超声处理对南极磷虾蛋白功能特性的影响

以南极磷虾蛋白为研究对象,采用超声处理,研究了超声功率、超声时间、超声温度等对南极磷虾蛋白功能特性(溶解性、持水/油性、起泡性和乳化性等)的影响。结果表明,超声处理时间对南极磷虾蛋白持水性、溶解性影响显著,乳化性影响次之。表明超声处理能够改变南极磷虾蛋白的功能特性。

响应面优化的南极磷虾蛋白磷酸化改性工艺

采用三聚磷酸钠对南极磷虾蛋白进行磷酸化改性,利用傅里叶红外光谱技术考察南极磷虾蛋白磷酸化实施的可能性;以磷酸化程度为考核指标,考查蛋白浓度、三聚磷酸钠添加量、pH值等因素对南极磷虾蛋白磷酸化程度的影响;通过响应面设计法优化获得南极磷虾蛋白磷酸化改性的最佳工艺条件为:蛋白质质量浓度为22 g/L、三聚磷酸钠添加量为6.55 g/100g蛋白、反应pH值为9.04、反应时间1.55 h、反应温度39.90℃,在该条件下磷酸化水平41.91 mg/g。实验结果表明,采用三聚磷酸钠对南极磷虾蛋白的磷酸化改性是切实可行的。

磷酸化改性对南极磷虾蛋白功能特性的影响

目的以磷酸化南极磷虾蛋白为原料,蛋白功能特性为评价指标研究磷酸化改性对南极磷虾蛋白功能特性的影响。方法功能特性的评价方法采用国际通用方法。结果磷酸化改性能够明显改善南极磷虾蛋白的溶解性、吸油性、乳化性、起泡性及泡沫稳定性,但其确切的改性机制仍需开展深入研究。结论磷酸化改性能够改善南极磷虾蛋白的功能特性,拓展了南极磷虾蛋白的应用领域和范围。

氧化铝矿渣浆泵用高铬铸铁的研究现状及展望

综述了高铬铸铁材料在氧化铝用渣浆泵过流件中的失效机理,以及国内外学者就这一问题所做的研究,其中包括高铬铸铁的合金成分、组织结构、工艺等和耐磨蚀性的关系。

截短的猪生殖与呼吸综合征病毒M基因的原核表达

根据GenBank上登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计了1对引物用于扩增PRRSVM基因,经PCR、酶切及测序鉴定,成功构建了PRRSV M基因原核表达载体。重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting结果显示,出现一分子质量约为27.3ku的目的蛋白带,该表达蛋白可与PRRSV猪阳性血清发生特异性反应。表明,表达的蛋白具有良好的特异性。

南极磷虾蛋白的研究进展

南极磷虾蛋白作为一种生物资源量巨大的优质蛋白来源受到广泛关注。该文综述了南极磷虾蛋白的组成、制备、营养、安全与功能特性;介绍了南极磷虾蛋白及其衍生产品开发利用的现状和存在的主要问题;展望了南极磷虾蛋白的未来发展方向和应用前景。

猪细小病毒细胞适应株的培育及鉴定

从临床表现为皮炎消瘦症状的仔猪肝脏中分离到1株病毒,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪细小病毒(PPV),采用仔猪原代肾细胞和传代ST细胞分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株ST传代细胞培养适应毒株,命名为PPV-BQ2007株。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PPV阳性血清中和。免疫电镜可清晰见到聚集成团的大小不一的病毒粒子,近似圆形,无囊膜,直径大小约20nm～22nm。该分离株经ST细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第30代后毒价达107TCID50/mL以上,且毒价和血凝价稳定。测序结果表明PPV-BQ2007株VP2基因与NCBI公布的皮炎型毒株Kresse株的同源性最高,达99.8%,在系统进化分支上处于同一个分支。PPV-BQ2007株传代细胞培养适应株的成功培育和鉴定,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究等奠定了良好基础。

同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立

为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(507 bp)、CPV(287 bp)、CAV-Ⅰ(590 bp)和CAV-Ⅱ(1 027 bp)的多重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测以上4种病毒,而狂犬病病毒检测为阴性;CDV、CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的最低检出限分别为101.9TCID50、101.7TCID50、101.7TCID50和102.2TCID50。利用该方法对由黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为23.33%(7/30)、CPV阳性率为20%(6/30)、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的阳性率均为3.33%(1/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断。

定向凝固高铬铸铁Cr28的组织和腐蚀磨损性能

研究了定向凝固工艺制备的高铬铸铁Cr28的组织和性能，并将其与普通砂型铸造制备的高铬铸铁Cr28及Cr15M03进行比较。结果表明：本实验中所采用的简易定向凝固工艺能够实现高铬铸铁碳化物的定向排列，且与激冷面距离不同处，碳化物形态、分布和平均间距不同；在高温热强碱冲蚀磨损实验中，垂直于磨损面定向排列且分布较均匀的碳化物能使定向凝固高铬铸铁具有更好的耐磨蚀性能，碳化物平均间距λ在16～17μm之间时其耐磨蚀性能最佳；相对硬度而言，定向凝固得到的定向排列的碳化物对材料耐磨蚀性的影响更为突出。

氧化铝矿用渣浆泵过流件高铬铸铁Cr28的腐蚀磨损性能

针对氧化铝矿渣浆泵过流件使用工况,设计了一种新型的过流件高铬铸铁材料Cr28,研究了铸态和热处理态材料的组织和性能。结果表明:热处理后组织与铸态组织相比,碳化物分布趋于弥散细小,冲击韧度和硬度都有较大的提高。腐蚀磨损实验结果表明:铸态和热处理态Cr28的腐蚀磨损性能与Cr15Mo3相比都有显著地提高,其中热处理态Cr28试样的磨蚀失重率最低,相对耐磨性为1.95。采用定量分析的方法对材料的磨蚀磨损交互作用进行研究表明:在腐蚀磨损过程中磨损对腐蚀的促进作用很大,占到腐蚀分量的99%以上,而腐蚀对磨损的促进作用较为有限,均低于腐蚀分量的23%。Cr15Mo3和热处理态Cr28试样的磨损增量和纯磨损量均随其硬度的升高而降低,而铸态Cr28试样硬度低于Cr15Mo3试样,但是磨损增量和纯磨损量也较低。

多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立

本文建立了一种能够同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重PCR方法(mPCR)。借助于Oligo6.0引物设计软件,设计了4对引物分别用于扩增PCV2ORF2基因353bp片段、PPVNS-1基因271bp片段、PRRSVMN基因美洲型434bp片段、PRVgB基因194bp片段。通过人为混合以上4种病毒进行特异性及敏感性试验,结果表明,该方法具有很好的特异性和敏感性。对猪瘟病毒、大肠杆菌和双蒸水的PCR扩增结果均为阴性;该mPCR方法对PPV的最低检测量为8.64×10-3μg,PRV的最低检测量为2.36×10-3μg,PRRSV的最低检测量为3.68×10-3μg,PCV2的最低检测量为2.90×10-4μg。该方法的建立对临床上PCV2、PPV、PRV、PRRSV的鉴别诊断以及以上这4种病毒的流行病学调查具有十分重要的意义。

抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这两株杂交瘤细胞分泌的MAb均能够识别EAV。EAV N蛋白MAb的制备,为EAV血清学检测方法的建立奠定了基础。

胶体金免疫层析技术及其在猪病诊断上的应用

胶体金免疫层析技术是一种新的免疫检测技术,因其快速简便最近几年在猪病诊断方面得到广泛应用。《胶体金免疫层析技术及其在猪病诊断上的应用》一文详细介绍了胶体金免疫层析技术的基本原理、胶体金及胶体金免疫层析快速诊断试纸条的制备方法,并以猪繁殖与呼吸综合征为例说明胶体金免疫层析快速诊断试纸条在猪病诊断上的应用,可操作性强,值得认真研读。

马流感病毒血凝素基因甲病毒复制子重组表达质粒的构建及其免疫效力评价

为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/c鼠能够检测到特异性抗体产生,而且HI抗体水平持续升高,同时小鼠体内IFN-γ、IL-4分泌水平也有所升高。攻毒后小鼠表现轻度临床症状,但病毒分离和RT-PCR均未检测到病毒。上述结果表明,该重组质粒pSFV1CS-EIV-HA具有良好的免疫原性并且可以诱导免疫动物产生较高免疫应答的能力。

黏膜佐剂研究进展

近来,人们把很大精力用于比现有疫苗更安全、更有效的亚单位疫苗的研究,期待以此来取代现有的全细胞或甲醛灭活的疫苗,包括研究其它一些用于开发替代传统疫苗的递送方式如植物源疫苗的经黏膜(经口)递送方式.……

PCV2相关性肺炎与猪圆环病毒Ⅱ型感染相关的猪呼吸道疾病综合征(PRDC)

人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占19%,猪肺炎支原体占22%;我们国家现在的情况与此相似。本文介绍3个临床病例分别是PRRSV和PCV2共感染、PCV2和SIV共感染以及PCV2和猪肺炎支原体共感染。这就是今年国内的主要猪病形势,经常导致严重的临床疾病,唯一的组织学损伤是淋巴组织消退和气道纤维化,在这些损伤中大量的PCV2抗原表明PCV2在PRDC中起到重要的致病作用。去年夏季,江苏、安徽、江西、湖南、湖北、河南、山东等地的部分区域发生了以高热、呼吸困难和全身性出血为主的猪疫情。根据所收集的流行病学资料、实验室检测结果和相关动物实验,初步认为造成本次猪疫情发生的主要病原为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus)以及猪2型圆环病毒(Porcine circovirus-2)感染,即3P综合征(3P Syndrome,以下称3P综合征)。这就是例证。PCV2感染相关的疾病经常与一种或多种病原体共发生。PCV2感染经常在PRDC暴发中出现,可能导致这些病例中损伤的严重性和持续性的原因。PCV2感染相关的损伤能够在急性呼吸系统疾病中发现,并不局限于消瘦症状。

免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用

胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记技术以及目前在养猪业上的应用情况。

猪细小病毒的分子生物学研究

猪细小病毒病是由猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）感染所引起的猪的重要传染病之一。该病的主要特征为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等。该病广泛存在于世界各地并在大多数猪场呈地方性流行，严重地影响着养猪业的发展，该病的严重危害及该病病原独特的生物学特性受到了国内外许多学者的关注。

南极磷虾来源酶的研究进展

南极磷虾是一种生活于南极海域的浮游海洋动物。南极海域寒冷、严酷的生存环境形成了南极磷虾酶独特的生物学特性,南极磷虾酶作为一种独特、高效的低温酶系,具有广阔的应用前景。本文综述了南极磷虾酶的种类,分离纯化,结构特征,酶学性质和应用研究进展,期望能够推动南极磷虾资源的深度利用。

马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)方法。结果表明,该方法在102拷贝/μL^107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;最低检出量为101.5TCID50/m L病毒,敏感性为常规RT-PCR的100倍,与其他马常见病毒无交叉反应;组内及组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。此外,采用该方法测定了EAV Bucyrus株及其拯救病毒ic EAV感染RK-13细胞后的复制动态,并与TCID50方法进行了比较。结果显示ic EAV与其亲本病毒接种RK-13细胞后,0 h测定病毒TCID50及拷贝数分别为103.33TCID50/m L(104.65拷贝/2μL)和103.50TCID50/m L(104.70拷贝/2μL);60 h时,细胞病变达到100%,ic EAV及其亲本病毒的TCID50及拷贝数分别为105.67TCID50/m L(107.0拷贝/2μL)和105.57TCID50/m L(106.98拷贝/2μL),两株病毒在RK-13细胞内的复制效率相似。本研究建立的Eva Green q RT-PCR方法可以为细胞培养物中EAV的检测提供有效的技术手段。