分级、国际分期系统(international staging system,ISS)分期、体力状况评分[采用美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)评分标准]、分型以及血清miRNA-181a水平。选取同期于我院体检的体检者50例作为体检组,比较两组血清miRNA-181a水平,采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析血清miRNA-181a对MM的预测价值。利用Spearman检验分析血清miRNA-181a与病理特征的关系。结果 MM组血清miR-181a水平高于体检组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-181a预测MM的曲线下面积为0.668(标准误=0.053,P=0.004,95%CI=0.563~0.772)。血清miRNA-181a低表达者的骨病A级、ISSⅠ期占比分别为58.33%、58.33%,高于miRNA-181a高表达者的10.53%、7.89%,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman检验提示血清miRNA-181a表达水平与MM患者的骨病MBD分级、ISS分期呈正相关(P<0.05)。结论与健康体检者相比,MM患者的血清miRNA-181a水平明显增高,且与骨病MBD分级、ISS分期有相关性。

SMYD3基因在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的:研究SMYD3基因在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的表达情况,探讨其临床意义。方法:收集2012年9月-2015年7月在本院就诊的初发AML骨髓样本87例,非肿瘤患者骨髓20例为对照样本,实时荧光定量PCR检测SMYD3基因表达水平,统计分析其与临床特征的关系。结果:初发AML的SMYD3基因表达水平明显高于对照组(P<0.001);将AML分为M_(3)组与非M_(3)组,M_(3)组与非M_(3)组的SMYD3基因表达水平均明显高于对照组(P<0.001);非M_(3)组的SMYD3基因表达水平高于M_(3)组(P<0.05),年龄大于M_(3)组和对照组(P<0.05)。结论:SMYD3在初发AML中呈现高表达,是一种AML相关基因,非M_(3)比M_(3)有更高的SMYD3表达水平。

MSI2通过下调circRNA＿001214促进急性髓系白血病细胞HL60生长

Musashi-2(MSI2)是一种RNA结合蛋白质,对维持造血干细胞功能具有重要作用。研究表明,MSI2高表达能促进急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia,AML)进展,但其作用机制尚不明确。本研究稳定沉默HL60细胞MSI2后,第1、2、3、4 d对照组的相对细胞生长率分别为1.931±0.027、3.070±0.073、4.017±0.092和4.215±0.246;敲减组分别为1.927±0.035、2.564±0.090、2.825±0.097和3.223±0.182,两组相比具有统计学差异,P<0.001;细胞凋亡明显增加(7.967%±0.698%vs 3.400%±0.322%.,P<0.01);G0/G1期细胞比例明显增高(67.430%±4.390%vs.50.360%±2.160%,P<0.01);NUMB蛋白明显上调,LEF1明显下降。环状RNA(circular RNA,circRNA)芯片筛选和荧光定量PCR验证显示,MSI2沉默组circRNA001214表达水平是对照组3.48倍。这一结果也在NALM6细胞得到证实。进一步用生物信息学分析,显示circRNA001214最可能与miR-1273a、miR-1273e和miR-5095结合,进而影响参与细胞凋亡相关基因(CYCS、AKT1、BAX、TNFRSF10A、TNFRSF10D)、Wnt信号基因(WNT4、WNT2B、WNT7B、DKK2、SFRP1、CSNKE1和LEF1)以及参与细胞代谢相关基因(RPE,PGAM4,PGAM1,TAT,CBS、RPE、SUCLG2、PGAM4、PGAM1和IDNK)。总而言之,MSI2可能通过干扰circRNA001214生成,减少靶miRNA对凋亡、Wnt信号及细胞代谢相关基因表达的影响,促进细胞生长。

宁波市1162人的血压调查报告

目的 了解宁波市城乡高血压患病情况及影响因素。方法 随机抽取城市、农村各 2个点进行血压、血糖、血脂、体重指数及病史等项目检测。结果 宁波市高血压总患病粗率为 34 77% ,标化患病率为19 98% (按照 1982年全国人口普查统计数据标化 ,下同 )。城市高血压患病率 35 4 4 % ,标化患病率为18 0 5 % ,农村高血压患病率为 34 12 % ,标化患病率为 2 1 4 9% ;6 0岁以上老年人高血压患病率为 6 2 72 % ,标化患病率为 6 0 17% ,单纯收缩期高血压占老年患病人数的 5 1 4 2 % ;高血压知晓率 5 0 0 % ,治疗率 4 3 1% ,控制率 8 9% ;体重指数≥ 2 4 ;高血压患病率明显增高 ;高血压患者中 12 92 %血糖异常 ,5 3 2 3%血脂异常 ,7 4 9%尿酸异常。结论 宁波市城乡高血压患病率呈快速增长趋势 ,与其生活方式的改变、体重超重、饮酒、摄钠过多及家族史等因素有关。高血压知晓率、治疗率、控制率不理想 ,尤其是农村 ,必须尽快采取干预措施。

COVID-19疫情常态化防控时期儿童发热门诊的设置与实践

目的:探讨COVID⁃19疫情常态化防控时期开设儿童发热门诊的价值和意义。方法:因发热和/或呼吸道症状就诊的学生急剧增加,我院于5月19日开设儿童发热门诊,将患者分为:5月19日以前组和5月19日以后组。2020年3月30日至5月31日期间,共1703例患者纳入本研究;5月19日以前组449例,5月19日以后组1254例。结果:5月19日以前组和5月19日以后组的人均就诊费用为747.7±298.8元和355.6±294.2元(P<0.001)。随着低年级学生和幼儿园的开学,因发热和/或呼吸道症状就诊的学生人数呈暴增趋势,且年龄呈下降趋势。结论:开设儿童发热门诊不但可以为学生群体提供快捷、高效的就医途径,还可以针对学生群体的特殊性,给予个性化的筛查和诊疗,降低医疗费用。

二次自体造血干细胞移植治疗高危多发性骨髓瘤的疗效观察

目的探讨二次自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation,ASCT)治疗高危多发性骨髓瘤(high risk multiple myeloma,HRMM)的疗效。方法回顾性分析2017年1月至2021年12月在宁波大学附属第一医院和河南省人民医院血液科初诊的240例HRMM患者的临床资料。根据诱导化疗后治疗方式的不同,进一步将患者分为二次ASCT组(20例)、单次ASCT组(80例)和未移植组(140例),比较诱导化疗后深度缓解[疗效在非常好的部分缓解(very good partial response,VGPR)及以上]率及3组间2年无进展生存率(progression free survival,PFS)和总生存率(overall survival,OS)的差异。并通过单因素和多因素分析影响HRMM预后的相关因素。结果①单次ASCT组诱导化疗后和移植后的深度缓解率分别为67.50%(54/80)和80.00%(64/80),前后比较,差异没有统计学意义(P=0.072)。二次ASCT组诱导化疗后和移植后的深度缓解率分别为65.00%(13/20)和95.00%(19/20),前后比较,差异有统计学意义(P=0.018)。②二次ASCT组、单次ASCT组、未移植组患者2年PFS分别为75.00%±2.90%、71.25%±3.00%和61.43%±3.10%。未移植组和二次ASCT组与单次ASCT组2年PFS比较,差异均无统计学意义(P=0.365和0.052),二次ASCT组与未移植组2年PFS比较,差异有统计学意义(P=0.032)。二次ASCT组、单次ASCT组、未移植组的2年OS分别为90.00%±3.50%、78.75%±2.70%和62.86%±2.50%。未移植组和二次ASCT组与单次ASCT组2年OS比较,差异均无统计学意义(P=0.071和0.057),二次ASCT组与未移植组2年OS比较,差异有统计学意义(P=0.003)。③单因素和多因素分析结果显示,多重打击、R-ISSⅢ期、诱导4疗程后疗效未达VGPR、未行二次ASCT是PFS的独立预后影响因素。多重打击、R-ISSⅢ期、未行二次ASCT是OS的独立预后影响因素。结论二次ASCT不仅可以明显提高HRMM患者的深度缓解率,且可进一步提高HRMM患者的2年PFS和OS,是值得推荐的一种治疗模式。

K562／MDR细胞与树突细胞融合诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞应答

目的通过细胞融合方法将P170抗原负载树突细胞(DC),探讨能否有效诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。方法通过贴壁黏附获得外周血单核细胞,用GM-CSF+ IL-4诱导培养DC,并以TNF-α促进DC成熟,于第7天收获DC,然后分3组:①DC与耐药细胞系K562/MDR细胞融合以负载P170抗原;②DC与K562／MDR细胞共培养;③单独DC培养。通过流式细胞术(FCM)检测PE-P170／FITC-HLA-ABC抗体双标细胞来评估融合率。将3组细胞分别与T细胞共同孵育5 d,通过MTT法比较各组T细胞对P170+靶细胞K562／MDR及HL-60／VCR的杀伤活性。结果采用PEG-DMSO诱导的DC与K562／MDR细胞的融合效率为(22．39±2．55)％,融合细胞同时表达DC表型和P170分子,HLA-ABC和P170双阳性表达率为(26．90±3．63)％,明显高于共培养组的(4．52±1．77)％,融合细胞能激活T淋巴细胞,显示出对P170+靶细胞产生抗原特异细胞毒作用,效靶比为25:1时,对K562／MDR细胞的杀伤率为(65．75±4．65)％,明显高于共培养组[(22．15±2．40)％]。结论K562／MDR与DC融合能够诱导P170蛋白特异的CTL应答,可用于多药耐药白血病的免疫治疗。

非清髓性异基因造血干细胞移植治疗系统性红斑狼疮一例

患者女，23岁。因反复面部红斑、指端疼痛发黑5年于2005年8月22日入院。5年前因发热、口腔溃疡、面部红斑、指端疼痛、紫绀就诊于外院，因抗双链DNA（dsDNA）抗体阳性，

塞来昔布促进人急性单核细胞白血病THP-1细胞凋亡

目的 :探讨选择性环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对人急性单核细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法 :不同浓度的塞来昔布处理THP-1细胞后,应用MTS法检测THP-1细胞的增殖情况,FCM法检测细胞凋亡和细胞周期,蛋白质印迹法检测caspase-3剪切片段(cleaved-caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1剪切片段(cleaved poly ADP-ribose polymerase-1,cleaved-PARP-1)、核因子κB抑制剂激酶(βinhibitor of nuclear factor kappa B kinaseβ,IKKβ)、磷酸化IKKβ(phospho-IKKβ,p-IKKβ)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(seride-threonine protein kinase,又称Akt)、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)和survivin蛋白的表达。结果 :不同浓度的塞来昔布均可抑制THP-1细胞的增殖,诱导THP-1细胞的凋亡,并将细胞阻滞于G0/G1期(P值均<0.05)。不同浓度的塞来昔布处理后,THP-1细胞中p-Akt、p-IKKβ和survivin蛋白的表达水平均显著下调(P值均<0.05);当塞来昔布的浓度大于6μmol/L时,THP-1细胞中cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达水平均显著上调(P值均<0.05)。结论 :塞来昔布能抑制THP-1细胞的增殖并诱导细胞凋亡,这一作用可能与Akt/核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路及抗凋亡蛋白survivin的表达有关。