血流感染病原菌的分布与耐药性分析

目的了解上海长海医院血流感染患者的病原菌分布及其对抗菌药物的耐药性,为临床合理用药提供依据。方法采用自动化仪器法和纸片扩散法(K-B法)对分离于2013年1月至2014年12月的菌株进行药物敏感性试验,参照2014版CLSI M100-S24标准判断药敏结果,替加环素的判读参照FDA标准,头孢哌酮-舒巴坦的判读参照头孢哌酮标准(2014年CLSI M100-S24)。结果从血流感染患者中共分离出非重复细菌1 048株,排名前3位的为大肠埃希菌(29.5%)、凝固酶阴性葡萄球菌(15.8%)和肺炎克雷伯菌(13.8%)。细菌总数位于前5位的科室分别为消化内科、血液内科、普外科、泌尿外科和感染科。不同科室分离出的细菌种类和数目不同。药敏结果显示,产超广谱β内酰胺酶(ESBL)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别为63.8%和38.6%,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌占该菌总数的77.6%。泌尿外科分离的大肠埃希菌对头孢菌素耐药率高于总体水平,而消化内科分离的大肠埃希菌对β内酰胺类-酶抑制剂复合制剂和碳青霉烯类抗生素的耐药率高于总体水平和其他科室。血液内科、泌尿外科和神经外科分离的凝固酶阴性葡萄球菌对甲氧西林的耐药率较高,神经外科分离菌耐药率更为100%。烧伤监护室的肺炎克雷伯菌对所有检测抗菌药物的耐药率均高于总体水平,消化内科的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类和替加环素的耐药率高于总体水平。结论不同科室分离出的血流感染细菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性呈现不同特点,应加强监测各重点病区的病原菌分布及其耐药性,以指导抗生素的合理应用。

缺血后适应对大鼠移植心脏心肌细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后适应对大鼠移植心脏缺血再灌注时心肌细胞凋亡及对抗凋亡基因Bcl-2(简称Bcl-2)、凋亡基因Bax(简称Bax)蛋白表达的影响。方法:30只Lewis大鼠随机分成3组,每组10只,供体、受体各5只。假手术组:仅行腹部开关手术,不行心脏移植;模型组:行心脏移植术;后适应组:行心脏移植手术,心脏复灌前进行缺血后适应,即再灌注10 s、关闭10 s,循环3次。实验结束后取心肌标本行生物素切口末端标记法(TUNEL)检测,并采用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:假手术组无心肌细胞凋亡,后适应组心肌细胞凋亡指数明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。Western Blot显示:模型组Bcl-2、Bax蛋白表达水平与假手术组比升高(P<0.05);后适应组Bcl-2蛋白表达水平与模型组相比明显升高(P<0.01),而Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:缺血后适应对大鼠移植心脏缺血再灌注心肌能够上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,并可减少缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡。

兔深低温停循环体外循环模型的建立

目的建立新西兰兔深低温停循环（deep hypothermic circulatory arrest,DHCA）体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）模型。方法健康新西兰兔10只,雌雄不限,体重（2.5±0.5）kg。动脉套管针穿刺连接主动脉灌注管,右心耳切开连接静脉引流管建立体外循环。肛温降至20℃时停循环,维持兔直肠温度16℃-20℃,持续60 min后,恢复循环并复温至36℃时脱离体外循环。监测心电图、血液动力学变化。结果9只成功建立深低温停循环体外循环模型,1只死于模型建立过程中出血。预充溶液75 mL,平均转流时间140 min,CPB过程中平均动脉压在正常范围内,9只兔主动脉开放后心脏成功复跳。结论新西兰兔深低温停循环体外循环模型稳定、可行,成功率较高,是进行低温停循环体外循环基础研究、脑保护作用及其机制研究的理想模型。

抗体药物Fc段结构域改造研究进展

抗体是生物体内应对外来物质入侵时产生的主要保护物质,是保护生物体的重要分子。对抗体的Fc段进行改造可有效延长抗体的半衰期,大大减少给药剂量;Fc段介导的抗体效应子的功能也可以根据疾病特殊性进行上调或下调,实现治疗效果最大化。同时,仅有Fc片段的抗体,也可具备结合抗原的能力,通过缩小抗体分子的大小,可大大减少抗体分子量大的限制,为抗体药物的开发提供了新的方向。此外,除抗肿瘤作用外,抗体分子在抗感染领域也发挥了重要的作用。对抗感染中和抗体Fc区进行工程改造,可有效促进保护性的细胞免疫效应,增强抗病毒活性并延长半衰期。本文总结了抗体Fc结构域的功能特性及优化策略,并介绍Fc结构域优化改造所介导的生物学效应及在临床治疗中的应用与发展。

上海地区临床分离念珠菌的耐药性监测

目的了解上海地区临床分离念珠菌的菌株分布以及对常用抗真菌药物的敏感性和耐药性。方法对上海地区27所医院临床分离念珠菌采用微量液基稀释法按统一方案进行抗真菌药物敏感性试验。按CLSI M60(2017年)判断结果。结果收集2017年8月1日-2018年4月30日上述医院临床分离念珠菌共354株,其中白念珠菌占41.81%(148/354),近平滑念珠菌占23.73%(84/354),热带念珠菌占15.54%(55/354),光滑念珠菌占9.32%(33/354),其他念珠菌占9.60%(34/354)。白念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌耐药率与以往报道比较偏低或基本持平,无增长趋势,主要是对唑类抗真菌药物具有一定的耐药性。白念珠菌对氟康唑耐药率为1.45%、剂量依赖性敏感(SDD)率为4.35%,对伏立康唑耐药率和中介率均为2.17%;近平滑念珠菌对氟康唑呈现1.20%的SDD率,对伏立康唑呈现1.20%的中介率;光滑念珠菌对氟康唑表现出6.06%的耐药率和93.94%的SDD率;热带念珠菌耐药率呈增长趋势,对氟康唑表现出41.82%的耐药率和12.73%的SDD率,对伏立康唑表现出40.00%的耐药率和12.73%的中介率。白念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌对棘白菌素类药物尚未出现耐药菌株,仅1株光滑念珠菌对卡泊芬净耐药。结论上海地区临床念珠菌的分离率及菌株分布与国内外报道基本一致,临床分离菌株对常用抗菌药物的耐药率基本稳定,热带念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药率呈上升趋势,应该引起临床医师重视。同时应进一步加强医院感染防控措施,继续做好真菌耐药性监测工作。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱微生物鉴定系统性能验证方案的建立

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)在常规临床微生物鉴定中的性能验证方法,指导临床实验室规范微生物鉴定程序。方法选取标准菌株、质控菌株和临床菌株共115株,包含革兰阳/阴性球菌30株、革兰阳/阴性杆菌31株、真菌30株,厌氧菌、苛养菌各12株,所有菌株均经Vitek Compact鉴定和/或细菌16S r DNA、真菌ITS DNA测序分析验证。任意选择3种MALDI-TOF MS微生物鉴定系统厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱,采用检测系统推荐方法进行菌株鉴定,进行准确度验证试验。精密度验证:选取标准菌株和临床菌株10株,1位操作者使用3个检测系统对10株菌株分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d; 3位操作者使用3个检测系统对10株菌株每d分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d,从而验证鉴定结果的重复性。结果厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱对标准/质控菌株(除外厌氧菌)的鉴定符合率为100%;对临床菌株的属水平鉴定符合率为100%;对革兰阴/阳性杆菌的种水平鉴定符合率分别为100%、100%、96.77%;对革兰阳性球菌的种水平鉴定符合率分别为96.67%、96.67%、100%;对真菌的种水平鉴定符合率均为90%一致;对苛养菌的种水平鉴定符合率均为100%;对厌氧菌鉴定符合率为91.67%种水平一致。精密度验证试验结果重复性100%。结论 3种MALDI-TOF MS系统在革兰阳/阴性球菌、革兰阳/阴性杆菌、真菌、苛养菌鉴定的准确度和精密度符合要求,验证通过。本文建立的微生物鉴定质谱仪性能验证方案可满足综合性医院临床微生物实验室常规鉴定基本要求。

重组Fc融合蛋白类药物研究进展

自1989年抑制HIV-1感染的CD4-Fc融合蛋白被首次报道以来,Fc融合蛋白的治疗性应用在医药学领域引起广泛关注。Fc融合蛋白由功能分子和免疫球蛋白的Fc结构域组成,不仅具有蛋白的生物学功能且兼具抗体的特性,如在体内具有长半衰期、诱导抗体依赖细胞介导的细胞毒性效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)等。通过对Fc结构域进行糖基化、脱酰胺化、氨基酸定点突变改造,还可增强或减弱其介导的ADCC等效应,用于临床疾病的诊断与治疗。另外,Fc融合蛋白在多个非临床领域也有广泛应用。本文对重组Fc融合蛋白的结构特征和药理学特性、临床药物开发及其在非临床领域中的应用与发展进行综述。

肺动脉-左心房无泵肺辅助对急性肺损伤动物模型右心室负荷影响

目的:探讨肺动脉-左心房无泵肺辅助对幼猪急性肺损伤动物模型右心室负荷的影响,明确该辅助策略的可行性。方法:12只健康实验用中华小型猪以油酸诱导急性肺损伤模型后,随机分为2组:对照组6只,急性肺损伤模型建立后,仅给予常规机械通气;肺辅助组6只,常规机械通气,肺动脉-左心房无泵肺辅助。监测2组中心静脉压、肺动脉压、心输出量和辅助循环流量。结果:对照组肺动脉压呈持续性升高,至E时点肺动脉压升高至(40.9±9.0)mmHg,明显高于B时点(P=0.005)。肺辅助组于B时点开始肺辅助后,可见到血液流经辅助装置;肺动脉压呈下降趋势,至E时点降至(25.3±1.9)mmHg,明显低于B时点(P=0.047);对照组和肺辅助组D时点和E时点肺动脉压差异有统计学意义(P=0.002)。结论:肺动脉-左心房无泵肺辅助不增加急性肺损伤时右心室额外负荷,且有利于卸载右心室后负荷。

β-内酰胺酶抑制剂复方制剂研究进展

近年来,临床上多重耐药革兰阴性菌引起感染的死亡率居高不下。β-内酰胺酶是革兰阴性菌对多种β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因。目前,治疗耐药革兰阴性菌感染的抗菌药物研发遭遇瓶颈,21世纪以来未见基于新靶点的小分子药物上市。近年来,新药研发机构逐渐聚焦于开发β-内酰胺酶抑制剂,旨在通过克服β-内酰胺酶介导的耐药性提高现有抗菌药物的临床疗效。头孢他啶-阿维巴坦在临床上的成功应用,使β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂成为最有望解决临床多重耐药革兰阴性菌感染的策略。本文对近年来有关β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的相关研究和临床应用进展进行综述,并对未来β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的研究方向进行了展望。

2019年上海市东方医院细菌耐药性监测

目的了解2019年上海市东方医院(南院)菌株分布和抗菌药物敏感性。方法用纸片扩散法(K-B法)测量抗菌药物抑菌圈直径,梅里埃自动化仪器检测最低抑菌浓度(MIC),按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)指南M1002020版和美国食品和药物管理局(FDA)标准判断结果,用WHONET 5.6软件对本院分离细菌耐药性进行统计分析。结果分离非重复菌株共1510株,革兰阳性菌(G+菌)487株,占32.25%;革兰阴性菌(G-菌)1023株,占67.75%。耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率分别为80.0%和54.1%。发现1株利奈唑胺耐药的粪肠球菌。β溶血链球菌以无乳链球菌为主,占77.1%,而无乳链球菌对青霉素96.3%敏感。肺炎链球菌均来自成年人的痰液,50%对青霉素敏感。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)阳性率分别为52.6%和61.0%。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌检出率分别为53.1%,2.2%,91.1%和38.1%。结论本院细菌耐药率高,应加强及重视细菌耐药监测。

曲霉IgG抗体的生物参考区间建立

目的慢性肺曲霉病发病隐蔽易被其基础疾病掩盖不易诊断,如不及时积极治疗病死率高。指南建议将曲霉IgG抗体检测作为诊断慢性肺曲霉病的关键指标。但是目前大多数曲霉IgG抗体临床数据来自欧洲国家,中国人的曲霉特异性IgG抗体的生物参考区间仍有待确定。因此本研究的目的是建立适合本实验室的曲霉IgG抗体的生物参考区间。方法随机选取2019年10月至12月在本院进行健康体检的成年人,收集血清,采用丹娜曲霉IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)进行测定,测定结果依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP28-A3c的方法,用SPSS 25.0软件进行统计分析,建立本实验室的生物参考区间。结果最终纳入291名患者健康个体,中位年龄37岁(19岁~82岁),其中男141名,中位年龄38岁(19岁~82岁),女150名,中位年龄38岁(20岁~78岁)。男性和女性健康成年人血清曲霉IgG抗体水平分别为20.579(43.618) AU/mL 28.387(48.158) AU/mL,差异有统计学意义(P=0.011),因此依据男女性别差异分别建立参考区间。最终,曲霉IgG抗体水平参考区间为男性<111.405 AU/mL,女性<181.888 AU/mL。结论根据不同性别初步建立了该实验室血清中曲霉IgG抗体的生物学参考区间,为临床的相关疾病诊断提供了参考标准。