CytosporoneB的分离纯化,结构鉴定及其生物活性的初步研究

从福建九龙江口红树林自然保护区桐花树树皮中分离出内生真菌HTF3菌株,用柱层析和正相HPLC的方法从该菌株的发酵液中纯化出一单体化合物,经1D- 、2D -NMR和ESI -MS等方法鉴定该化合物为CytosporoneB.活性检测发现它具有较强的抗肿瘤活性和较广谱的抗真菌活性,本文报道这类物质有抗肿瘤活性,作用机理值得进一步深入研究.

峨嵋翠雀、黑水翠雀和拳距瓜叶乌头根中的生物碱成分研究

从峨嵋翠雀（Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｏｍ ｅｉｅｎｓｅ） 根中分出牛扁碱（ｌｙｃｏｃｔｏｎｉｎｅ） １、甲基牛扁碱（ｍ ｅｔｈｙｌｌｙｃａｃｏｎｉｔｉｎｅ）２、氨茴酰牛扁碱（ａｎｔｈｒｏｙｌｌｙｃｏｃｔｏｎｉｎｅ）３、德拉瓦印甲（乙）（ｄｅｌａｖａｉｎｅｓ Ａ，Ｂ）４（５）和黑翠生碱乙（ｐｏｔａｎｉｓｉｎｅ Ｂ）６；从黑水翠雀（Ｄ．Ｐｏｔａｎｉｎｉｉ）根中分出牛扁碱１、甲基牛扁碱２、氨茴酰牛扁碱３、德拉瓦印甲（乙）４（５）、德尔色明甲（ｄｅｌｓｅｍ ｉｎｅ Ａ，Ｂ）（乙）７（８）和塔卡萨明（ｔａｋａｏｓａｍ ｉｎｅ）９；从拳距瓜叶乌头（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｈｅｍ ｓｌｅｙａｎｕｍ ｖａｒ．ｃｉｒｃｉｎａｔｕｍ ）根中分出塔拉萨明（ｔａｌａｔｉｚａｍ ｉｎｅ）１０。

红树林内生真菌的抗肿瘤活性

从红树植物秋茄、桐花树和白骨壤树皮样品中分离出125株内生真菌。采用MTT法对其体外抗肿瘤活性进行检测,发现11株红树植物内生真菌对KB(人口腔上皮癌)或HL-60(人白血病)细胞具有显著的抑制活性,占总分离菌株的8.8％。秋茄、桐花树和白骨壤的抗肿瘤活性菌株分别占供测菌株的11.6％、5.7％和4.8％。抗肿瘤活性菌株主要分布在拟青霉属及曲霉属。在所分离的菌株中,归属于拟青霉属的活性菌株占供测菌株的比例最高、活性最强。结果显示红树植物内生真菌是潜在的抗肿瘤药物资源。

从深海沉积物中筛选具有抗菌、抗肿瘤活性的海洋真菌

从西太平洋近赤道区采集到的18个深海沉积物样品中分离到83株海洋真菌,采用滤纸片琼脂扩散法和MTT法分别对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗肿瘤活性进行筛选.结果显示,有37株菌株对至少一种指示菌有抑制作用;有29株菌株对KB或Raji肿瘤细胞具有显著的抑制活性,分别占总供测菌株的44.6%和34.9%.在抗肿瘤活性菌株中,WP-M-1、DY-G-2、DY-C-2、WP-K-3和WP-Q-2等5株菌具有很高的活性,其发酵液乙酸乙酯抽提物对Raji细胞的IC50分别为5.000、1.064、2.796、1.920、0.520μg/mL.研究结果表明,海洋沉积物来源的真菌中蕴藏着丰富的抗菌及抗肿瘤活性代谢产物产生菌,是开发抗菌和抗肿瘤药物的宝贵资源.

海洋真菌杀虫活性的初步研究

对采集自浙江舟山海域底泥、福建省九龙江口红树林及福建省云霄县红树林共188株海洋真菌代谢产物的杀小杆线虫(Rhabditissp.)和卤虫(brine shrimp)活性进行初步研究.筛选出#164菌株代谢产物对小杆线虫显示了较好的杀害活性,其LC90小于0.5 mg/mL.#122菌株代谢产物对卤虫显示了较强的麻痹效应.#305菌株代谢产物对卤虫的LC50仅为75μg/mL.此外,对188株海洋真菌代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究,筛选出#229菌株代谢产物和#170菌株代谢产物具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性,IC50分别为30μg/mL和25μg/mL,这些活性菌株具有产生杀线虫剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂的特性.

海洋放线菌菌株N350产生的脂溶性抗肿瘤化合物的研究

海洋微生物是当前抗肿瘤药物开发的重要新资源.应用硅胶柱层析结合活性跟踪分离的方法,从海洋放线菌菌株N350的脂溶性发酵产物中纯化并鉴定了4个化合物,分别为反式-13-二十二碳单烯酰胺,7,4'-二羟基异黄酮、6-甲氧基-7,4'-二羟基异黄酮及β-胡萝卜甙.其中,反式-13-二十二碳单烯酰胺、7,4'-二羟基异黄酮及6-甲氧基-7,4'-二羟基异黄酮具有抗肿瘤活性,抑制人口腔上皮癌KB细胞生长的ID50分别为15,8 1,5 2μg/cm3,抑制人白血病细胞HL-60生长的ID50分别为7,2 8,1 9μg/cm3.这些化合物均首次在海洋放线菌中得到分离.

不同培养基对红树林真菌HTF3菌株抗肿瘤活性物质合成的影响

对红树林真菌HTF3菌株在PD、GPY、YES、GPM及SYE 5种不同培养基中的生长情况、抗肿瘤活性及代谢产物的形成进行了研究,旨在了解培养基对该菌株生长及抗肿瘤活性物质合成的影响.结果显示:在不同的培养基中,HTF3菌株的生长速率不同,抗肿瘤活性及抗瘤谱也有明显差异;采用HPLC对不同培养基发酵液乙酸乙酯抽提物进行分析,发现不同抽提物的色谱峰数、色谱峰的保留时间及紫外吸收值均有较大的不同.实验结果表明:不同培养基对HTF3菌株抗肿瘤活性物质的合成有显著影响.

平板影印与AHBA合成酶基因筛选用于安莎类抗生素产生菌的分离

基因筛选是筛选具有抗生素产生潜力微生物的新方法.针对筛选中单菌落分离纯化不仅工作量大,而且耗费时间,采用一种将平板影印技术与PCR扩增技术相结合从土壤中快速获得具有安莎类抗生素产生潜力的放线菌的方法.根据安莎类抗生素合成途径中的3-氨基-5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAs)基因的保守性,通过放线菌的培养、影印、AH-BAs基因的PCR扩增,已从33份土样中获得8株AHBAs阳性菌株.结果表明:该方法是一种非常有效的能够快速获得AHBAs基因阳性菌株的方法,并且该方法可扩展用于从土壤中分离其他有价值的抗生素产生菌.

生物化学实验课教学改革及本科生基本科研素质培养

生物化学实验课是生物学及相关专业的一门学科类通修课程,其教学目的是让学生学习和掌握生物化学实验基本操作技能的同时,注重学生基本科研素质培养。我们根据这个理念将生物化学实验课内容设计成三个模块:基本生物化学实验技术训练模块,综合实验训练模块,以及自主设计实验模块,并在课程开展中注重学生基本科研素质的培养,达到了实验教学培养学生科研实践能力和综合素质的目的。

红树内生真菌BYY-1中一个酚类化合物的分离鉴定与抗肿瘤活性

采用硅胶柱层析、薄层层析、Sephadex LH-20柱层析从红树内生真菌BYY-1的次级代谢产物中分离到化合物B1.通过乙酰化、NMR、HR ESI-Q-TOF MS等技术鉴定了化合物B1的结构,确定其为首次从红树内生真菌中分离到的化合物.运用MTT法和流式细胞术研究了化合物B1的抗肿瘤活性,结果表明,化合物B1可显著抑制Hela细胞的增殖(IC50=3.3μg/mL),并且质量浓度为4μg/mL时,能诱导Hela细胞发生明显的凋亡.

圆弧菌醇和圆弧菌素的分离纯化及结构解析

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是激活的巨噬细胞分泌的一种多功能因子,其过量表达可以引起类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病.因此,寻找开发其小分子抑制剂具有重要意义.在对一株分离自厦门海沧红树林土壤青霉属(Peni-cilliumsp.)真菌的次级代谢产物进行分离纯化以获得TNF-α抑制剂的研究中,通过中压反相硅胶柱层析(RP-18)、常压凝胶柱层析(Sephadex LH-20)、硅胶柱层析(Si-Gel)等柱层析技术对两种产量较高的化合物进行了分离纯化.通过对两个化合物的一维(1D-)、二维(2D-)核磁共振(NMR)和质谱(MS)数据的深入解析,确定两个化合物为生物碱圆弧菌醇和圆弧菌素,两者的产率分别达7.0和3.9mg/L,并通过X射线单晶衍射确定了圆弧菌醇手性碳的绝对构型.圆弧菌醇和圆弧菌素是生物合成TNF-α诱导的人类HIV病毒复制强抑制剂纯绿青霉素过程的中间产物,但是在拮抗过量TNF-α的实验中并没有表现出明显的活性.该研究为开发利用这两种生物碱及通过生物转化合成纯绿青霉素,及加速新的潜在免疫抑制剂的研究提供基础.

粘细菌的分离鉴定及活性检测

近年来,粘细菌由于其次级代谢产物结构新颖、生物活性多样而备受关注,成为发展新药的重要来源.利用已灭活酵母菌或大肠杆菌(Escherichia coli)诱导法和滤纸片诱导法等方法进行粘细菌的分离,并采取多种方法对所分离出菌株进行纯化,从95份土样中共分离出118株粘细菌,纯化出54株.根据16SrDNA进行菌株鉴定,主要的粘细菌为粘球菌属(Myxococcus)、珊瑚菌属(Corallococcus)、多囊菌属(Polyangium)和堆囊菌属(Sorangium).对获得纯化的菌株进行了抗菌抗肿瘤活性测定,结果显示有46.3%的菌株具有抗菌作用,有66.7%的菌株具有抗肿瘤作用,表明粘细菌是抗菌抗肿瘤活性物质的重要来源.

福建沿海沉积物放线菌的多样性及生物活性

目的探索福建沿海沉积物中可培养海洋放线菌的多样性及其抗菌、抗肿瘤活性,为发现新的药物先导化合物提供新菌源。方法从15份福建沿海沉积物选择性分离放线菌;16S r RNA基因序列分析多样性;采用10种活性筛选模型分析生物活性。结果共分离到216株海洋放线菌,MOPS-脯氨酸培养基的分离效果最好。选取77株代表菌株进行16S r RNA基因序列分析,发现其归属于14个属,其中10株为潜在新种。有164株(77%)海洋放线菌对8种指示菌中的一种或几种具有抑制作用;有39株(18.1%)对He La细胞或Hep G2细胞有细胞毒活性(抑制率≥50%)。结论福建沿海沉积物样品中含有丰富多样的海洋放线菌,大量菌株具有抗菌与抗肿瘤活性,是天然产物开发的重要资源。

响应面法优化TNF-α抑制剂桥南霉素的固态发酵培养

目的利用响应面法对潜在的TNF-α抑制剂桥南霉素固态发酵培养基进行优化。方法用HPLC做检测方法,以桥南霉素的洗脱峰面积为指标,先通过Plackett-Burman(P-B)实验筛选出影响固态发酵产量的主要因素,进而进行单因素优化实验和响应面中心组合设计实验,确定主要影响因素的最佳浓度,得到最优的固体发酵培养基组成。结果优化后的发酵培养基组成:土豆400g/L、葡萄糖35g/L、蛋白胨10.5g/L、(NH4)2SO4 0.6g/L。按此配方固态发酵10L,对得到的粗提物进行HPLC检测,桥南霉素的实际产量为4.3mg/L,与模型的理论值基本相符,较优化前的产量1.5mg/L提高了186.7%。结论响应面方法是一种有效的培养基优化方法,经此优化方法桥南霉素的产量得到了较大的提高。

来源于链霉菌Streptomyces albiflaviniger菌株YN-10-2的纳皮拉霉素类化合物的结构和活性

对分离自云南大学校园的攀枝花苏铁根际土壤的链霉菌Streptomyces albiflaviniger菌株YN-10-2的化学成分进行结构和活性的研究.从20L固体表面发酵产物的提取物中经过多种层析方法的综合运用,共分离纯化出6个纳皮拉霉素（napyradiomycin）家族化合物.通过对核磁共振谱图和质谱数据的解析以及文献的对照,确定了化合物的化学结构,分别为napyradiomycin B1（1）、napyradiomycin B3（2）、napyradiomycin C1（3）、napyradiomycin A2a（4）、napyradiomycin A2b（5）和3-chloro-6,8-dihydroxy-8-a-lapachone（6）,其中化合物4和5是差向异构体.在滤纸片抗菌实验中,化合物1~3显示出对金黄色葡萄球菌的抑制活性.

对苯二甲酸二钠内标在定量核磁共振代谢组学中的应用

定量核磁共振(qNMR)技术常用来分析内源性小分子代谢物的差异和变化.qNMR中应用最多的是内标法,常见的水溶性内标易与血液中存在的大量蛋白结合,使其化学位移和线宽发生改变,从而影响代谢物定量的准确性,这是qNMR存在的重大挑战.采用对苯二甲酸二钠作为qNMR代谢组学在全血、血浆、血清样品中的内标,其信号峰为清晰稳定的单峰,并且与大多数内源性小分子代谢物的信号峰有着较好的区分.通过与常见qNMR内标的蛋白结合参数进行对比发现,对苯二甲酸二钠的蛋白结合程度更低,在血浆中半峰宽比值(内标/β-葡萄糖)仅为0.24.以代谢物乳酸为例,对20份肠癌患者的血液样品进行乳酸含量的定量测定,发现其血液样品中乳酸含量和淋巴结的受累程度呈正相关.该方法的发展为qNMR技术在代谢组学上的应用提供了简便有效的方法,有望应用于疾病诊断关键代谢物的发现和定量研究.