人组蛋白H1基因的原核表达、纯化及其活性检测

目的:克隆人组蛋白H1全长编码区基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化以及活性检测。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白H1全长编码区基因,将其克隆到pGEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中扩增获得约650 bp的DNA片段,并成功克隆至pGEX-KG载体上,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为52 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H1,激酶实验证明该蛋白活性良好。结论:成功获得了活性良好的重组蛋白GST-H1,为后续研究细胞周期蛋白调控奠定了实验基础。

敲减人HPIP基因表达抑制细胞生长增殖

为了探讨人造血相关的PBX相互作用蛋白质基因(HPIP)在肿瘤发生发展中的生物学作用,构建了HPIP小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,验证其敲减效果并观察其对细胞生长增殖的影响.根据人HPIP的cDNA序列,设计了含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测HPIP基因的表达水平;结晶紫实验及流式细胞技术检测敲减HPIP基因表达对细胞生长和增殖的影响,软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响.结果显示,构建的siRNA能够有效抑制HPIP基因的表达;结晶紫实验与细胞周期分析实验显示,siRNA介导的HPIP表达沉默导致细胞生长增殖的显著抑制,软琼脂实验结果表明,稳定转染HPIP siRNA能够抑制肿瘤细胞的锚定非依赖性生长.上述结果初步表明,HPIP siRNA能明显抑制肿瘤细胞的生长与增殖,可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.

人Egr-1启动子的克隆及其在肿瘤细胞中的辐射诱导反应

目的:克隆人Egr-1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测电离辐射对其活性的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出Egr-1启动子,将其克隆到pGL3-basic载体中;将重组质粒转染人肿瘤细胞,测定Egr-1启动子在不同辐射条件下转录活性的改变。结果:成功构建了Egr-1启动子的荧光素酶报告基因;在不同剂量的γ射线照射后,Egr-1的启动子活性均明显高于未照射组;在同一剂量照射后48 h,Egr-1的启动子活性达峰值。结论:本实验构建的Egr-1启动子具有辐射激活的功能,为进一步研究放射-基因治疗奠定了基础。

团体心理及行为干预护理对住院精神分裂症患者负性情绪的影响

精神分裂症是一种复杂的、难愈的、反复发作的、严重的精神疾病,且病情迁延。患者患病后生活质量严重受损,常伴有负性情绪(消极情绪),包括痛苦、自卑、焦虑、抑郁等。因此,有必要对住院精神分裂症患者进行合理干预。有研究表明,患者的负性情绪和不健康的心理状态会影响疾病治疗的效果,不利于稳定病情[1]。团体心理干预是通过团体内的人际交互作用,促成成员在其中通过观察、体验等来认识自我,探索自我,接纳自我,进而改善与他人的关系,习得新态度、新行为,以便发展良好适应的助人过程[2]。本文旨在探讨团体心理及行为干预对住院精神分裂症患者负性情绪的影响,为临床提供可行性的方法与建议。

慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖

目的:建立高效稳定的造血相关的PBX相互作用蛋白质(HPIP)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,检测HPIP的表达对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法:构建人HPIP慢病毒siRNA干扰载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测Lenti-H1 HPIP siRNA的干扰效果;将Lenti-H1 HPIPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞,包装成慢病毒后,感染宫颈癌HeLa和肝癌HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹检测;用结晶紫实验检测其对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:构建的Lenti-H1 HPIP siRNA能有效抑制HPIP的表达;结晶紫实验显示,慢病毒介导的HPIP siRNA导致细胞增殖的显著抑制。结论:慢病毒介导的HPIP敲减能明显抑制肿瘤细胞的增殖,HPIP可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。

功能训练对住院精神分裂症患者社会功能及生活质量的影响

精神分裂症是一种病情反复、迁延难治的重性精神病。长期靠抗精神病药物控制的精神分裂症患者都残留着社会功能障碍,有研究显示这是影响其预后的主要因素[1]。也有研究显示,长期住院会导致患者明显的社会功能缺陷,影响患者的生活能力、个人卫生能力及缺乏社会兴趣等社会功能[2]。

电离辐射诱导基因的研究进展

电离辐射诱导基因是一类受电离辐射调控表达的基因,其表达随辐射条件和所处生理环境的不同呈现复杂多变的特征。电离辐射诱导基因参与细胞内各种代谢途径,在细胞周期调控、细胞生长调节、细胞凋亡、DNA损伤修复中发挥着重要的作用。介绍了电离辐射诱导基因的种类、功能,及其引起的生物效应的分子机制及应用。

综合干预对精神分裂症患者睡眠质量的影响

目的探讨综合干预对精神分裂症患者睡眠质量的影响。方法将符合《中国精神障碍分类与诊断标准(第3版)》(CCMD-3)的精神分裂症诊断标准以及伴有睡眠障碍的80例患者,采用"不平衡指数最小分配原则"分为研究组和对照组各40例。对照组只进行睡眠卫生健康教育,研究组接受睡眠卫生健康教育及音乐治疗、刺激控制、渐进性肌肉放松综合干预,疗程一个月。干预前后采用匹茨堡睡眠质量指数(PSQI)测定两组患者睡眠质量。结果干预前,对照组和研究组PSQI总评分分别为(9.70±1.65)分和(9.79±1.88)分,差异无统计学意义(P>0.05)。干预后,研究组PSQI主观睡眠质量(1.43±0.68)、入睡时间(2.23±0.56)、睡眠持续性(0.83±0.67)、睡眠障碍(1.49±0.51)、习惯性睡眠效率(0.28±0.50)、日间功能障碍(1.04±0.59)评分及总评分均低于干预前,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组PSQI各项得分和总得分均高于研究组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论综合干预可能有助于改善精神分裂症患者的睡眠质量。

氧化亚氮在胃镜检查中的应用及护理

胃镜检查是目前诊断上消化道疾病的最主要手段，但由于检查过程中存在一定的痛苦，导致大多数病人因为害怕拒绝行胃镜检查，从而延误了上消化道疾病的诊断及治疗。

翻转课堂教学满意度研究综述

近年来翻转课堂的应用研究越来越多,但研究主要集中在与传统课堂的对比以及结合其他教学方法的研究,对翻转课堂教学满意度的研究甚少。而教学满意度如何是构建翻转课堂教学模式、提高教学质量及大规模推广应用必须要了解的。鉴于此,本文主要基于翻转课堂概述,从翻转课堂满意度的概念、研究意义、影响因素及提升对策等方面对翻转课堂教学满意度进行文献综述。

缺氧损伤神经元的调节与保护

神经元是神经系统的基本结构与功能单位,其对缺氧非常敏感。缺氧本身可造成神经元的损伤,但缺氧时神经元内诸多离子以及核酸、蛋白等的变化对缺氧损伤神经元也具有调节保护作用。因此了解缺氧时神经元内的诸多变化对研究缺氧损伤神经元的保护具有重要的意义。

一次性注射器针头治疗结节囊肿性痤疮的临床护理

结节囊肿性痤疮是皮肤科常见病，主要与遗传、内分泌失调、毛囊皮脂腺导管角化异常、微生物的大量繁殖、免疫学等因素有关。临床表现为一种毛囊、皮脂腺及其导管慢性炎症［1］。随着人民生活水平提高，学习及工作压力增加，结节囊肿性痤疮发病率逐渐升高。目前大多数人误认为结节囊肿性痤疮是人的正常生理反应，从而没有及时就诊，延误结节囊肿性痤疮的治疗，严重影响患者的生活质量及身心健康。

翻转课堂在高职院校人体解剖学教学中的应用

翻转课堂是信息技术高速发展的产物,实现了传统课堂中"知识传授"与"知识内化"两个阶段的颠倒。翻转课堂是以学生为主体、教师为主导的一种新型教学模式,它彻底颠覆了以教师为中心的传统课堂教学模式。对翻转课堂在高职院校人体解剖学教学中的应用进行探究,认为在高职院校人体解剖学教学中合理应用翻转课堂可以提高教学效果,值得推广。

翻转课堂在高职院校人体解剖学理论与实践教学中的应用探究

目的:探索翻转课堂在高职院校人体解剖学理论与实践教学中的应用效果.方法:从2017年和2018年新入学的五年制护理专业班级中各抽取一个班,分别作为对照班和实验班进行实验.其中,对照班55名学生,实验班51名学生.对照班采用传统课堂教学模式授课,实验班按照教学设计采用翻转课堂与传统课堂相结合的教学模式授课.比较对照班和实验班学生的人体解剖学期末理论考试成绩和实践考试成绩.结果:实验班期末理论考试成绩和实践考试成绩均高于对照班(P<0.05).结论:翻转课堂教学模式可以提高学生的人体解剖学理论与实践考试成绩.

多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用

目的:建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法。方法:通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP,将其作为免疫原免疫小鼠,获得多克隆抗血清。将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immunomagnetic beads,IB),通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体,荧光偏振(fluorescence polarization,FP)法鉴定抗体的特异性,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,紫外分光光度法测定其回收率。结果:合成的MAP具有较强的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶12800。MAP制备免疫磁珠的最佳包被浓度为100mg/L,包被效率最高可达79%。应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体,经鉴定与其他抗原表位无反应性,其纯度为95%,抗体的回收率为5.8%。结论:MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体,其性质类似单克隆抗体。这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景。

人Six1基因缺失突变体对上皮钙黏素(E-cadherin)启动子活性的影响

Sine oculis homeobox homolog（Six）基因为同源盒基因,最早发现于果蝇,是一种在多种生物中均有表达且高度保守的转录因子,不仅参与调控胚胎的正常发育和器官形成,还参与多种肿瘤的发生发展。胃癌细胞Six1高表达增加胃癌细胞的侵袭能力。在胰腺癌细胞中,Six1能够通过上调细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达促进胰腺癌细胞的增殖。

^(18)F-FDG PET/CT在不明原因发热中的诊断价值

目的:评价18F-FDG PET/CT显像在不明原因发热(fever of unknown origin,FUO)诊断中的临床价值。方法:回顾分析2010年8月至2013年4月的51例FUO病例的FDG PET/CT检查结果。依据病理学、实验室检查或临床随访(大于3个月)得出最终病因诊断,通过定性及半定量方法对FDG PET/CT的诊断结果进行评价,统计学分析采用组间t检验。结果:51例FUO患者的最终诊断包括感染32例、恶性肿瘤9例、非感染性炎症7例以及不明原因3例。单独FDG PET显像对FUO的诊断结果中,真阳性27例(52.9%),假阳性14例(27.5%),假阴性9例(17.6%),真阴性1例(2.0%)。相比之下,联合PET和CT检查的PET/CT显像诊断结果中,真阳性36例(70.6%),假阳性14例(27.5%),假阴性1例(2.0%),真阴性0例(0)。PET/CT诊断的灵敏度为97.3%(36/37),特异性为0(0/14),准确度为70.6%(36/51)。针对恶性肿瘤,PET或PET/CT的诊断灵敏度及准确度均达100.0%(9/9)。感染与恶性肿瘤病灶的最大标准化摄取值(maximum standardized uptake value,SUVmax)之间差异有统计学意义(3.7±2.7 vs.7.7±3.5,P=0.001,t=3.6),提示SUVmax可能有助于发热病因的鉴别诊断。结论:FDG PET/CT不但能够在全身范围内发现、定位导致发热的潜在病灶,而且有助于FUO的病因诊断,特别是对恶性肿瘤的诊断。

细胞自噬与肿瘤

自噬是广泛存在于真核细胞内的一种细胞分解自身构成成分的生命现象.细胞内的双层膜结构与溶酶体结合后其内包裹的受损、变形或衰老细胞器蛋白质等被水解酶类降解.细胞自噬具有多种生理功能,生命体借此维持蛋白质代谢平衡及细胞环境稳定,这一过程在细胞清除废物、结构重建、生长发育调节中发挥重要作用.细胞自噬也与肿瘤的存活和死亡等过程密切相关.近年来对细胞自噬的研究有了较大的深入,本文主要对自噬体的形态和发生过程及其分子机制、信号调节通路、自噬研究的检测方法,以及自噬与细胞凋亡和肿瘤发生的关系等方面进行概述,以期较全面地了解细胞自噬作用和最新研究动态.

308nm准分子激光联合卡泊三醇软膏治疗手掌部慢性肥厚性湿疹疗效观察

308nm准分子激光在皮肤科的应用范围日益广泛，近年来逐渐被应用于治疗白癜风、银屑病、斑秃等疾病中，并取得明确疗效。为了解308nm准分子激光对慢性肥厚性湿疹的疗效，笔者于2013年6月-2015年1月采用308nm准分子激光联合卡泊三醇软膏治疗手掌部慢性肥厚性湿疹患者，取得了良好效果，具体报告如下。

MicroRNA-155靶向的放射性标记探针对乳腺癌小鼠模型的活体显像

目的:microRNA-155(miR-155)显著高表达于乳腺癌、肺癌、肝癌等多种恶性肿瘤,本研究旨在构建靶向miR-155的放射性示踪探针对乳腺肿瘤的活体显像。方法:体外化学合成靶向miR-155的反义互补寡核苷酸探针(AMO-155),并对其进行5'端乙酰基修饰及2'-甲氧基修饰,进而与双功能螯合剂NHS-MAG3偶联后,在氯化亚锡的还原作用下对其标记99mTc,评价血清稳定性,并对乳腺癌荷瘤裸鼠进行活体显像,对比反义、无义及阻断组的显像差异,并通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)鉴定肿瘤的miR-155水平。结果:99mTc-AMO-155的制备标记率达97%(n=5),放射化学纯度大于98%(n=5),放射比活度约为3.75 GBq/μg。通过对比无义对照组及阻断组,^(99m)Tc-AMO-155能够在活体水平特异性地显示miR-155高表达的恶性肿瘤。此外,针对miR-155不同表达水平的肿瘤,^(99m)Tc-AMO-155亦可在活体水平反映其表达差异。结论:经化学修饰的~)99m_Tc标记的AMO-155探针具有良好的血清稳定性及活体肿瘤靶向识别作用,为肿瘤显像提供了潜在的新型探针。