CCK-8对TNF-α诱导大鼠RSC-364细胞MMPs/TIMP-1的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对TNF-α诱导的大鼠RSC-364细胞MMPs/TIMP-1的影响。方法采用ELISA观察TNF-α作用下CCK-8对RSC-364细胞MMP-3、-9、-1及TIMP-1分泌的影响,比较MMP-3、-9、-1和TIMP-1比值变化,用RT-PCR观察CCK-8对TNF-α作用下RSC-364细胞MMP-3、-9 mRNA表达的影响。结果静息和CCK-8单独孵育细胞后未检测到MMP-3和MMP-9,产生少量MMP-1和TIMP-1,表达MMP-3和MMP-9 mRNA甚微,CCK-8有抑制TNF-α诱导细胞MMP-3、-9、-1分泌和MMP-3、-9 mRNA表达的作用,并且降低TNF-α所致的MMPs/TIMP-1比值的上升。结论 CCK-8下调MMPs基因表达,减少MMPs分泌,使MMPs与TIMP-1比值下降,从而降低MMPs活性,表明CCK-8能调节滑膜细胞分泌功能,提示CCK-8在类风湿关节炎发病过程中可能具有调控作用。

CCK-8降低TNF-α诱导的大鼠RSC-364细胞增殖及p38 MAPK活性

目的 观察硫酸化八肽胆囊收缩素（CCK-8）对TNF-α诱导大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364细胞增殖及丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）活性的影响.方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;Western blot技术检测p38 MAPK活性.结果TNF-α（50 μg/L）孵育5 min,p38 MAPK磷酸化水平升高,15 min达高峰,2 h恢复基础水平;孵育15 min时,p38 MAPK磷酸化程度随其剂量（10、25、50 μg/L）的增大而增加.CCK-8（10^-10～10^-6 mol/L）剂量依赖性降低TNF-α诱导的细胞增殖及磷酸化p38 MAPK的激活,此作用可被CR1409和CR2945拮抗.SB203580（10 μmol/L）可抑制TNF-α引起的细胞增殖.结论 CCK-8通过降低p38 MAPK磷酸化水平而抑制TNF-α激活的RSC-364细胞增殖,该作用可能由CCK-A和CCK-B受体共同介导.

CCK-8抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性的cAMP-PKA通路研究

目的:用cAMP激动剂forskolin和PKA抑制剂H-89,探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞(PIM s)核因子-κB(NF-κB)活性的cAMP-PKA信号通路机制。方法:分离纯化大鼠PIM s。用电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测大鼠PIM s中NF-κB活性,用W estern b lotting分析IκB-α蛋白水平。结果:正常对照组大鼠PIM s核内未检测到与特异性寡核苷酸探针相结合的NF-κB,LPS组细胞内NF-κB活性明显高于正常对照组(P<0.01),胞浆中IκB-α水平显著低于正常对照组(P<0.01)。CCK组和Fsk组细胞内NF-κB活性和胞浆中IκB-α含量均无明显差异(P>0.05)。CCK+LPS组和Fsk+LPS组,细胞内NF-κB活性均低于LPS组(P<0.05),IκB-α含量均高于LPS组(P<0.01)。LPS+CCK+H-89组NF-κB活性高于CCK+LPS组(P<0.01),而IκB-α蛋白水平低于CCK+LPS组(P<0.01)。结论:cAMP-PKA信号通路的活化可抑制LPS诱导的大鼠PIM s细胞内NF-κB活性升高和IκB-α蛋白水平的降低,CCK-8的抗炎作用是通过激活cAMP-PKA信号通路进而抑制NF-κB活性来实现的。

八肽胆囊收缩素对TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6的作用及其可能的分子机制(英文)

目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(sCCK -8)对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC -364 IL-6mRNA表达及核因子NF-κB的影响及其可能的受体机制。方法:大鼠滑膜细胞株RSC -364经TNF-α(10μg/L)、sCCK-8(10-8-10-6mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺(2 mg/L)及溶剂单独或联合孵育3 h,用RT-PCR检测细胞IL-6、CCK-AR及CCK-BR mRNA的表达,孵育1 h,用电泳迁移率检测NF-κB活性,孵育30min,用Western blot-ting检测胞浆IκB蛋白表达。结果:RSC -364细胞固有表达CCK-A/B受体,sCCK-8(10-8-10-6mol/L)使IL-6、CCK-AR和CCK-BR mRNA表达进一步增高,明显增加TNF-α诱导的NF-κB活性,降低胞浆中IκB蛋白水平,并可被丙谷胺所拮抗。结论:sCCK-8通过NF-κB途径上调TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞IL-6 mRNA表达,此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现,提示CCK-8在类风湿性关节炎(RA)发病过程中可能具有调控作用。

CCK-8对LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10表达的影响

目的:观察LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(CCK-8)对其表达的影响。方法:将小鼠分为4组:对照组、LPS组(腹腔注射LPS)、LPS+CCK-8组(注射LPS前30 min腹腔注射CCK-8)及CCK-8组(单独注射CCK-8)。用ELISA及PT-PCR方法检测各组小鼠血清、肺组织中IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的含量及mRNA的表达情况。结果:LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10蛋白及mRNA的表达增加,预先注入CCK-8可显著抑制IL-1β、IL-6的表达,并使IL-4、IL-10的表达进一步增加。结论:CCK-8可能通过抑制LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6的表达和进一步增加IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程,从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的炎症反应

目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对脂多糖(lipopo- lysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠炎症反应的影响。方法复制LPS致ALI小鼠模型。实验动物随机分为生理盐水对照组、LPS组(腹腔注射LPS)、LPS+CCK-8组(注射LPS前30 min腹腔注射CCK-8)及CCK-8组(单独注射CCK-8)。用酶联免疫吸附法(ELISA)及逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)检测不同时间点各组小鼠血清、肺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的含量及mRNA表达情况。观察各组肺组织光镜病理改变。结果腹腔注射LPS可成功复制ALI小鼠模型,肺组织病理显示,在LPS组12h时可见肺间质充血、水肿,大量炎性症细胞浸润,腹腔预注射CCK-8可明显改善肺组织病理变化;腹腔注射LPS可使小鼠血清及肺组织中IL-1β、IL-6表达增加,分别于注射后2h及4h达到高峰,预先注入CCK-8可显著抑制IL-1β、IL-6的表达。结论CCK-8可能通过抑制ALI小鼠IL-1β、IL-6的表达参与抗炎反应过程,从而减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应。

八肽缩胆囊素调节脂多糖诱导ECV-304细胞核转录因子-κB表达的受体机制研究

目的探讨八肽缩胆囊素(CCK 8)调节脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞核转录因子κB(NFκB)表达的受体机制。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV 304;用溶剂(生理盐水)、LPS、CCK 8、CCK受体(CCK R)非特异性拮抗剂丙谷胺、CCK A受体(CCK AR)特异性拮抗剂CR 1409、CCK B受体(CCK BR)特异性拮抗剂CR 2945分别或联合刺激ECV 304细胞1 h。用蛋白质免疫印迹法(W esternb lot)检测NFκB p65蛋白表达;用免疫细胞化学技术检测NFκB p65蛋白核移位。结果与溶剂对照组比较,LPS可诱导ECV 304细胞NFκB p65蛋白核移位,且其表达明显上调;CCK 8可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的核移位及表达上调;CCK受体拮抗剂可翻转CCK 8的上述抑制效应,其中CR 1409、CR 2945、丙谷胺作用依次增强。结论CCK AR和CCK BR参与介导了CCK 8对LPS诱导ECV 304细胞NFκB表达的抑制作用,其中CCK BR的作用比CCK AR稍强。

超声评价抗肿瘤坏死因子α制剂对强直性脊柱炎跟腱附着点炎的疗效

目的通过超声评价抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)制剂对于强直性脊柱炎(ankylosing spodylitis,AS)患者跟腱附着点炎的疗效。方法对比32例应用抗TNF-α制剂的治疗组患者与29例对照组患者的跟腱附着点超声影像及红细胞沉降量(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)等炎性指标的变化。结果与对照组比较,应用抗TNF-α制剂的AS患者的跟腱附着点处的超声评分及临床评分显著下降(P<0.01);ESR及CRP的变化差值显著高于对照组(均P<0.01)。结论抗TNF-α制剂可显著改善AS患者跟腱附着点处的炎症程度,并通过超声检查得以印证。

CCK-8对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞增殖的影响及相关机制。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞增殖的影响;应用Westernblot检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞p38MAPK磷酸化的影响。结果CCK-8剂量依赖性(10-12、10-10、10-8、10-6mol.L-1)抑制IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖;CCK-8剂量依赖性(10-10、10-8、10-6mol.L-1)抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞p38MAPK的磷酸化;且CCK-8A、B受体拮抗剂CR1409或CR2945均减弱了CCK-8的抑制效应。结论CCK-8剂量依赖性抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖,该作用由CCK-AR和CCK-BR介导,并可能通过抑制p38MAPK磷酸化而实现的。

Th1/Th2细胞因子在类风湿关节炎中的表达及意义

采用ELISA法测定类风湿关节炎(RA)患者血清Th1/Th2型细胞因子TNF-α、IL-17、IL-10和IL-4水平,并与正常对照组进行比较。结果RA患者血清TNF-α、IL-17、IL-10均显著高于正常对照组,其IL-4与正常对照组比较无统计学差异。认为RA患者血清Th1/Th2型细胞因子表达存在异常,为Th1优势型。

八肽胆囊收缩素对大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-6的影响

探讨八肽胆囊收缩素 (CCK 8)对大鼠滑膜细胞株RSC 36 4分泌IL 6的调控作用。应用ELISA法观察不同浓度梯度的CCK 8对在TNF α或IL 1β诱导下的RSC 36 4分泌IL 6水平的影响。结果显示 :10 -6mol/L、10 -8mol/L浓度的CCK 8可分别促进TNF α或IL 1β诱导 2 4h后RSC 36 4细胞株分泌IL 6 ,而应用CCK受体拮抗剂丙谷胺则可明显抑制这种刺激效应。提示CCK 8可调节滑膜细胞分泌IL 6 ,在类风湿性关节炎的发病机制中可能起潜在的调控作用。

八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364核因子κB活性变化的影响及其受体机制

目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364核因子κB的影响,以及CCK-A/B受体是否参与这一过程。方法:实验于2003-02/2004-02在河北医科大学法医学教研室分子生物学实验室完成。取大鼠滑膜细胞株RSC-364经肿瘤坏死因子α(10 μg/L)、sCCK-8(10-8,10-7,10-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育:①孵育3h,用反转录-聚合酶链反应技术检测细胞CCK-A受体及CCK-B受体mRNA的表达。②孵育1h,用电泳迁移率检测核因子κB相对活性。③孵育30 min,用Western blot检测胞浆IκB蛋白表达的相对水平。结果:①细胞CCK-A受体及CCK-B受体mRNA的表达:RSC-364细胞固有表达CCK-A/B受体,肿瘤坏死因子α(10 μg/L)可使CCK-A受体和CCK-B受体mRNA的表达分别上调148%和173%(P<0.01)。肿瘤坏死因子α和CCK-8(10-8～10-6 mol/L)联合孵育细胞,CCK-A受体和CCK-B受体mRNA表达与肿瘤坏死因子α组相比分别增高47%,56%,30%和57%,13%,24%(P<0.05,0.01)。②核因子κB相对活性:肿瘤坏死因子α组明显高于对照组(294.45±36.48,0,P<0.01);肿瘤坏死因子α+CCK-810-8,10-7,10-6 mol/L组高于肿瘤坏死因子α组(470.69±56.76,489.37±64.95,558.90±74.15,P<0.05,0.01);CCK-8的作用可被丙谷胺减弱(400.79±39.06)。③IκB蛋白表达的相对水平:肿瘤坏死因子α组明显低于对照组(139.43±30.76,220.79±34.58,P<0.01),肿瘤坏死因子α+CCK-810-8,10-7,10-6 mol/L组低于肿瘤坏死因子α组(95.26±8.54,84.15±8.77,63.28±16.13,P<0.05),并可被丙谷胺所抑制(137.22±20.33,P<0.01)。结论:CCK-8对肿瘤坏死因子α诱导的RSC-364核因子κB活性具有正向调节作用,并能降低IκBα蛋白水平,提示CCK-8在类风湿性关节炎发病过程中可能具有调控作用,此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现。

八肽胆囊收缩素对大鼠滑膜细胞株RSC-364 TNF受体基因表达的影响

目的探讨CCK8对RSC364细胞株TNF受体基因表达的影响。方法采用RTPCR法检测不同浓度的八肽胆囊收缩素(CCK8)对在TNF-α诱导下的大鼠滑膜细胞RSC364TNF受体(Tumornecrosisfactorreceptor,TNFR)mRNA表达的影响。结果CCK8在10-6mol/L和10-7mol/L浓度时可抑制TNF-α诱导的TNFR2mRNA在RSC364细胞的表达,且表现了一定的剂量和时间依赖性,CCK受体拮抗剂丙谷胺则可抑制此作用。结论CCK8可抑制TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞RSC364株TNFR2基因的表达。

八肽胆囊收缩素对脂多糖攻击小鼠抗炎症细胞因子表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）攻击小鼠白细胞介素-4（IL-4）、IL-10的动态变化规律，以及八肽胆囊收缩素（CCK-8）对其表达的影响。方法随机将小鼠分组，每组7只。腹腔注射LPS10mg／kg，于攻击后0、2、4、6和12h检测血清、肺组织IL-4和IL-6表达高峰的时间。对照组腹腔注射生理盐水0．2ml；LPS组腹腔注射LPS10mg／kg；LPS＋CCK-8组在注射LPS前30min腹腔注射CCK-8 60μg／kg；CCK-8组腹腔注射CCK-8 60μg／kg。用酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录-聚合酶链反应（PT—PCR）方法检测各组小鼠血清和肺组织中IL-4、IL-10的含量及其mRNA的表达情况。结果LPS攻击后2h血清及肺组织IL-4、IL-6均显著升高，血清IL-4、IL-6于4h和6h达高峰；肺组织IL-4、IL-6则均于6h达高峰。说明LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中IL-4、IL-10的蛋白及mRNA表达均增加；预先注入CCK-8可使IL-4和IL-10的蛋白以及mRNA表达均进一步增加（P均〈O．01）；而单独注射CCK-8对血清、肺组织IL-4、IL-10的表达无明显影响。结论CCK-8可能通过进一步增加LPS攻击小鼠IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程，从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导ECV-304一氧化氮合酶表达的分子抑制作用

目的探讨CCK-8抑制LPS诱导ECV-304 iNOS表达的分子机制。方法培养ECV-304,用溶剂、CCK-8、LPS及CCK受体拮抗剂丙谷胺分别或联合孵育细胞,用W estern b lot检测iNOS蛋白表达,用免疫细胞化学方法检测NF-κB P65蛋白表达与核移位,用RT-PCR检测CCK-AR和CCK-BR mRNA表达。结果①溶剂对照组ECV-304 iNOS蛋白呈低表达;LPS诱导iNOS表达明显上调,CCK-8剂量依赖性抑制LPS的作用,单独CCK-8对其无影响。②ECV-304存在CCK-AR和CCK-BR mRNA表达,其中CCK-BR mRNA表达稍强。LPS可诱导CCK-AR和CCK-BR mRNA表达明显增强。③溶剂对照组NF-κB P65蛋白主要分布于细胞质;LPS孵育1 h后细胞核中NF-κB P65表达明显增加,CCK-8剂量依赖性抑制LPS的作用;单独CCK-8对其无影响。④丙谷胺可翻转CCK-8的抑制作用。结论ECV-304存在CCK-AR和CCK-BR mRNA表达;CCK受体和NF-κB参与介导CCK-8抑制LPS诱导ECV-304 iNOS蛋白表达上调。

CCK-8通过调节κB活性促进大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6转录

目的观察硫酸化八肽胆囊收缩素（sCCK-8）对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6基因表达的影响及核因子NF-κB活性，以探讨CCK-8对类风湿性关节炎（RA）的调控机制。方法大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α、sCCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3h，用RT-PCR检测细胞IL-6 mRNA的表达。孵育1h，用电泳迁移率检测NF-κB活性，孵育30min，用Western blot检测胞浆I-κB蛋白表达。结果sCCK-8（10^-8-10^-6mol／L）明显增加TNF-α诱导的IL-6 mRNA表达及NF-αB活性，呈剂量依赖性，降低胞浆中I-κB蛋白水平，并可被丙谷胺所拮抗。结论sCCK-8在类风湿性关节炎（RA）发病过程中可能具有调控作用。

甘蔗渣亚硫酸钾法制浆特性的研究

进行了蔗渣亚硫酸钾法制浆特性的研究，探讨中性亚钾法的蒸煮工艺和反应历程，比较中性亚钾法、中性亚钾—蒽醌法、碱性亚钾法和中性亚钠法的纸浆性质和漂白性能。实验结果表明，中性或碱性亚钾法可以制得得率高、强度和漂白性能好的蔗渣浆。