正常人群中发现Dystrophin基因外显子缺失的分子遗传学分析

目的对存在Dystrophin基因外显子缺失家系进行分子遗传学诊断,分析该家系Dystrophin基因突变情况及临床表型,探讨该基因缺陷的分子遗传学基础,为临床遗传咨询提供更多的咨询意见。方法采用染色体微阵列分析技术对胎儿染色体进行拷贝数变异分析,应用多重链接依赖探针扩增技术对胎儿Dystrophin基因进行外显子缺失检测,同时对家系其他成员进行Dystrophin基因外显子进行检测。结果染色体微阵列分析技术发现胎儿Xp21.1(31,738,181-31,806,661)缺失,多重链接依赖探针扩增技术检测出Dystrophin基因外显子51~52缺失,家系女性均为Dystrophin基因外显子51~52缺失携带者,两位男性为Dystrophin基因外显子51~52缺失半合子,一位男性未发现Dystrophin基因外显子缺失。结论 Dystrophin基因缺失突变可出现于正常人群,Dystrophin基因缺失突变不一定导致Duchenne/Becker型肌营养不良,为临床基因诊断及遗传咨询提供了重要依据。

生殖道HPV感染合并HCMV、HSV、UU、CT感染情况分析

目的:对比HPV感染组与HPV未感染组之间合并HCMV、HSV、UU、CT四种病原体的感染情况,探讨生殖道HPV感染合并其它病原体感染对宫颈癌的发生、发展的影响。方法:收集经检测已知为HPV分型一种亚型或合并多种亚型呈阳性的宫颈分泌物DNA提取液87例,及HPV分型亚型呈阴性的宫颈分泌物DNA提取液43例,应用PCR结合反向寡核苷酸探针杂交技术检测(RDB);应用实时荧光定量PCR扩增检测技术(FQ-PCR)对上述标本进行了测定。结果:①HPV阳性组(87例)和HPV阴性组(43例)合并HCMV、HSV、UU、CT病原体感染的综合检出率分别为74.71%和49.42%;②HPV阳性组(87例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为22.99%(20例)、1.15%(1例)、57.47%(50例)、24.13%(21例),HPV阴性组(43例)合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为9.3%(4例)、0%(0例)、41.86%(18例)、6.98%(3例);③HPV阳性组按亚型不同可分为高危型组和低危型组。其中高危型组(78例)中合并HC-MV、HSV、UU、CT感染分的单项检出率分别为19.23%(15例)、1.28%(1例)、52.56%(41例)、17.94%(14例),低危型组(9例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为55.56%(5例)、0%(0例)、100.00%(9例)、77.78%(7例);④HPV阳性组中以分型为16亚型的合并感染率最高;HCMV、UU、CT分别为40.00%(8/20)、28.00%(14例)、19.05%(4例);⑤在87例HPV阳性组的病例中,查到30例有宫颈上皮内瘤样变(CIN)病例资料。这30例中有23例合并HCMV、UU、CT感染,其单项检出率分别为21.08%(6例)、69.57%(16例)、30.43%(7例);有7例HPV阳性CIN病例不合并HCMV、HSV、UU、CT感染。结论:宫颈上皮细胞HPV感染与宫颈癌的发生、发展有密切关系,HPV感染者也可同时合并其他泌尿生殖道常见病原体感染。多种病原体同时感染宫颈与宫颈癌的发生、发展及预后的关系有待进一步研究。

湖南籍人群α、β地中海贫血流行病学调查及突变类型分析

目的调查在深圳的湖南籍人群α、β地中海贫血的携带频率,探讨α和β地贫基因突变类型及其构成比例。方法通过血常规、血红蛋白电泳等方法对湖南籍贯4423人进行地贫筛查,对异常者进行基因分析,统计湖南籍人群2种地贫的发生频率及突变类型。结果对受检样品中HbA2和/或MCV偏低者直接进行基因分型诊断,发现α地贫95例,占所检人群的2.15%,共有4种基因型:--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、--SEA/-α3.7,所占比例依次为76.34%、1.51%、3.23%、1.08%;共发现HbA2显著增高者90例,检出率为2.03%;对其中73例进行基因分型,共检测到9种突变类型:IVS-II-654(C-T)、CD41/42(-TCTT)、CD17(A-T)、TATAbox-28(A-C)、CD26(G-A)、CD43(G-T)、TATAbox-29(A-G)、CD27/28(+C)、CD71/72(+A),各型突变的构成百分比依次为35.61%、26.03%、21.92%、5.48%、2.74%、2.74%、2.74%、1.37%、1.37%。结论湖南籍人群α、β地贫的发生率较高;不同突变类型的构成情况与其他地区相比明显不同,本研究结果对开展遗传咨询、基因分析及产前诊断具有重要的参考价值。

PCR-高效液相色谱法检测线粒体DNA A1555G突变

目的探讨PCR-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)分析技术在检测线粒体(mt)12S rRNA基因第1555位A-G均质点突变中的应用。方法 4例临床诊断为氨基糖苷类抗生素耳聋的患者及40例听力正常体检者,分别运用PCR-DHPLC技术、酶切技术及DNA测序技术进行mtDNA1555位点检测。结果 PCR-DHPLC与酶切技术均检测出4例患者mtDNA A1555G突变,在PCR-DHPLC中均呈特征性突变双峰;40例正常体检者未检测出突变,样品均呈单峰。DNA测序技术证实了DHPLC及酶切技术的准确性。结论 DHPLC能有效地应用于线粒体DNA A1555G突变的检测,该方法简便,成本低廉,可作为mtDNA A1555G突变位点大样本筛查的的手段。

用作漆雾絮凝剂的三聚氰胺甲醛树脂合成研究

三聚氰胺在盐酸的水溶液中与甲醛进行羟甲基化反应,对合成产物进行表征和性能测试,并深入研究了反应物配比、反应时间、反应温度对三聚氰胺甲醛树脂用作漆雾絮凝剂效果的影响及三聚氰胺甲醛树脂溶液的稳定性,找出了用做漆雾絮凝剂最佳的反应条件为n(三聚氰胺)∶n(甲醛)∶n(盐酸)=1∶2∶1,反应温度60℃及反应时间3 h。

漆雾凝聚剂CR-001的原理与应用

针对水帘喷漆室循环水中形成的漆雾,提出了处理方法,并详细介绍了漆雾凝聚剂CR-001的组成、作用原理及应用情况。应用实验表明:漆雾凝聚剂CR-001的脱黏效果好、凝聚性优良,可广泛用于各类漆雾的凝聚处理。

丁基罗丹明B荧光法测定痕量钽

本文提出了用丁基罗丹明 B 测定痕量钽的新方法.丁基罗丹明 B 与 T_aF_6^-络阴离子形成三元离子缔合萃取物,该缔合物被萃取后有较大的荧光值,这种方法灵敏、快速、简便,选择性好,样品中测定,结果满意.另外本文对干扰离子也作了研究.

无创产前筛查高风险病例的临床特征及影响因素分析

目的评价深圳市无创产前基因检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)在不同临床特征人群及不同目标疾病的高风险检出率,探讨影响NIPT高风险病例产前诊断、PPV及妊娠结局的可能因素。方法回顾性分析19895例2018年1月至2018年12月在南方医科大学附属深圳妇幼保健院行NIPT的孕妇临床资料,依据孕妇的临床特征分组对NIPT高风险检出率、NIPT发现的胎儿染色体异常病例的介入性产前诊断的选择、产前诊断结果及妊娠选择进行分类统计。结果共检出200例NIPT异常病例,孕妇年龄、血清学筛查、胎儿颈部透明层厚度(nuchal translucency,NT)、胎儿超声软指标(ultrasound soft markers,USM)均影响高风险检出率(均P<0.05)。154例高风险病例选择产前诊断(81.05%),NT影响产前诊断率(P<0.05)。21-三体、18-三体、13-三体、性染色体非整倍体及其他染色体异常的PPV分别为97.62%、66.67%、40.00%、68.25%、17.14%。异常结果类型、NT、USM影响PPV(均P<0.05)。异常结果类型及USM影响确诊病例的妊娠终止率(P<0.05)。拒绝染色体确诊病例的妊娠终止率与NIPT高风险类型、血清学筛查、NT、USM有关(均P<0.05)。结论NIPT不仅对常见的染色体非整倍体有较高的筛查效率,而且对性染色体异常及其它染色体异常也有潜在的价值。孕妇年龄、血清学筛查结果、NT及USM影响NIPT筛查高风险率。产前诊断的选择与胎儿NT有关。异常结果类型、NT、USM影响PPV。确诊及拒绝确诊病例的妊娠结局分别与异常结果类型、USM及NIPT高风险类型、血清学筛查、NT、USM有关。

油气管道建设标准化设计推广模式探析

"五化"工作是中石油工程建设向着工业化、智能化方向发展,转变传统建设方式,提升建设品质的必然之选。标准化设计作为"五化"工作的排头兵,对"五化"工作的开展具有极其重要的作用,标准化设计的有效推广,对于工程建设高效高质的开展具有重要意义。结合中国石油管道局工程有限公司设计分公司标准化设计工作的实践经验,对标准化设计推广的影响因素进行探析,介绍了标准化设计推广案例,提出了标准化设计推广模式的建议,助力石油工程设计基层单位更加有效地进行标准化设计推广。

胎儿游离DNA无创产前检测次要结果在筛查Klinefelter综合征中的价值

目的探讨胎儿游离DNA无创产前检测(NIPT)次要结果对Klinefelter综合征(KS)筛查的准确性,并分析KS高风险孕妇筛查后的决策、妊娠结局,以及影响父母决策的因素。方法选取行胎儿游离DNA NIPT的单胎妊娠孕妇50760例,对筛查出的KS高风险孕妇采用电话随访方式获其妊娠结局及新生儿出生后3个月的健康情况。回顾性分析KS高风险孕妇的NIPT指征、介入性产前诊断方案及结果、妊娠结局及新生儿结局,以及影响父母对介入性产前诊断及KS患儿接受度(选择继续妊娠)的因素。结果NIPT筛查KS的高风险率为0.09%(44/50760)。有75.00%(33/44)的KS高风险孕妇选择介入性产前诊断,确诊KS 29例。NIPT筛查KS的阳性预测值为88.00%(29/33)。NIPT筛查孕周为12^(+0)~22^(+6)周的孕妇选择介入性产前诊断的比例(84.00%)高于筛查孕周≥23周的孕妇(28.57%)(P<0.05)。29例确诊KS的孕妇中有26例(90.00%)选择终止妊娠,3例(10.00%)继续妊娠。11例拒绝介入性产前诊断的孕妇均继续妊娠。对于KS患儿的接受度,NIPT筛查孕周≥23周的孕妇(71.43%)高于筛查孕周为12^(+0)~<22^(+6)周的孕妇(27.00%)(P<0.05),孕次为1次的孕妇(53.33%)高于孕次为2次(12.50%)和≥3次的孕妇(44.44%)(P<0.05),产次为0次的孕妇(52.00%)高于产次≥1次的孕妇(15.79%)(P<0.05),专科及以下学历的家庭(57.14%)高于本科及以上学历的家庭(23.00%)(P<0.05),未进行胎儿染色体核型验证的孕妇(100.00%)高于确诊胎儿染色体核型为KS的孕妇(10.34%)(P<0.05)。选择继续妊娠的11例KS高风险孕妇及3例KS确诊孕妇均活产分娩,新生儿均未行染色体核型检测。结论NIPT筛查KS的准确性较高,可考虑将其作为筛查KS的首选方式,并纳入产前管理。

12例DMD患者Dystrophin基因的突变分析

目的探讨Dystrophin基因的突变特点、分布模式以及所导致的氨基酸变化。方法应用高通量测序技术对符合临床诊断但未发现Dystrophin基因外显子缺失或重复的12例Duchenne型肌营养不良患者进行测序分析。选取50名成年男性志愿者作为正常对照。结果12例患者均检测出Dystrophin基因点突变，其突变位点分别为C．33C〉G、c．583C〉T、C．1333C〉T、c．2593C〉T、c．5731A〉T、c．7288G〉T、C．2803＋1G〉T、c．10034G〉A、C．4289A〉G、c．19051906delAG、C．5017delC、C．5768_5771 delAAGA、C．62616262insA，均为未报道过的新突变。在50名正常对照中未检测到相同的突变。结论检测到Dystrophin基因的13个新的突变位点，丰富了Dystrophin基因突变谱，为临床基因诊断提供了重要的依据。

结合多重连接探针扩增技术与第二代测序技术建立假性肥大型肌营养不良产前诊断技术平台

目的应用多重连接探针扩增技术（MLPA）与第二代测序技术对假性肥大型肌营养不良（DMD/BMD）家系进行产前诊断，创建可靠的、高效的DMD产前诊断技术平台。方法对2010年1月至2016年12月来自深圳市妇幼保健院产前诊断中心就诊的87个DMD家系，使用MLPA技术进行DMD基因外显子缺失或重复突变检测，应用第二代测序技术对未检测出外显子缺失或重复突变的家系进行DMD基因全外显子及侧翼序列检测。同时对这87个DMD家系进行产前诊断。结果87个家系先证者中，55例为DMD基因外显子缺失突变，23例为DMD基因外显子重复突变，9例为DMD基因微小突变。产前诊断结果为24例DMD患病胎儿，9例DMD基因突变携带胎儿，54例正常胎儿。结论建立MLPA结合第二代测序产前诊断技术平台，可全面检测DMD基因缺失、重复及微小突变，提高DMD基因突变检测率。（中华检验医学杂志，2018, 41：70－72）

结合MLPA技术与高通量测序技术对DMD患者进行基因检测

目的探讨多重连接探针扩增技术(MLPA)与高通量测序技术(NGS)对假性肥大型肌营养不良(DMD)患者基因检测的临床应用价值,为进一步创建经济可靠的、高效的DMD诊断技术奠定技术平台。方法使用MLPA技术对66名假性肥大型肌营养不良患者进行DMD基因的缺失或重复检测,然后应用NGS技术对未检测出DMD基因缺失或重复的患者进行DMD基因测序。结果 49例为DMD基因外显子缺失,3例为DMD基因外显子重复,14例为DMD基因微小突变。结论结合MLPA技术与高通量测序技术可高效检测DMD基因缺失、重复及微小突变,更好地为DMD患者做出临床诊断。

人乳头瘤病毒基因检测方法的初步比较及基因亚型分析

宫颈癌的筛查方法从分子水平检测通常采用多重核酸扩增荧光检测技术（FQ—PCR）和第二代杂交捕获技术（HC—Ⅱ）以及PCR结合反向寡核苷酸探针点杂交技术（PCR／RDB）。FQ—PCR实验方法简单，其优点是易于操作，且全部实验均在一个密闭反应体系中完成，能有效避免交叉污染造成的假阳性；而HC-Ⅱ实验方法相对繁琐，其缺点是开放式的操作过程容易交叉污染造成假阳性，且试剂成本较高。

应用多重连接依赖探针扩增技术对脊髓性肌萎缩患者及致病基因携带者进行基因诊断

目的探讨多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术对脊髓性肌萎缩(SMA)患者及携带者基因检测的临床应用价值,为进一步创建可靠的SMA产前诊断技术平台奠定基础。方法运用MLPA技术对6例SMA患者及双亲进行运动神经元生存基因(survival of motor neuron gene,SMN)检测,用PCR限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)和DNA测序技术对MLPA检测结果进行验证。结果 MLPA试剂盒P021-A1检测6个患者中4个患者为SMN1的外显子7和外显子8缺失纯合子,2个患者为SMN1外显子7缺失纯合子;6例患者的12名双亲的SMN信号值均明显比正常对照组低30%～50%。同时还检测出部分患者及携带者GTF2H2(BTF2p44)和BIRC1(NAIP)基因存在病变。P060-A2检测出12名携带者SMN1信号比正常对照组降低30%～50%,其中3名合并BIRC1基因信号降低。PCR-RFLP和DNA测序技术支持MLPA有关SMN基因检测结果。结论 MLPA技术能对SMA患者及携带者进行快速可靠的基因诊断。通过MLPA技术分析SMN邻近基因的基因突变和(或)缺失情况,为SMA患者基因型和临床分型诊断提供依据。

线粒体DNA A1555G突变在新生儿大规模筛查的临床意义

目的探讨在新生儿中进行线粒体DNA（mitoehondria DNA，mtDNA）A1555G突变基因大规模筛查在预防药物性耳聋的必要性。方法随机取2008年在深圳市出生的1000名新生儿的血滤纸标本，用Chelex-100树脂提取DNA，PCR扩增，变性高效液相色谱法（denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC）进行mtDNA A1555G突变基因筛查，计算出阳性突变频率。结果1000名新生儿血滤纸样本中，共检测出2例样本存在mtDNA A1555G突变，突变率为0．2％。结论mtDNA A1555G突变在新生儿中出现的频率较高，对其进行mtDNA A1555G突变大规模筛查发现氨基甙类抗生素敏感个体，能有效地对新生儿及其家族高危人群进行合理性指导用药，从而更好地预防药物性耳聋。

β珠蛋白基因非翻译区+(43-40)(-AAAC)4bp缺失遗传学效应探讨

目的探讨临床普遍认为可导致β地贫的β珠蛋白基因5′端非翻译区+(43-40)(-AAAC)4bp缺失(亦称CAP突变)是否具有遗传学效应,为β珠蛋白基因功能研究和地贫临床基因诊断提供临床和理论依据。方法应用反向点杂交和DNA序列测定确诊四个携带此缺失的先证者,对先证者及其家系核心成员进行血液学分析和基因诊断,同时将各项检查结果与首例报道病例进行对比分析。结果+(43-40)(-AAAC)4bp缺失杂合子无明显贫血症状,与β珠蛋白基因其他突变方式合并存在病例无严重贫血症状,与首例报道明显不同。结论β珠蛋白基因5′端非翻译区+(43-40)(-AAAC)4bp缺失没有明显的遗传效应,对基因的表达和生物学功能很可能没有影响。此研究为β珠蛋白基因生物学功能研究提供了更丰富的资料;对β地中海贫血群体筛查具有指导性意义。

人类乳头瘤病毒亚型dHPLC基因分型方法的建立

目的:对高危型人类乳头瘤病毒(HPV)亚型进行基因分型,并进行分子流行病学分析。方法:建立9种高危型HPV亚型(即82亚型、52亚型、16亚型、31亚型、59亚型、58亚型、53亚型、51亚型、45亚型)重组质粒PCR扩增产物dHPLC标准分离图谱。按标准方法提取194例子宫颈脱落细胞标本DNA,PCR扩增,产物进行dHPLC分析,记录各标本分离峰的出现时间,并与HPV重组质粒dHPLC参照分离图形进行比较,作出临床标本HPV亚型诊断。结果:在194例临床标本中,各HPV亚型的检出率为:16亚型32.47%、52亚型23.20%、58亚型18.04%、31亚型11.86%、53亚型8.25%、59亚型3.09%、45型(2.06%)、51型(1.03%),未发现82亚型。结论:HPV基因L1区通用引物PCR扩增产物结合dHPLC分析,可进行常见高危型HPV亚型分析。

多重连接依赖性探针扩增技术在α地中海贫血产前诊断中的应用

目的探讨多重连接依赖性探针扩增（multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA）技术在α地中海贫血（简称地贫）产前基因诊断中的应用。方法对2例血液学检查（全血细胞计数和血红蛋白分析）为α地贫表型特征，α地贫基因常规方法检测为正常的孕妇的血液样本进行MLPA检测；对89对夫妇双方或一方为α地贫基因携带者的家系中的胎儿样本，采用常规跨越断裂点PCR（Gappolymerasechainreaction，Gap-PCR）技术和反向斑点杂交技术检测α珠蛋白基因的缺失及点突变；同时应用MLPA技术对上述89份样本进行a珠蛋白基因缺失检测。结果上述2例孕妇的血液样本，经MLPA检测未检测到a珠蛋白基因缺失，后经证实为缺铁性贫血；88份胎儿样本的MLPA检测结果和Gap—PCR检测结果完全一致；1份胎儿样本（绒毛组织）经Gap—PCR检测未能确诊，后结合MLPA检测确诊为--SEA／αα。结论MLPA技术可应用于α地贫的产前基因诊断，作为Gap—PCR技术的有效补充，减少漏诊和误诊，提高产前诊断的准确率。

多色探针熔解曲线技术在β地中海贫血产前基因诊断中的应用

目的建立一种采用多色探针熔解曲线（MMCA）技术对β地中海贫血进行产前基因诊断的方法。方法方法学建立。收集2014年1至12月在深圳市妇幼保健院产前诊断中心行地中海贫血产前基因诊断的胎儿样本95份，其中孕10～13周绒毛样本9份，孕18～24周羊水样本86份。按双盲对照试验，对上述样本分别采用反向斑点杂交（RDB）技术和MMCA技术进行β珠蛋白基因突变检测。比较两种方法的一致性。结果93份胎儿样本的MMCA检测结果和RDB检测结果完全一致；2份胎儿样本的MMCA检测经校正后和RDB检测结果完全一致，最终95份样本的MMCA检测结果和RDB检测结果完全一致，符合率100％。结论MMCA技术可应用于β地贫的产前基因诊断，作为RDB技术的有效补充。