miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

CBL教学法在住院医师规范化培训教学中的效果评价

目的评价以案例为导向的教学法(case-based learning,CBL)在住院医师规范化培训教学中的效果。方法选取2021年1—12月在青海大学附属医院老年医学科轮转的全科专业住院医师规范化培训学员40名分为对照组,选取2022年1—12月在青海大学附属医院老年医学科轮转的全科专业住院医师规范化培训学员40名分为观察组,分别施以传统教学法与CBL教学法,比较两组教学效果。结果观察组理论笔试、基本操作、病例分析考核成绩高于对照组;各项专业知识掌握率高于对照组;教学满意度高于对照组;对教学目的和效果评分高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CBL教学法可明显提升老年医学科轮转住院医师规范化培训学员的考核成绩、专业知识掌握程度、教学满意度,提高对教学目的和效果评分。

尼莫地平调控IRS-1对人脑血管外膜成纤维细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨尼莫地平对人脑血管外膜成纤维细胞活力、凋亡的影响及其对胰岛素受体底物-1(IRS-1)的调控机制。方法:体外培养人脑血管外膜成纤维细胞,分为NC组、IFN-α组和共同处理组,其中共同处理组分别采用不同浓度(50、100、200μg/ml)的尼莫地平与IFN-α共同处理人脑血管外膜成纤维细胞,分别记作IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR与Western blot分别检测IRS-1表达;分别将pcDNA、pcDNA-IRS-1转染至细胞,分别将si-con、si-IRS-1转染至细胞随后采用尼莫地平处理细胞,采用上述方法检测细胞活力及凋亡率。结果:NC组、IFN-α组、IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组72 h时细胞活力分别为1.16±0.09、0.71±0.07、0.88±0.06、0.96±0.08、1.03±0.11;细胞凋亡率分别为(3.51±0.32)%、(21.84±2.23)%、(14.39±1.15)%、(9.18±1.03)%、(8.37±0.94)%;IRS-1蛋白表达水平分别为0.67±0.06、0.19±0.03、0.33±0.04、0.47±0.05、0.59±0.06,NC组、IFN-α组、IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组上述指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-α+pcDNA组与IFN-α+pcDNA-IRS-1组72 h时细胞活力分别为0.76±0.06、1.04±0.07;细胞凋亡率分别为(20.75±2.07)%、(11.35±1.43)%,IFN-α+pcDNA组与IFN-α+pcDNA-IRS-1组上述指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-α+Nimo+si-con组与IFN-α+Nimo+si-IRS-1组72 h时细胞活力分别为1.03±0.09、0.79±0.06;细胞凋亡率分别为(10.75±1.08)%、(15.36±1.25)%,IFN-α+Nimo+si-con组与IFN-α+Nimo+si-IRS-1组上述指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:尼莫地平可能通过上调IRS-1表达从而影响人脑血管外膜成纤维细胞增殖及凋亡。

老年高血压小脑出血的小骨窗手术治疗

目的探讨老年高血压小脑出血的临床特点、手术治疗方法和效果。方法对30例行小骨窗手术治疗的老年高血压小脑出血患者的临床资料进行回顾性分析。结果术后发生再出血1例,肺部感染3例,饮水呛咳12例,共济失调10例。术后6个月,GOS评分:恢复良好4例,中残13例,重残9例,植物生存2例,死亡2例。结论老年高血压小脑出血病情危重,行小骨窗手术治疗创伤小,止血彻底,有助于改善患者预后。

下调AQP-4对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的干预效果及作用机制研究

目的探究下调AQP-4对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的干预效果及作用机制。方法选取40只SD健康雄性大鼠,分10只为正常组,其余30只SD健康雄性大鼠分为模型组、下调AQP-4组、上调AQP-4组,对四组大鼠分别进行干预。使用Western blot法检测AQP-4、BMP4、P-Smad表达,使用散射比浊法检测TNF-α、IL-1β水平。对各组大鼠学习记忆能力、神经功能。脑组织含水量进行检测。结果与正常组比较,其他三组大鼠各时间点逃避潜伏期较长,穿越平台次数较低(P<0.05);与模型组和上调AQP-4组相比,下调AQP-4组大鼠各时间点逃避潜伏期较短、穿越平台次数高(P<0.05);与正常组相比,模型组、上调AQP-4组、下调AQP-4组神经功能评分上升,脑组织含水量增多(P<0.05);与模型组和上调AQP-4组相比,下调AQP-4组神经功能评分下降,脑组织含水量减少(P<0.05);与正常组比较,其他三组大鼠TNF-α、IL-1β水平升高(P<0.05);与模型组和上调AQP-4组相比,下调AQP-4组大鼠TNF-α、IL-1β水平下降(P<0.05);与正常组比较,其他三组大鼠AQP-4表达上升、BMP4、P-Smad表达下降(P<0.05);与模型组和上调AQP-4组相比,下调AQP-4组大鼠AQP-4表达下降、BMP4、P-Smad表达上升(P<0.05);与正常组比较,其他三组大鼠Na^(+)、P-dp含量上升(P<0.05);与模型组和上调AQP-4组相比,下调AQP-4组大鼠Na^(+)、P-dp含量下降(P<0.05)。结论下调AQP-4能够通过BMP4/Smad通路对脑缺血再灌注损伤模型大鼠进行干预,修复脑内血脑屏障,改善大鼠学习记忆能力,降低大鼠的炎症反应。

BDNF对大鼠骨髓源神经干细胞诱导分化的影响

目的观察脑源性神经生长因子(Brain Derived Neurotrophic Factor,BDNF)对体外培养的Wistar大鼠骨髓源神经干细胞诱导分化的影响。方法运用无血清培养基成功培养Wistar大鼠骨髓源神经干细胞,并对分离获得的悬浮生长的神经细胞球,运用免疫组织化学法检测CD133和Nestin表达情况。采用10%胎牛血清诱导其分化,并添加10 ng/m L BDNF,分化7 d后,采用免疫荧光细胞化学染色方法检测分化后GFAP、Map2、β-tubulin III、Galc的表达情况。结果大鼠骨髓基质细胞在无血清培养基中,呈悬浮状态生长,形成细胞球,经免疫荧光检测,细胞球表达CD133和Nestin。将细胞球转入含血清培养基分化7 d后,表达GFAP的阳性细胞占61.78%±3.54%,Map2阳性细胞占6.28%±0.80%,β-tubulin III阳性细胞占7.43%±1.09%,Galc阳性细胞占2.79%±0.62%。添加10 ng/m L BDNF后,表达GFAP的阳性细胞占62.76%±2.94%,Map2阳性细胞占14.29%±2.45%,β-tubulin III阳性细胞占13.13%±2.42%,Galc阳性细胞占2.97%±0.82%。分别经两独立样本t检测,BDNF组分化为Map2及β-tubulin III阳性细胞,显著高于血清组(P<0.05),但BDNF组分化为GFAP及Galc阳性细胞与血清组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论 BDNF可显著提高Wistar大鼠骨髓源神经干细胞分化为神经元的比例。

成年小鼠视网膜穆勒细胞向神经干细胞转化的实验研究

目的探讨Muller细胞在视网膜损伤后能够转化为神经干细胞,并经诱导后可以分化、新生视网膜中多种类型的神经元,研究该培养细胞是否具有多能向分化能力。方法取72只雌性成年SD小鼠建立视神经切断模型,采用酶解法对SD小鼠视网膜Muller细胞进行消化传代提纯。取第4代胰酶消化过的视网膜Muller细胞,用含有碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、表皮生长因子(EGF)的改良的Eagle培养基(DMEM)-F12培养基培养5d,用含有0.5μmol/L RA、1μg/L BDNF与0.5%胎牛血清的DMEM培养基进行10d诱导分化,采用免疫荧光染色法对去分化及再分化后的细胞进行鉴定。结果免疫荧光染色鉴定3~4代培养的Muller细胞结果显示,特异性标记物谷氨酰胺合成酶(GS)和谷氨酸转运体(GLAST)抗体表达阳性,呈现红色,荧光染色GS和GLAST抗体表达阳性细胞比例分别为(92.76±4.28)%与(95.28±2.79)%。对去分化后的Muller细胞球给予免疫荧光染色鉴定,结果显示特异性标记物巢蛋白(Nestin)表达阳性,呈现红色,荧光染色阳性细胞比例为(95.37±1.46)%。免疫荧光染色鉴定去分化后的Muller细胞球,结果显示神经胶质细胞特异性标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,呈绿色,荧光染色阳性细胞比例为(10.28±3.37)%。细胞抗5溴-2脱氧尿苷(BrdU)的表达阳性,呈现红色,荧光染色阳性细胞比例为(90.44±4.23)%。免疫荧光染色鉴定诱导分化后的Muller细胞球,结果显示神经节细胞的特异性标记物Thy1.1表达阳性,呈现绿色,主要为轴突和细胞质,荧光染色阳性细胞比例为(21.25±4.62)%。结论视网膜Muller细胞是一种视网膜干细胞潜在来源细胞,细胞因子刺激能够使体外培养的视网膜Muller细胞获得干细胞特征。

脑膜瘤合并海绵状血管畸形1例报告

患者,女性,35岁,因反复头痛2月,加重10余天于2014年11月19日入院。家族中无类似病史。入院神经系统查体提示右侧肢体肌力4级,右侧肢体浅感觉较对侧减退。头颅MRI提示：左侧颞部可见一团块状等T1等T2信号影,边界清楚,以宽基地附着于左侧颞部,大小约58 mm×59 mm×43mm,增强后病灶呈明显强化,其内可见斑片状低信号区,病灶周边可见水肿信号影,左侧侧脑室受压。

Twf1基因对心肌细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响研究

目的探讨抑制Twf1基因表达对高糖诱导的心肌细胞增殖、凋亡及NF-κB信号的影响。方法高糖刺激H9c2细胞,将H9c2细胞分为对照组(5.5 mmol/L的葡萄糖处理细胞)、NC组(瞬时转染无干扰作用的si RNA后用5.5 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)、高糖组(瞬时转染无干扰作用的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)和Twf1-siRNA组(瞬时转染干扰Twf1表达的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)。Western blotting检测蛋白表达,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量。结果高糖可引起H9c2细胞Twf1表达升高,转染Twf1-siRNA后H9c2细胞Twf1的表达明显降低;高糖组细胞活力低于NC组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);Twf1-siRNA组的细胞活力高于高糖组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均低于高糖组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制H9c2细胞Twf1基因表达可逆转高糖诱导的细胞活力降低及凋亡的增加,其机制可能与细胞内ROS含量降低及NF-κB信号下调有关。

补体应答基因32对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭作用的影响

目的观察补体应答基因32（RGC32）对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭作用的影响。方法采用5一乙炔基．2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）增殖实验、膜联蛋白V（AnnexinV）-异硫氰酸荧光素（FITC）细胞凋亡流式检测和Transwell侵袭实验分别检测RGC32基因表达对U251细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果RGC32基因过表达促进U251细胞的增殖和侵袭，使其分别上升56．52％和119．05％（P〈0．05），而对细胞的凋亡无明显影响（P〉0．05）；RGC32基因沉默则会抑制U251细胞的增殖和侵袭作用，使其分别降低43．47％和65．32％（P〈0．05），同时促进U251细胞的凋亡，使凋亡比例上升了128．57％（P〈0．05）。结论RGC32基因的异常表达可能是神经胶质瘤的重要致病机制之一，通过靶向性抑制RGC32基因的表达可以有效地促进神经胶质瘤的凋亡和抑制其增殖和侵袭。

标准大骨瓣减压术在高海拔地区大面积脑梗塞中的应用

目的:探讨标准大骨瓣减压术在西宁地区大面积脑梗塞中的应用。方法:对2013年8月—2016年1月收住青海大学附属医院的29例大面积脑梗塞患者进行标准大骨瓣减压手术治疗,对其资料进行分析,观察其手术疗效。结果:29例患者中,恢复良好8例,轻度残废12例,重度残废7例,死亡2例。结论:在高海拔地区,运用标准大骨瓣减压术是治疗大面积脑梗塞的有效方法,可明显降低死亡率,改善预后。

早期开颅显微手术治疗高原地区高血压脑出血临床分析

目的:探讨早期开颅显微手术治疗高原地区高血压脑出血的临床效果。方法:选取我院在2014年12月—2015年12月间收治的56例高血压脑出血患者,随机分为观察组(早期开颅显微手术)和对照组(早期传统开颅手术),观察治疗效果。结果:观察组取得的整体治疗效果明显优于对照组(P<0.05),有统计学意义。结论:早期开颅显微手术治疗高原地区高血压脑出血患者效果显著,可以有效的清除血肿,并且手术对患者造成的创伤比较小,可以快速进行止血,不会对患者的脑组织产生不利的影响,值得临床推广和应用。

高海拔地区地塞米松对大鼠脑损伤后脑水肿与水通道蛋白之间表达影响的研究

目的:探讨高海拔地区SD大鼠脑损伤后脑水肿与水通道蛋白(AQP4)之间的关系,并观察常规剂量地塞米松对脑损伤后脑水肿的效果,为西宁地区颅脑外伤后脑水肿的发生、发展及常规剂量地塞米松治疗脑水肿提供理论依据和实验基础。方法:将144只SD大鼠随机分为4组:空白组、假手术组、对照组及地塞米松组,每组各36只,制备SD大鼠重型颅脑损伤模型,并使用地塞米松进行治疗,分别于不同时间点对模型大鼠进行灌注取脑,对各组模型大鼠脑组织进行免疫组化染色,观察各组大鼠脑水肿变化情况,同时收集实验相关数据。结果:对照组大鼠脑组织AQP4表达累积光密度值高于地塞米松组(P<0.05),明显高于假手术组及空白组(P<0.05)。地塞米松组大鼠脑组织AQP4表达累积光密度值高于假手术组及空白组(P<0.05)。假手术组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组与地塞米松组的大鼠脑组织标本于伤后AQP4表达上调,且对照组于24h、72h及168h的表达水平较高。结论:高海拔地区SD大鼠重型颅脑损伤模型的脑水肿高峰期为伤后72h,伤后168h恢复至低于24h水平;高海拔地区SD大鼠重型颅脑损伤模型脑水肿的进展过程与AQP4表达的变化规律呈正相关;高海拔地区地塞米松对SD大鼠重型颅脑损伤模型的脑水肿有缓解作用,对AQP4的表达有负性调节作用。