基于酵母β-葡聚糖载体的口服OVA疫苗(WGP-OVA疫苗)诱导体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应

目的:探讨口服WGP-OVA疫苗对C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫的诱导作用。方法:分别连续给予C57BL/6小鼠口服PBS、WGP及WGP-OVA 17 d后,使用LEGENDplexTM多因子流式检测试剂盒检测给药后小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的含量;HE染色比较各组小鼠脾脏淋巴小结的大小。取小鼠腹股沟淋巴结(ILNs)制备单细胞悬液,流式细胞仪(FACS)检测淋巴结内F4/80+巨噬细胞及F4/80+SIINFEKL+巨噬细胞比例,分析WGP-OVA对巨噬细胞在ILNs内的浸润及抗原提呈情况;同时通过MHC Tetramer染色检测抗原特异性CD8+T细胞比例,明确WGP-OVA疫苗对T细胞免疫的诱导作用。结果:与PBS组相比,WGP-OVA能显著诱导IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的分泌,增大脾脏内淋巴小结。此外,口服WGPOVA疫苗能促进F4/80+巨噬细胞向淋巴结浸润,诱导巨噬细胞对OVA的抗原提呈,同时增加淋巴结内OVA特异性CD8+CTLs的数量。结论:口服WGP-OVA疫苗能诱导C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应。

蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟中的作用

目的探究蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)作用下对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)成熟过程及其免疫相关功能的调控效应。方法从NCBI的基因表达数据集(GEO)数据库中下载GSE2197数据集,随后通过深入分析该数据集的芯片数据,识别并获得了差异表达基因(DEG)。从免疫学数据库和分析门户网站(IMMPORT)数据库中下载并整理与免疫功能相关的基因,与DEG取交集得到免疫相关的差异基因。通过运用专门的R包等生物信息学算法,成功识别了关键基因并解析了相关的信号通路。实时定量PCR检测BMDC经WGP刺激前后的差异基因。在体外实验中,从小鼠的胫骨和腓骨中抽取骨髓,并利用FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)诱导这些骨髓细胞分化成BMDC。经过诱导后,对这些BMDC进行转染处理,并随后使用WGP进行刺激。为了评估BMDC的免疫表型,利用流式细胞术分析了细胞表面分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅰ/Ⅱ(MHC-Ⅰ/Ⅱ)以及程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的表达情况。此外,为了探究BMDC的免疫调节功能,利用ELISA技术检测了BMDC上清液中细胞因子白细胞介素12p40(IL-12p40)、IL-6、IL-10的分泌含量。在T细胞实验中,我们利用OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠的淋巴结和脾脏,通过磁珠分选试剂盒成功分离出CD8^(+)和CD4^(+)T细胞。随后,我们将这些T细胞与特异性抗原卵清蛋白(OVA)以及之前制备的BMDC进行共培养。最后,利用流式细胞术检测了T细胞的增殖与分化情况,以评估BMDC在抗原特异性T细胞反应中的作用。结果经过分析WGP诱导的与CpG(GSE2197)刺激的BMDC的差异基因,与IMMPORT数据库中的免疫基因取交集,筛选到PROCR基因。数据显示敲低PROCR基因后,经WGP激发的BMDC的表面分子MHC-Ⅰ明显降低,细胞因子IL-10的分泌显著增多;其驱使CD8^(+)T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的能力明显减弱。结论在WGP诱导BMDC成熟的过程中,PROCR对MHC-Ⅰ的表达以及IL-10的分泌具有调控作用,进而调节BMDC诱导CD8^(+)IFN-γ^(+)T细胞增殖与分化的功能。

肿瘤微环境中巨噬细胞对NK细胞的调控作用

自然杀伤(NK)细胞具有MHCⅠ非依赖性,无需抗原呈递细胞刺激,就能直接杀伤肿瘤细胞,在抗肿瘤免疫过程中发挥重要的作用。但NK细胞所处的局部微环境以及细胞间的相互作用影响肿瘤部位NK细胞的增殖、成熟、效应分子分泌和功能。巨噬细胞是肿瘤组织中占比最大的一类细胞群体,巨噬细胞与NK细胞间的相互作用在抗肿瘤免疫中至关重要。本综述详细阐述了肿瘤组织中巨噬细胞对NK细胞的调控作用,以期为重编程巨噬细胞表型恢复NK细胞抗肿瘤免疫能力及开发NK细胞免疫疗法提供更多思路。

免疫检查点细胞程序性死亡蛋白-1和淋巴细胞活化基因-3在三阴性乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是一种特殊的乳腺癌亚型,占所有乳腺癌类型的15%~20%。由于TNBC患者无法从内分泌治疗及分子靶向治疗中获益,其预后往往较差,且易复发。化疗是晚期TNBC的标准治疗方法,但患者常出现化疗耐药。因此,为TNBC患者寻找新的治疗方法迫在眉睫。目前,免疫检查点抑制剂在TNBC的治疗中取得了一定突破。基于此,本文将对免疫检查点细胞程序性死亡蛋白-1和淋巴细胞活化基因-3在TNBC中的研究进展做一综述。

树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)在抗肿瘤免疫中的研究进展

树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)受体是真菌细胞壁上β葡聚糖的主要模式识别受体。Dectin-1广泛表达于树突状细胞(DC)、巨噬细胞及中性粒细胞等髓样细胞,在与内、外源性配体结合后,dectin-1能够诱导自身胞内信号传导触发一系列的细胞免疫反应,参与机体抗感染及抗肿瘤等过程。Dectin-1与其不同配体之间的相互作用,触发了不同的信号活化途径和细胞功能;与β葡聚糖的识别促进DC的成熟和向T细胞递呈抗原的能力,诱导细胞毒性T淋巴细胞的增殖,激活机体的特异性免疫应答进而发挥抗肿瘤作用。我们主要总结了dectin-1分子的结构、信号通路及其在抗肿瘤免疫中的研究进展。

结直肠癌患者血清IL-17和TGF-β浓度及其相关性的初步研究

目的:研究血清IL-17和TGF-β浓度变化与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生发展的相关性及其临床意义。方法:健康志愿者30例、无远处转移并行手术治疗的结直肠癌患者59例及术后发生远处转移的44例患者被纳入本研究,依次为A(对照组)、B、C组,平均年龄分别为(53.8±20.8)岁、(62.0±11.8)岁、(64.0±15.7)岁,所有患者均经病理学检查确诊为结肠或直肠癌。B组59例,其中结肠癌26例为B1组,直肠癌33例为B2组;C组44例,其中结肠癌23例为C1组;直肠癌21例为C2组。测定A、B和C组血清IL-17和TGF-β浓度,其中分别测定B组术前术后血清IL-17和TGF-β浓度。结果:血清IL-17浓度测定结果显示,B组术前高于术后,C组高于B组(术前和术后),B、C组均高于A组,B组术前术后比较、B组和C组比较及B、C组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。B组术前、术后血清TGF-β水平比较差异无统计学意义(P>0.05),A组和B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组高于B组,B、C组均高于A组,C组和B组比较,B、C组和A组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组结肠癌(B1组)和直肠癌(B2组)组比较、C组结肠癌(C1)和直肠癌(C2)组比较,血清IL-17和TGF-β水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:血清IL-17水平和结直肠癌的发生、发展密切相关,随着结直肠癌进展和肿瘤负荷增加,血清IL-17水平升高。血清TGF-β水平和结直肠癌转移显著相关,在结直肠癌的转移机制中可能起到重要作用。

中性粒细胞在肿瘤免疫中的研究进展

肿瘤微环境中的中性粒细胞分为具有抗肿瘤效应的N1型和促肿瘤效应的N2型。N1型中性粒细胞抑制、杀伤肿瘤细胞发挥抗肿瘤作用;N2型中性粒细胞可以通过释放弹性蛋白酶、基质金属蛋白酶、细胞因子和趋化因子等方式,促进肿瘤的发生、生长和转移及肿瘤血管生成。本文就中性粒细胞的生物学特性与肿瘤发生发展等方面,综述中性粒细胞在肿瘤免疫中的研究进展。

肿瘤细胞外泌体在肿瘤免疫中的作用

外泌体作为一种纳米级囊泡逐渐成为现在肿瘤免疫的研究热点。外泌体中含有大量的蛋白质、脂质、核酸等物质,在细胞间的信息传递中起着重要作用[1]。肿瘤细胞来源的外泌体（Tumor-derived exosome,TEX）不仅可以抑制宿主免疫应答,促进肿瘤转移,在一定条件下也能够起到抗肿瘤免疫作用,因此探索肿瘤来源外泌体对免疫应答的影响及相关机制在肿瘤免疫治疗中具有重要意义。

肿瘤相关巨噬细胞促进非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的研究

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对非小细胞肺癌增殖、转移的影响。方法免疫组化方法分析肺癌组织中巨噬细胞浸润情况。CCK-8法和Transwell法分别检测单核巨噬细胞系THP-1(构建为M2型TAMs后)对肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果免疫组化结果显示,TAMs浸润数在肺癌组织中显著多于癌旁组织。激活诱导的TAMs细胞促进A549细胞的增殖和侵袭。结论巨噬细胞浸润增加造成的肿瘤周围炎症微环境可能是肺癌发展的机制之一。

可溶性CD40在肝病患者血清中的表达及其临床意义

目的:研究可溶性CD40(solubleCD40,sCD40)在急性肝炎、重型肝炎和原发性肝癌患者血清中的表达,探讨其与生化指标和疾病预后的关系。方法:使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测急性肝炎(49例)、重型肝炎(22例)和原发性肝癌(13例)患者入院次日清晨空腹血清标本和健康体检者(44例)血清标本中sCD40浓度,分析其与急性肝炎患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的关系,并初步探讨sCD40水平与重型肝炎患者疾病预后的关系。流式细胞术检测患者血清sCD40与CD40配体(CD40L)的结合活性。结果:三种肝脏疾病患者血清中sCD40水平(149.70±86.82)pg/mL较健康对照组(47.33±27.49)pg/mL显著升高(P<0.001),但各组患者之间无统计学意义(P=0.475)。重型肝炎死亡患者血清sCD40浓度较存活患者显著升高(P<0.05)。急性肝炎患者血清sCD40浓度与ALT、AST水平呈显著正相关(r=0.50,P<0.001;r=0.47,P<0.01)。体外实验显示患者血清sCD40具有与CD40L结合的活性。结论:肝脏疾病患者血清异常高表达sCD40,这是评价急性肝细胞损伤的辅助指标,有助于判断重型肝炎患者的病情和预后。CD40-CD40L作用可能参与了肝细胞损伤和免疫失调的病理过程。

LncRNA FENDRR通过调控ERK/MAPK影响肺鳞癌H226细胞增殖、迁移和凋亡

目的探讨lncRNA FENDRR对肺鳞癌细胞H226的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及分子机制。方法qRT-PCR检测肺正常上皮细胞BEAS、肺腺癌细胞A549、H1299和肺鳞癌细胞H226中FENDRR的表达水平。将H226细胞分为FENDRR-siRNA组和FENDRR-siNC阴性对照组;CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表达。结果与肺正常上皮细胞相比,肺鳞癌细胞H226中FENDRR水平明显下降。下调肺鳞癌细胞H226中FENDRR的表达后,p-MEK和p-ERK蛋白表达水平显著增多,H226细胞增殖活力、迁移及侵袭能力显著增加,细胞凋亡率明显降低。加入ERK抑制剂U0126能逆转FENDRR表达下调对H226细胞的作用。结论低表达FENDRR后,可以通过ERK/MAPK信号通路,促进H226细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

micro-RNA对树突状细胞生物学功能的影响

微小RNA（microRNA,miRNA）是一种小型、非编码RNA分子,通过作用于目的基因调控相应功能蛋白的表达从而参与各种生理反应。近年来众多文献报道了特异性miRNA在免疫学方面的作用,而树突状细胞（Dendritic cell,DC）作为重要的抗原提呈细胞（Antigen presenting cell,APC）,连接着固有免疫应答和适应性免疫应答。

分泌独特型免疫球蛋白BALB/c小鼠B细胞淋巴瘤模型的建立

目的 :构建分泌独特型免疫球蛋白 (idiotype ,Id)的BALB c小鼠B细胞淋巴瘤细胞株 ,建立动物模型 ,为进一步开展Id 树突状细胞 (dendriticcell,DC)疫苗的免疫治疗提供物质基础。方法 :采用降植烷和不完全弗氏佐剂间隔致敏 6～ 8周龄BALB c小鼠 ,继而采用细胞融合技术、ELISA法、免疫荧光标记和流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)筛选获得分泌Id的阳性克隆 ;体内诱生腹水和体外无血清培养法制备Id ,优球蛋白沉淀法结合凝胶Suphecray 2 0 0过滤纯化Id ;建立荷瘤模型 ,从荷瘤小鼠骨髓前体细胞诱导DC。结果 :获得 2株稳定分泌Id的BALB c小鼠B细胞淋巴瘤细胞SB4和SB5 ,Id均为IgM κ ;成瘤率均为 10 0 % ,荷瘤小鼠平均生存期为 (3 0± 4)d。结论 :SB4和SB5能持续稳定分泌非自身反应性Id 。

β-葡聚糖对单核细胞释放TNF-α、IL-8和IL-12的影响

目的研究β-葡聚糖对单核细胞释放动脉粥样硬化致病因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-8)和白细胞介素12(IL-12)]的影响。方法用密度梯度离心法分离健康志愿者新鲜血液中的单核细胞,使用佛波醇酯(PMA)诱导单核细胞分化为巨噬细胞,进一步利用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞为泡沫细胞,将实验分为无药对照组、ox-LDL组、颗粒性β-葡聚糖(WGP)组和WGP+ox-LDL组,提取总RNA,扩增TNF-α、IL-8和IL-12 c DNA,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中的浓度。结果与无药对照组比较,ox-LDL诱导单核细胞TNF-α、IL-8和IL-12蛋白水平的表达显著升高(P<0.05),而WGP可以显著抑制ox-LDL诱导的上述细胞因子在蛋白水平和TNF-α、IL-8在mRNA水平的表达(P<0.05)。结论β-葡聚糖可能通过抑制单核细胞促炎因子的分泌减缓动脉粥样硬化形成。

鸟苷酸结合蛋白2调控β-葡聚糖诱导的小鼠树突状细胞成熟

目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p70、TNF-α和IL-10水平。T细胞增殖实验检测全葡聚糖颗粒(WGP)刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对卵清蛋白(OVA)特异性CD4+T细胞的促增殖效应。结果β-葡聚糖诱导后,DC的GBP2 m RNA水平显著降低;敲低DC的GBP2水平后,其表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平降低,同时,IL-6、IL-12、TNF-α分泌下降;经WGP刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对OVA特异性CD4+T细胞的促增殖效应降低。结论 GBP2能调控β-葡聚糖诱导的DC成熟,进一步抑制T细胞的增殖。

Olaparib对HL-60细胞NKG2D配体表达的调节作用及相关机制研究

目的:研究Olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞表面NKG2D配体表达的调节作用,并初步探索其内在调控机制。方法:对数生长期的HL-60细胞经不同浓度Olaparib(1.25、2.5、5、10μmol/L)作用24、48 h后,采用流式细胞术检测细胞表面NKG2D配体表达情况;Western blot检测HL-60细胞内ERK蛋白表达变化情况;CFSE/PI法检测NK细胞对HL-60细胞的杀伤作用。结果:10μmol/L Olaparib作用24和48 h均可上调HL-60细胞表面NKG2D配体的表达,5μmol/L Olaparib作用48 h可诱导ULBP-2、ULBP-3表达上调;Western blot检测结果显示,Olaparib处理后的HL-60细胞内ERK磷酸化水平增强。Olaparib可增强NK细胞对HL-60细胞的杀伤作用,但ERK抑制剂可下调NK细胞对HL-60细胞的杀伤作用。结论:Olaparib可上调HL-60细胞表面NKG2D配体表达,增强NK细胞对其的杀伤作用,其机制可能与Olaparib促进ERK磷酸化表达有关。

自体树突状细胞疫苗治疗雌、孕激素受体双阴性乳腺癌的疗效观察

目的评价自体肿瘤冻融抗原致敏的自体树突状细胞(ADC)疫苗免疫治疗,对处于Ⅱ、ⅢA期雌、孕激素受体双阴性表达乳腺癌患者的疾病进展及生存情况的影响。方法利用自体肿瘤冻融抗原致敏的CD14+前体细胞产生树突状细胞,在细胞因子的作用下开始成熟,制备ADC疫苗。选取符合入组标准的63例患者,根据治疗方案分为实验组和对照组,实验组共接受4次皮下ADC回输。测定实验组疫苗接种前后IFN-γ+/CD8+T细胞含量及两组针对抗肿瘤裂解物发生的Ⅳ型变态反应情况,随访两组的疾病进展情况。结果疫苗接种后提高了IFN-γ+/CD8+T细胞数量,与疫苗接种前比较差异有统计学意义[(23.4±4.1)%vs.(14.3±2.0)%,P<0.05];实验组18例(58.1%)为Ⅳ型变态反应阳性,而对照组均为阴性,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组的3年无进展生存率高于对照组,差异有统计学意义(76.9%vs.31.0%,P<0.05)。实验组未发生严重不良反应。结论 ADC疫苗可能通过触发乳腺癌患者的免疫应答机制来治疗乳腺癌,具有较好的效果,并延长无进展生存期。

免疫细胞在动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化是一种以固有和适应性免疫反应为特点的炎症性疾病,高脂血症和炎症反应是动脉粥样硬化病理学的两大主要研究方向。血脂异常作为动脉粥样硬化的主要风险因素能激活内皮细胞和单核巨噬细胞,树突状细胞,中性粒细胞及T淋巴细胞等炎性细胞,引起内皮细胞的功能紊乱,刺激产生黏附分子、细胞因子和一些促炎因子,从而引起大量炎症细胞在动脉粥样硬化斑块内的浸润。

4株鼠抗人B7-1分子单抗的制备及其生物学活性的鉴定

目的 :制备鼠抗人B7 1分子 (mAb)单抗及研究其生物学活性。方法 :以人多发性骨髓瘤细胞转人B7 1基因细胞株XG7 B7为免疫原 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备鼠抗人B7 1分子单抗 ;以Westernblot及间接免疫荧光标记法鉴定其特异性和亲和力 ;采用3H TdR掺入实验和Annexin V染色分析测定该单抗的生物学功能。结果 :获得了 4株持续分泌抗人B7 1分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 1F11、3H8、6H2和 7B10 ,其分泌的单抗类别分属于小鼠IgG1和IgM ;4株单抗均具有良好的特异性和亲和力 ;1F11、3H8和 6H2能部分阻断B7 1分子基因转导细胞介导的共刺激信号 ,从而抑制T细胞的增殖效应 (抑制率 2 1%～ 5 2 % ) ;且能诱导天然表达B7 1分子的人B系淋巴瘤细胞Raji的凋亡。结论 :成功研制 4株功能性抗人B7 1分子抗体 ,这些抗体在抗异体组织器官移植排斥反应及在B系淋巴瘤的治疗中具有潜在的应用价值。

PARP抑制剂olaparib对急性髓系白血病细胞HL-60抑制作用研究

目的研究PARP抑制剂olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用。方法对数生长期HL-60细胞经不同浓度(0、1.25、2.5、5、10μmol/L)olaparib作用不同时间后,CCK-8法检测olaparib对HL-60细胞的增殖抑制作用;Annexin-V/PI双标法检测HL-60细胞凋亡水平,Western blot检测HL-60细胞内相关信号蛋白(PARP-1、Caspase-3)表达变化。结果与对照组相比,经不同浓度(1.25、2.5、5、10μmol/L)olaparib作用48 h后的HL-60细胞出现增殖抑制,并且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加;同时发现olaparib诱导HL-60细胞发生凋亡,并显示出剂量依赖效应;Western blot结果显示,olaparib处理后的HL-60细胞内PARP活性受到抑制,Caspase-3活化。结论PARP抑制剂olaparib对HL-60细胞不仅具有增殖抑制作用,同时可通过激活Caspase-3,抑制PARP活性,诱导HL-60细胞凋亡。