反转学习行为学范式对Sapap3基因敲除小鼠认知灵活性的检测

目的训练C57/6J野生型小鼠与Sapap3基因敲除小鼠分别进行嗅觉、触觉、听觉为线索的反转学习行为学学习,探究嗅觉、触觉、听觉为线索的小鼠反转学习范式的可行性与对Sapap3基因敲除鼠认知灵活性的探究。方法将8~10周的C57/6J野生型小鼠与Sapap3基因敲除鼠各分成3组,在头部固定的情况下进行反转学习行为学训练,通过分析各个阶段的舔水事件的正确率、错误率与学习速率等指标,观察小鼠在3种反转学习行为学范式下的学习能力。结果Sapap3基因敲除鼠与C57/6J野生型小鼠在以嗅觉与听觉为线索的反转学习范式反转阶段达到学习标准所需的时间差异有统计学意义。结论反转学习行为学范式可用于对认知灵活性的检测并且Sapap3基因敲除小鼠的认知灵活性存在障碍,为后续进行对与认知灵活性相关的疾病与脑区的研究的奠定了行为学基础。

基因治疗巴金森氏病大鼠模型的实验研究

巴金森氏病以黑质多巴胺能神经元变性减少为特征，以６－羟多巴胺单侧损毁大鼠脑内多巴胺能系统可建立巴金森氏病的动物模型，当给予阿普吗啡后通过检测这些大鼠的旋转圈数和纹状体多巴胺及其主要代谢产物的水平则可反映多巴胺的减少或恢复程度。为达到基因治疗巴金森氏病大鼠模型的目的，本研究将带有酪氨酸羟化酶基因的重组载体－质粒ｐＣＭＶＴＨ（６．０４ｋｂ）在体外通过脂质体转染技术转入原代培养的骨骼肌细胞内；再将这些经遗传改造、能表达酪氨酸羟化酶的骨骼肌细胞植入模型大鼠脑的纹状体内。结果显示，这些表达酪氨酸羟化酶的肌细胞可在大鼠模型脑内长期存活，这些模型大鼠的异常运动显现实质性改善，它们的纹状体多巴胺水平明显升高。

家兔脊髓灰质细胞构筑的研究

本研究采用14只成年和幼年家兔的各节脊髓,作脊髓灰质分层研究。所用的脊髓切片为80μm、60μm和15μm的横或矢状切片以及2μm的半薄切片。对细胞体和髓鞘染色分别采用甲苯胺蓝、坚牢焦油紫、LuXol Fast Blue及对苯二胺。此外,还用显示灰质乙酰胆碱酯酶活性的方法协助分层研究。分层研究是根据Rexed对猫脊髓灰质分层的原则。研究结果发现家兔脊髓分层基本类似于猫,但在各层的范围及结构方面仍有一定不同。

做首都医科大学神经科学发展的中流砥柱——纪念首都医科大学诞辰50周年

首都医科大学神经生物学学科的发展对学校乃至北京市科技进步做出了重要贡献。该学科的发展是学校建校以来几代人努力的结果,目前在科学研究、人才培养和平台建设等方面达到了很高的水平。特别是在科学研究方面,学系以"转化医学"理念为指导,针对人脑重大疾病凝练形成了5个主要研究方向并已成为学校的亮点和特色。我们确信神经生物学系在今后学校神经科学的发展中将起到中流砥柱的作用。

神经干细胞及其在脑修复中的可能应用

成年哺乳动物脑内存在有能分化成神经元或神经胶质的神经干细胞，这种神经前体细胞一般位于脑室壁部位。从胎脑分离下来的神经前体细胞能在体外分裂并进一步分化成神经元和胶质细胞，许多包括生长因子在内的活性物质或分子结构参与这一分化过程并决定这些细胞的转归；从成年脑中也能分离出有繁殖能力的细胞，当这些存在于中枢神经系统内的干细胞（即多潜能细胞）和具有明确前景的前体细胞（神经母细胞和胶质母细胞）遇到与胚胎时期相同因子的影响时也会分裂、分化。由于在体外培养状况下难以提供神经前体细胞分化繁殖的所有条件，故将其植入发育中或成年中枢神经系统特定部位的做法是研究神经干细胞特性，特别是研究决定其分化微环境的有效办法。对神经干细胞的研究，为进一步探讨神经元的发生、迁移、分化和诊治多种神经疾患提供了新的机遇。

继承优良传统 坚持创新发展

中国解剖学会成立至今,已经过去整整一百年了。经过一百年的沧桑巨变,学科的发展已经在我们每一位解剖学科教工作者心中筑成了一座“非手造的纪念碑”,成为我们解剖学事业发展史中的重要标志。她深刻地记载着,我们这个古老的学科拥有最长的奋斗历史;她深刻地记载着,我们的解剖学科在包括生物医学、人类学等诸多学科发展进步中起到了最重要的支柱作用;她深刻地记载着,我们的队伍在奋斗中培养造就了大批跨世纪的各类人才,特别是该领域的领军人才.

基因治疗巴金森病大鼠模型的实验研究

基因治疗巴金森病大鼠模型的实验研究首都医科大学北京神经科学研究所徐群渊田竟生张进禄巴金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）传统使用的各种药物（包括Ｌ－ｄｏｐａ）或手术定位损毁基底神经节传出通路治疗均无满意疗效且有较大副作用。国内外均已有...

运用HRP逆行追踪法对家兔脊髓小脑束起始细胞的研究

本文在11只家兔小脑内,进行单侧或双侧辣根过氧化物酶注射,以研究脊髓各部标记神经元的分布。同时,为确定胸髓以下这些神经元轴突是否在脊髓内交叉上行,其中4只家兔在注射前,还作了下胸髓的一侧半断。标记的脊髓小脑束起始细胞在脊髓中分布甚广。位于颈髓的有:1.中央颈核(C_(1~4));2.Ⅵ层内侧部细胞(C_(2)~T_(1));3.Ⅶ层中央部细胞(C_(4~8));4.后角Ⅳ~V层细胞(C_(5~8))。胸髓以下的标记细胞可分两大类:1.具有不交叉上行轴突的细胞为:(1)背核(T_(2)~L_(4));(2)后角Ⅳ~Ⅵ层细胞(T_(2)~L_(6))。2.具有交叉越边上行轴突的细胞则包括:(1)脊髓前角边缘细胞(L_(3~6));(2)Ⅶ层内侧群细胞(L5以下骶尾髓);(3)后角V层细胞(骶尾髓);(4)前角Ⅶ~Ⅷ层细胞(骶尾髓)。家兔脊髓小脑束起始细胞的分布和轴突投射特点,与猫相类似。这对进一步用家兔研究脊髓小脑系统的解剖学和生理学打下一定基础。

关于脊髓小脑束结构的研究

本研究以描、大鼠和家兔为实验动物,在光镜和电镜水平,应用包括各种酶及凝集素组织化学、荧光组织化学、免疫细胞化学及放射自显影等神经束路追踪技术,系统观察了在小脑对随意运动控制机制中起主要作用的脊髓小脑束的结构详情。特别是针对脊髓中新发现的同小脑投射的神经元细胞群,研究了它们在脊髓小脑束中的地位和分类,从而对脊髓小脑束的组成和功能提供了新的概念。

氯化锰对大鼠中脑多巴胺能神经元毒性的研究

本文通过锰诱导多巴胺能神经元凋亡及其可能的神经化学机制的研究 ,进而探讨锰中毒与帕金森病发病的相互关系。分离培养大鼠中脑黑质多巴胺能神经元用不同剂量 Mn Cl2 处理后 ,用荧光染料进行染色 ,观察了凋亡神经元数量。用腹腔注射及脑内单侧注射 Mn Cl2 染毒方法处理大鼠 ,并采用脑内微透析技术和高效液相色谱 -电化学方法 (HPLC-ECD)在活体检测了术后不同时间的纹状体细胞外液中 DA及其代谢产物 DOPAC、HVA以及 5 -HT的代谢产物 5 -HIAA等的含量 ;同时作丙二醛含量和过氧化物歧化酶活性检测。结果发现 ,凋亡神经元的细胞核缩小、不规则、染色质呈块状深染 ,凋亡细胞数量随 Mn Cl2 剂量升高而增多。Mn Cl2 脑内注射侧与注射对侧相比 ,术后 4、7、10、2 0 d的 DA、DOPAC、HVA和 5 -HIAA含量均有不同程度的降低。腹腔染毒高、低剂量组 2 0 d后大鼠整体纹状体匀浆的上述指标也明显降低。此外 ,染毒大鼠纹状体中丙二醛水平随染毒剂量增高而增高 ,过氧化物歧化酶活性随染毒剂量增高却下降。以上结果表明 。

胎儿脑组织体外保存获取神经干细胞的时限

目的 探讨人胎儿脑海马组织体外保存不同时限后培养获取神经干细胞的可行性。 方法 利用无血清培养 ,从死亡后孵育在 4℃Hank液 0h、4h、2 4h、4 8h、72h及 96h的胎儿海马分离细胞 ,在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学方法检测培养细胞的神经上皮干细胞蛋白 (nestin)表达、经BrdU孵育后的BrdU表达以及诱导分化后的神经元标记 (tubulin)或星型胶质细胞抗原 (GFAP)表达 ;比较不同时限的细胞在Nestin的表达、增殖能力和诱导分化后神经元及胶质细胞比例的差异。 结果 从保存在 4℃Hank液 72h以内的各组胎儿海马中均可获得具有连续增殖能力的神经球 ,培养出的细胞Nestin表达为阳性 ,通过BrdU的摄取表明细胞处于活跃的有丝分裂状态 ,在此期限内各组之间无明显差异 ;诱导分化后的神经元和胶质细胞比例在各组之间亦相似 ;但随着在Hank液中孵育时间的延长 ,所获得的神经球数量呈减少趋势 ;在 96h组则未能获得神经球。 结论 人胎儿海马组织在 4℃Hank液中孵育 72h内可培养出呈神经球样生长的神经干细胞 。

基于3D Slicer的成年大鼠侧脑室外侧壁脑室下区全部细胞核的三维重建

本研究以连续半薄切片的组织学技术结合计算机图形学的三维可视化技术 ,利用 3DSlicer[1] 工具软件重建出成年大鼠SVZ部位一百多个细胞核表面特征的三维数学化图像。与国内以往的研究往往是重建出单个细胞相比 ,重建出一个部位的全部细胞核、特别是一百多个细胞核在我国的文献中似乎还没有出现过。

成年大鼠及猴骨髓基质细胞的体外培养及向神经元的分化诱导

为了探讨成年动物骨髓基质细胞的体外培养和神经元诱导及其不同培养时程对外源基因的转染率,本实验采用直接和间接两种方法分离、培养成年大鼠和猴的骨髓基质细胞。在体外进行神经元诱导,用免疫细胞化学方法进行鉴定;用携带酪氨酸羟化酶基因的逆转录病毒载体转染体外培养第1～10代大鼠骨髓基质细胞,经免疫细胞化学鉴定并计算转染率。结果显示,成年大鼠和猴骨髓基质细胞以未分化状态至少可持续培养20余代,部分细胞表达干细胞的标志蛋白nestin,经BrdU孵育后呈BrdU抗体免疫阳性;经诱导后细胞具有典型的神经元形态,表达神经元的特异性蛋白NeuN;培养第3代至6代的骨髓基质细胞对外源性基因的转染效率较其他时程明显增高。实验结果说明,骨髓基质细胞可以在体外培养并被诱导成为神经元,它还可携带外源性治疗基因。

α-synuclein-EGFP在体外培养SH-SY5Y细胞中过表达对包涵体形成及线粒体结构改变的影响

为了观察 α-synuclein-p EGFP真核载体在 SH-SY5 Y细胞内表达状况及其对细胞的影响 ,本研究用 L ipofect AMINE法转染 SH-SY5 Y细胞 ,用荧光显微镜检测报告基因表达产物 EGFP,用荧光免疫细胞化学法检测α-synuclein蛋白表达以及用 H-E染色、光学显微镜观察转基因表达产物在细胞内的积聚 ,电镜观察转基因细胞超微结构形态学变化 ,rhodamine12 3染色、荧光显微镜检测线粒体跨膜电位变化。结果证明 ,该载体转染 SH-SY5 Y细胞后 ,在细胞内同时表达报告基因和目的基因 ;外源基因的表达产物可在细胞内积聚形成包涵体并引起线粒体结构和功能改变。本研究结果提示 ,本实验获得的细胞模型可模拟 Parkinson病发生过程中一些基本的神经病理学特点 ,可为进一步探讨

6-羟多巴胺纹状体内注射制作大鼠帕金森病模型的研究

目的 为拓宽 6 OHDA损毁多巴胺能神经元所制备大鼠帕金森病模型的应用范围 ,采用多位点纹状体内注入 6 OHDA的途径来制备模型。方法 研究用SD大鼠 ,两个针道内四点定位注射 ,每点注射 3 μg/ μl 6 OHDA3 μl。结果 术后两周出现缓慢旋转 ,4周旋转行为达到 7转 /分并保持稳定 ;形态学染色可见损毁 1周后注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫组化阳性细胞减少 2 0 % ,2周后减少 3 8% ,3～ 4周减少 70 %以上 ,6周后损伤趋缓。高效液相 电化学法活体检测纹状体内多巴胺的代谢产物 3、 4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸 (HVA) ,发现注射侧和非注射侧相比含量分别下降98 3 3 %和 96 0 5 % ;组织匀浆检测损毁侧黑质多巴胺含量下降了 73 %以上 ,3、 4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)含量下降60 %。结论 纹状体内注射 6

应用壳聚糖导管生物活性载体系统修复大鼠脊髓损伤

目的研究壳聚糖导管 生物活性载体系统诱导神经再生的情况。方法 5 0只成年雌性Wister大鼠脊髓T7— 9节段行脊髓右侧半离断 ,分别植入含有 ( 4 0只 )或不含有 ( 10只 )生物活性载体的壳聚糖导管作桥梁 ,缝合硬脊膜 ,恢复脑脊液循环。结果 6—12个月后 ,在含有生物活性载体的导管中脊髓缺损部位神经再生完成 ,经过WGA HRP进行顺行神经束路追踪 ,发现再生轴索已到达缺损部位的远端 ,并越过导管远端与宿主的界面进入损伤平面以下脊髓组织 ,超微结构观察到典型的神经纤维、髓鞘结构和突触。在不含生物活性载体的导管中 ,再生的轴突很少 ,且没有轴突穿过导管中点。结论内含生物活性载体的生物材料导管可诱导大鼠脊髓神经轴突的再生。

大鼠脑内多巴胺水平与脑电11mHz超慢波谱系功率的相关性

背景:脑内神经递质的检测是神经科学研究的重要内容,目前缺少在无创状态下检测脑内递质的可靠手段。目的:在脑内递质水平正常和低于正常的情况下,分析11mHz超慢波功率与多巴胺水平是否存在对应关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/12在首都医科大学北京神经科学研究所实验室完成。材料:选用体质量200～250g的雌性SD大鼠100只,按随机数字表法分为3组,模型组40只,对照组30只,正常组30只。方法:将模型组和对照组大鼠经腔注射麻醉,置于脑立体定位仪进行开颅手术,分别给予2组动物左侧脑黑质部位注射10g/L6-羟基多巴胺和生理盐水各8μL。正常组不作任何处置。主要观察指标:用脑涨落图仪检测3组大鼠脑内11mHz超慢波谱系的功率,同时用高效液相色谱法检测大鼠脑内多巴胺水平,并将2种方法的检测结果进行相关性分析。结果:与正常组比较,对照组大鼠脑内的多巴胺水平左脑下降26.98%,右脑上升16.92%;11mHz谱系的功率值左脑下降64.69%,右脑下降57.67%。与正常组比较,模型组的多巴胺水平左脑下降83.42%,右脑上升27.48%;11mHz谱系的功率值左脑下降83.39%,右脑下降76.62%。3组大鼠左、右脑多巴胺水平与11mHz谱系的功率值均呈正相关(P<0.05～0.01)。结论:两种方法的检测结果有高度相关性,即11mHz谱系的功率值与多巴胺的生化水平有高度相关性。说明在脑内递质水平正常和低于正常的情况下,11mHz谱系功率与多巴胺水平的对应关系是成立的。脑涨落图仪的检测结果准确可靠,用分析脑电超慢谱系的方法来检测脑内神经递质是可行的。

GDNF转基因成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型

为了观察表达胶质细胞系源性神经营养因子 (GDNF)的基因工程细胞在脑内移植后对帕金森病大鼠的治疗作用 ,将 6-羟基多巴胺脑内定位单侧 (损伤侧 )注射制备大鼠帕金森病模型。随机将动物分为实验组 (2 0只 )和对照组 (15只 ) ,分别植入GDNF和 Lac Z转基因的原代培养大鼠成纤维细胞于损伤侧纹状体内 ,动态观察动物单侧旋转行为以及多巴胺及其代谢产物 3 ,4-二羟苯乙酸和高香草酸含量的变化。结果表明 :实验组帕金森病大鼠单侧旋转行为明显减少 ,为移植前旋转圈数的 (64 .8± 5 .8) % (P<0 .0 5 ) ;其纹状体内多巴胺含量显著提高 ,恢复至移植前水平的 (14 .5± 2 .2 ) % (P<0 .0 5 ) ,而对照组仅为 (1.92± 0 .15 ) % ;转基因细胞在脑内可存活 1年以上。本研究结果提示 GDNF基因治疗对大鼠帕金森病具有潜在的临床应用价值。

免疫磁珠体外纯化人胎脑中CD133阳性干细胞的实验研究

为了探讨免疫磁珠体外纯化人胎儿脑内 CD13 3阳性细胞的可行性 ,本研究取人胎儿脑室下区并制备单细胞悬液 ,采用磁珠分选法选择 CD13 3阳性细胞群 ,台盼蓝染色观察活力并采用流式细胞仪鉴定纯化前后 CD13 3的阳性表达率。结果显示 ,分选后所得细胞纯度为 ( 85 .5 7± 1.66) % ,回收率为 ( 62 .3± 18) % ,纯化前后细胞活力无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论 :联合应用CD13 3表面标志及免疫磁珠分选系统可有效地从人胎儿脑组织中直接分离得到高纯度的 CD13 3阳性干细胞 。

胎儿海马神经干细胞的体外培养及神经元前体细胞的纯化

目的 从人胎儿海马分离培养具有自我更新和多向分化能力的神经干细胞 ,并从中纯化神经元前体细胞。 方法 利用无血清培养从胚胎 4个月的胎儿海马区分离细胞 ,并在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白 (nestin)的表达、经BrdU孵育后的BrdU表达 ;比较两种诱导分化方法所获得的神经元和胶质细胞的比例差异 ;利用单细胞克隆技术纯化神经元前体细胞。 结果 分离的细胞具有连续克隆能力 ,在体外培养了 16个月 ,传了 4 3代 ;细胞冻存、复苏后仍保持干细胞特性 ;培养的细胞呈Nestin阳性 ,在BrdU孵育后呈BrdU阳性 ,诱导分化后的细胞能够表达Tubulin、NeuN或GFAP ;利用无血清诱导所得到的分化细胞中神经元的比例约占 80 % ,而血清诱导的分化细胞中胶质细胞的比例则大于 90 %。利用单细胞克隆技术可从神经球中纯化的细胞表达Nestin ,并且全部分化成神经元。 结论 从胎儿海马区分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能 ,属于神经干细胞 。