牦牛输卵管壶腹部与峡部的转录组学差异分析

输卵管是配子和受精卵的运输通道,在受精和早期胚胎发育中起重要作用。为深入研究牦牛输卵管不同解剖部位功能差异的分子基础,本研究对发情期母牦牛输卵管壶腹部、峡部进行了转录组测序,筛选出1395个差异表达基因,其中500个基因在壶腹部高表达,895个基因在峡部高表达。基因功能分析及通路富集结果表明,壶腹部上调差异表达基因主要与上皮细胞的完整性、细胞增殖、细胞突起、纤毛、精子运动性、受精过程有关,峡部上调差异表达基因主要与平滑肌收缩、胞外基质、解剖形态和系统发育、精子获能和储存有关。本研究从转录组层面解释了牦牛输卵管壶腹部和峡部形态结构及功能差异的原因,为进一步研究牦牛输卵管不同解剖部位的生理功能提供了基础数据。

6月龄和成年牦牛卵巢及卵泡发育状况研究

为了研究6月龄牦牛和成年牦牛卵巢及表面卵泡发育状况,试验比较了6月龄和成年牦牛卵巢长度、宽度、厚度、重量、卵泡数量以及卵母细胞体外成熟培养效果。结果表明:成年牦牛卵巢长度(2.29±0.43)cm、宽度(1.91±1.31)cm和厚度(1.60±1.90)cm均显著大于6月龄牦牛[(1.65±0.30)cm、(1.14±0.25)cm、(0.79±0.26)cm](P<0.05),成年牦牛卵巢体积(6.92±7.00)cm3和重量(3.19±1.58)g极显著大于6月龄牦牛体积(1.63±0.93)cm3和重量(0.87±0.44)g(P<0.01)。6月龄牦牛Ⅰ级卵泡数(14.47±8.74)枚和平均总卵泡数(15.17±8.87)枚极显著高于成年牦牛Ⅰ级卵泡数(7.97±3.72)枚和平均总卵泡数(8.98±3.87)枚(P<0.01),Ⅱ级卵泡数差异不显著(P>0.05),成年牦牛平均每头含(0.02±0.15)枚Ⅲ级卵泡,而6月龄牦牛无Ⅲ级卵泡。成年牦牛有黄体卵巢重量显著大于无黄体卵巢重量(P<0.05),有黄体卵巢含(0.06±0.24)枚Ⅲ级卵泡,而无黄体卵巢不含Ⅲ级卵泡。6月龄和成年牦牛A、B级卵母细胞体外培养成熟率分别为(81.39±3.53)%、(80.44±4.50)%,差异不显著(P>0.05),而6月龄牦牛卵巢的平均卵母细胞数和平均A、B级卵母细胞数均显著高于成年牦牛(P<0.05)。

果洛地区初生和1岁牦犊牛生长发育规律研究

对果洛地区 1岁和当年生犊牛各 7头 ,跟踪测定体重 1年 ,结果 :当年生犊牛体重呈平稳上升趋势 ,一年内增重44 .61kg ,1岁犊牛夏秋季生长较快 ,春季补偿生长迅速 ,冬季体重有所下降 ,一年内增重 42 .0 6kg。

青海省高寒牧区公牦牛19项生理生化指标的研究

对青海高寒牧区公牦牛的生理指标、血液生理指标和血液生化指标分析结果表明:绝大部分都位于黄牛的正常值范围之内;血清钙离了浓度和血清总蛋白含量位于正常值范围之下限。

带犊与不带犊对母牦牛体重影响的研究

在果洛地区挑选成年带犊哺乳母牛７头和不带犊母牛５头，跟踪测定体重，结果：带犊母牛体重由春季到秋季增加１８．９７ｋｇ，由秋季至翌年春末体重减少了１５．５７ｋｇ，观测期内体重增加了３．４ｋｇ；不带犊母牛由春季到秋季体重增加６５．０８ｋｇ，由秋季至翌年春末体重减少５１．４３ｋｇ，观测期内增重１３．６５ｋｇ。

1/4野血牦牛、1/2野血牦牛及家牦牛初产产乳性能测定

对１／４野血牦牛、１／２野血牦牛和家牦牛的初产牛进行１２０天的产奶量和乳脂率测定。结果：日均挤乳量，１／４野血牦牛为０．９４±０．２２ｋｇ，１／２野血牦牛为１．０５±０．１８ｋｇ，家牦牛为０．１１±０．１０ｋｇ；乳脂率，１／４野血牦牛为６．２９％，１／２野血牦牛为５．６％，家牦牛为６．２４％。经ｑ检验，３组的日均挤乳量和１／４野血牦牛与家牦牛的乳脂率均差异不显著（Ｐ＞０．０５），而１／２野血牦牛因野性较大，难以挤净含脂较高的二奶，以致乳脂率低于其它两组。

牦牛分子遗传多样性研究进展

遗传多样性研究可有效地揭示牦牛的遗传变异,是牦牛群体遗传学研究的主要内容之一。自20世纪70年代以来,人们已对牦牛的体形外貌特征、染色体核型(带型)、生理生化特性和DNA序列变异等进行了较为深入地研究。随着分子遗传学和DNA测序技术的迅猛发展,近年来的研究主要集中在牦牛的分子遗传多样性。文章对近15年来牦牛mtDNA和核基因组分子标记及侯选基因多样性的研究现状进行了综述,对前景进行展望,以期为牦牛群体基因组学等研究提供依据。

野牦牛(Bos grunniens mutus)mtDNA D-Loop区的遗传多样性

为从分子水平上评价野牦牛(Bosgrunniens mutus)的遗传多样性,对6头野牦公牛线粒体DNAD-loop区全序列进行了克隆和测定(GenBank登录号为:FJ548840～FJ548845),结合GenBank中已刊登的2条野牦牛的相应序列,使用BioEdit7.0.9、DnaSP4.10.1、Arlequin3.11等生物信息学软件,对全部8条序列开展了比对分析,确定了多态位点与单倍型数目,计算了核苷酸多样度和单倍型多样度。结果表明8条野牦牛线粒体DNAD-loop区全序列长度在891～894bp之间,其中A、T、G和C4种核苷酸的平均含量分别为32.68%、28.65%、13.46%和25.21%,A+T的平均含量为61.33%。排除4处核苷酸的插入或缺失后,共检测到39处转换和颠换位点,占分析序列总长度的4.38%,其中包括4处单一多态位点和35处简约信息位点。依据序列间核苷酸变异共确定了7种单倍型,单倍型多样度(h)为0.9643,核苷酸多样度(π)为0.02144,提示野牦牛群体具有丰富的遗传多样性。

体外受精生产犏牛胚胎与移植试验研究

旨在探讨牦牛和黄牛种间体外受精和胚胎发育效果。通过研究黄牛和牦牛卵母细胞体外成熟时间、卵母细胞质量、精子处理方式、受精卵培养体系及冷冻—解冻后胚胎活力。结果表明:随着体外培养时间的延长,卵母细胞第一极体排出率增加,A级卵母细胞培养24h第一极体的排出率显著高于B级和C级卵母细胞,但相同体外成熟时间和相同分级的黄牛和牦牛卵母细胞第一极体的排出率差异不显著。用Percoll液梯度离心法和BO液洗涤法分别处理牦牛精液和黄牛精液后通过种间体外受精,BO液洗涤法处理的精液受精后的卵裂率显著高于Per-coll液梯度离心法处理精液受精后的卵裂率,而2种方法处理精液受精后其囊胚率差异不显著。2种方法(黄牛♀×牦牛♂vs.牦牛♀×黄牛♂)生产的早期犏牛胚胎用输卵管上皮细胞共培养和卵丘细胞共培养其囊胚率和孵化囊胚率都显著高于SOF液培养,而3种培养方法培养的早期犏牛胚胎的卵裂率差异不显著。2种IVF胚胎冷冻解冻后形态正常胚(90.52%±5.94%vs.91.53%±7.34%)、24h的存活率(61.45%±8.44%vs.64.72%±11.82%)和48h的存活率(44.81%±6.21%vs.48.47%±10.04%)均差异不显著。将黄牛♀×牦牛♂IVF犏牛胚胎移植到自然发情4头受体黄牛和3头受体犏牛,4头牛怀孕并产犊,妊娠率为57.14%,平均妊娠期258d。

三个牦牛群体激素敏感脂肪酶(HSL)基因外显子Ⅰ的多态性

【目的】探究激素敏感脂肪酶(HSL)基因在牦牛内的遗传多态性,为进一步揭示牦牛群体间遗传分化、开展牦牛肉质性状的关联分析以及HSL基因在牦牛物种中的定位、表达调控等研究提供依据。【方法】采用PCR-RFLP方法对九龙牦牛、麦洼牦牛和巴州牦牛共92头牦牛的HSL基因部分外显子Ⅰ进行SmaⅠ酶切多态性分析;统计基因频率、基因型频率大小,进行卡方(χ2)适合性、独立性检验,并计算纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量等遗传多态参数。【结果】3个牦牛群体在HSL基因外显子Ⅰ具有SmaⅠ酶切多态性,在该酶切位点存在AA、AB和BB3种基因型。3个牦牛群体均检测到AA和AB基因型,而BB基因型只在巴州牦牛中检测到。九龙牦牛和麦洼牦牛的AA基因型频率最高,而巴州牦牛AB基因型频率最高;A等位基因频率在3个牦牛群体中均高于B等位基因频率,为优势等位基因。适合性检验表明3个牦牛群体在该酶切位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态;独立性检验表明九龙牦牛与麦洼牦牛、巴州牦牛之间表现为差异显著(0.01<P<0.05)和差异极显著(P<0.01),而麦洼牦牛与巴州牦牛之间表现为差异不显著(P>0.05)。测序分析表明,HSL基因外显子I第70位(从PCR产物测序片段的5′端计数)发生了单碱基突变(G→A),并导致了编码氨基酸由甘氨酸(G)变为精氨酸(R)。【结论】牦牛在HSL基因外显子Ⅰ内具有SmaI酶切多态性,其多态性是因所分析序列内一单碱基突变(G→A)所致,该碱基转换导致了氨基酸由甘氨酸(G)变为精氨酸(R);在该酶切位点,九龙牦牛、麦洼牦牛和巴州牦牛均处于Hardy-Weinberg平衡状态。九龙牦牛与麦洼牦牛、巴州牦牛之间表现为差异显著(0.01<P<0.05)和差异极显著(P<0.01),而麦洼牦牛与巴州牦牛之间表现为差异不显著(P>0.05)。

环青海湖地区土壤、牧草及牦牛血液中矿物质元素动态变化研究

2005年3月(冬春季草场)和2005年7月(夏季草场),分别对环青海湖地区放牧牦牛的全血、牧草和土壤中的Zn、Ca、Cu、Fe、K、Na、S、P、Cl、F、I、Se12种矿物元素和Ca、Cu、K、Fe、Na、P、Se7种矿物元素的营养状况进行了测定。结果显示,除夏季牦牛全血Se和S有显著增加外,其它矿物质含量均显著降低,提示夏季草场由于牦牛生长发育迅速其矿物质元素的缺乏更为严重,在生产中更应进行有关矿物质元素的补饲,进一步提高其生产性能。

牦牛输卵管上皮细胞分离培养和纯化鉴定

为建立牦牛输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法,通过选取牦牛输卵管,运用机械刮取法和0.25%胰蛋白酶消化两种方法分离上皮细胞进行体外培养。对不同分离方法的培养效果比较,培养细胞进行形态学观察与传代培养、MTT比色检测细胞活力并制定生长曲线,原代及传代上皮细胞的免疫组织化学鉴定,冷冻解冻后经台盼蓝排斥试验检测活细胞数。结果表明该试验分离出的原代细胞,纯化后传代培养,经鉴定为牦牛输卵管上皮细胞,培养的细胞生长状况良好,建立了一套牦牛输卵管上皮细胞分离培养及纯化鉴定的方法。

幼龄家牦牛及野、家牦牛的杂种公牛血液中INS、P_4、T、LH、17β—E_2

采用放射免疫分析法对幼龄耗牛及其杂种公牛一昼夜血液中胰岛素（ＩＮＳ）、孕酮（Ｐ_４）、睾酮（Ｔ）、黄体生成素（ＬＨ）、雌二醇（１７β—Ｅ_２）的含量变化进行了研究，并对昼夜间激素含量进行ｔ检验，对杂交组合或各类型间各激素含量进行单因子方差分析。结果表明，１／２野牛与１／４野牛ＩＮＳ含量差异极显著；１／２野牛与家牦牛差异显著；家牦牛与３／４野牛差异极显著；家牦牛与１／４野牛、１／４野牛与３／４野牛差异不显著。３／４野牛Ｐ＿４极显著高于家牦牛、１／２野牛、１／４野牛，其余３个品种差异不及著。１／４野牛Ｔ含量极显著高于３／４野牛、１／２野牛、家牦牛；３／４野牛显著高于家牦牛；３／４野牛与１／２野牛，１／２野牛与家牦牛之间差异均不显著。４个类型或杂交组合间ＬＨ差异不显著。家牦牛、１／２野牛、１／４野牛间１７β—Ｅ＿２差异不及著。

应用LAMP法鉴定牛早期胚胎性别试验

使用LAMP法对12枚牛体外受精胚胎的基因扩增,通过使用不同的引物,对牛胚胎中的雄性特异性核酸序列和雌雄共有的核酸序列进行扩增,鉴定胚胎的性别,结果7枚为雌性,5枚雄性。

青海高寒牧区犏牛挤乳量及乳成分分析

对青海高寒牧区犏牛挤乳量及乳成分进行了分析,并与同等饲养条件下的牦牛进行了比较。结果表明:1)不同地区犏牛挤乳量差异不显著(P>0.05);2)不同的产乳阶段两个地区犏牛挤乳量的变化趋势相同;3)犏牛挤乳量极显著高于牦牛挤乳量(P<0.01);4)犏牛乳脂与干物质低于对照组牦牛的含量,其它成份无显著差异。

牦牛、黄牛卵巢卵泡发育及卵母细胞体外成熟培养的比较研究

对53头成年黄牛和44头成年牦牛卵巢形态、表面卵泡数量、黄体状况以及卵母细胞体外成熟培养等进行了比对研究,探讨牦牛和黄牛卵巢的形态学差异和卵泡卵母细胞发育变化规律。结果表明,成年黄牛卵巢的体积(11.12±5.77vs.6.92±7.0)和重量(5.85±2.98vs.3.19±1.58)显著大于成年牦牛卵巢(P<0.05);成年黄牛Ⅰ级卵泡数(13.04±8.12vs.7.97±3.72)、Ⅲ级卵泡数(0.42±0.52vs.0.02±0.15)、总卵泡数(14.46±8.92vs.8.98±3.87)和卵巢黄体直径(1.54±0.44vs.1.2±0.51)显著大于牦牛(P<0.05);采集卵巢卵母细胞,黄牛卵母细胞数量显著多于牦牛,经体外成熟培养A级卵母细胞培养24h第一极体的排除率显著高于B级和C级卵母细胞,同一体外成熟时间和相同分级的黄牛和牦牛卵母细胞第一极体的排除率差异不显著。

不同类型野血牦牛冷季暖棚补饲效果

对0．5岁1／4野血牦牛、1／2野血牦牛和3／4野血牦牛各5头进行为期98天的冬季暖棚补饲试验，取得了显著的经济效益。塑料暖棚的日平均气温—1．7℃，棚外日平均气温—9．5℃，温差7．8℃，棚内最低温度—6℃，棚外—26℃，温差20℃。通过补饲，1／4野血牦牛、1／2野血牦牛和3／4野血牦牛体重增加分别为6．8千克、6．0千克和2．2千克，比对照组的—3．8千克、—2．0千克和—3．0千克分别多10．6千克（P＜0．01）、8．0千克（P＜0．05）和5．2千克（P＜0．05），各试验组每头牛平均盈利40．81元、27．81元和13．81元。

青海省三种类型牦牛生产性能测定研究

2006年6～7月在青海省各地采集环湖型、高原型、白牦牛三种不同类型牦牛的毛绒、奶样进行常规测定,并对体尺进行测定,体重是由体尺进行计算得到估测体重。结果表明成年牦牛的各项体尺在过去的20年里变化不明显,牦牛的体重呈下降趋势。三种类型牦牛奶的水分、乳蛋白、乳糖差异不明显(P≥0.05)。

牦牛、犏牛和黄牛生产性能比较及肉中风味物质测定

随机选取青海省1.5岁左右牦牛(♂)、犏牛(♂)和黄牛(♂)各3头,利用高效液相色谱法对其肉中的肌苷、肌苷酸和硫胺素进行测定,采用高氯酸滴定法测定其肉中谷氨酸钠的含量,并对牦牛、犏牛和黄牛的生产性能进行比较分析。结果表明:①犏牛的体重和体高明显优于同龄牦牛(P<0.05),而且犏牛的体长与牦牛具有极显著差异(P<0.01),犏牛和黄牛的胸围都与同龄牦牛具有显著差异(P<0.05)。②犏牛的头重明显高于同龄牦牛(P<0.01);犏牛的皮重、前二蹄重、后二蹄重、胴体重和胴体肉重明显优于同龄牦牛(P<0.05);犏牛和黄牛的胴体骨重都与同龄牦牛具有显著差异(P<0.05);三个品种的屠宰率、净肉率和胴体产肉率无显著差异(P>0.05);黄牛的骨肉比明显高于同龄犏牛(P<0.05)。③牦牛肉中肌苷含量最高,其含量明显高于同龄黄牛(P<0.05);肌苷酸的含量在三品种间无显著差异(P>0.05);犏牛肉硫胺素的含量明显高于同龄黄牛(P<0.05);黄牛和犏牛肉谷氨酸钠的含量显著高于同龄牦牛(P<0.05)。

牦牛、犏牛及黄牛肉脂肪酸和风味物质的分析

随机选取青海省果洛州同一放牧群体的1.5岁牦牛(♂)和犏牛(♂)各3头,与青海省湟中县1.5岁的3头黄牛(♂)做比较研究,利用气质联用仪对牦牛、犏牛和黄牛肉中脂肪酸组成及含量进行分析,利用高效液相色谱法对其肉中的肌苷、肌苷酸和硫胺素进行测定,采用高氯酸滴定法测定其肉中谷氨酸钠的含量。结果表明:①牦牛、犏牛和黄牛肉中饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的含量无显著差异(P>0.05);多不饱和脂肪酸在犏牛肉中含量最高,明显高于牦牛和黄牛肉(P<0.05)。②牦牛肉肌苷的含量明显高于同龄黄牛(P<0.05);三种牛肉中肌苷酸的含量无显著差异(P>0.05);犏牛肉硫胺素的含量最高,明显高于同龄黄牛(P<0.05);犏牛与黄牛肉谷氨酸钠的含量明显高于同龄牦牛(P<0.05)。