华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。

不同品系小鼠感染华支睾吸虫后IgG及亚类的动态观察

目的观察不同品系小鼠感染华支睾吸虫后，血清中特异性抗体IgG、IsGI／IgG2a的动态变化。方法NaOH消化法粪检虫卵，ELISA法测定不同品系小鼠感染后4、8和12w血清中抗体IsG、IsGI／IgG2a的动态变化。结果三个品系小鼠血清IsG均于感染后第4～8w升高，约在第10w达到高峰，此后开始下降并维持至观察结束的第12w；IgGI／IgG2a比值感染后逐渐增高，并持续至第12w。结论华支睾吸虫感染的免疫应答发生了由Th1免疫应答向Th2免疫应答转变的趋势。

纸片协同试验用于肠杆菌科细菌碳青霉烯酶检测的价值

目的评估纸片协同试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌(CPE)的应用价值。方法收集2015年1月至2018年12月瑞安市人民医院75株可疑产碳青霉烯酶非重复肠杆菌科细菌和10株非CPE。通过使用美罗培南(MEM)联合多种抑制剂[包括苯基硼酸(PBA)、氯唑西林、乙二胺四乙酸钠(EDTA)和替莫西林]的纸片扩散法等试验检测菌株产碳青霉烯酶的类型。以PCR扩增相关耐药基因为金标准,评估纸片协同试验对CPE的检测价值。结果75株可疑CPE经PCR扩增,66株确证产碳青霉烯酶(其中产KPC 46株、产NDM-118株、产IMP 1株、产VIM 1株,无产OXA-48基因型),6株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),3株未检测出基因;MEM联合PBA和氯唑西林协同试验检测KPC表型的灵敏度为100.0%,特异度为93.1%;MEM联合EDTA协同试验检测MBL表型的灵敏度和特异度均达到100.0%。10株非CPE均未检测出碳青霉烯酶耐药基因,且纸片协同试验均阴性。结论该表型检测方法对检测KPC、MBL类碳青霉烯酶有较高的灵敏度和特异度,并且操作简便、成本低,适合在临床微生物学实验室、医院感染管理科及疾病预防控制中心等单位普及应用。

念珠状链杆菌感染引起的鼠咬热1例

鼠咬热主要由小螺菌和念珠状链杆菌感染引起,该病分布于世界各地,小螺菌型鼠咬热多见于亚洲,而念珠状链杆菌型鼠咬热多见于北美洲[1]。鼠咬热的特点是被鼠咬伤后经过一段潜伏期可出现典型的临床表现:急性发热、肌痛、关节痛、呕吐以及头痛、局部淋巴结肿大,随后在膝盖、脚踝、手腕、手肘等处出现斑丘疹[2-3]。该病国内相关报道较少,特别是由念珠状链杆菌引起的鼠咬热在国内的报道尤为少见。本文报道1例由念珠状链杆菌感染引起的鼠咬热,并结合国内外相关鼠咬热的文献进行复习,以提高临床实验室对念珠状链杆菌的检出率,协助临床诊断治疗。

华支睾吸虫成虫抗原致敏树突状细胞诱导免疫应答的研究

目的研究华支睾吸虫成虫虫体抗原(CA)致敏树突状细胞(DCs)诱导免疫应答的类型。方法利用rm-GMCSF诱导分化BALB/c小鼠骨髓细胞获得DCs,倒置显微镜和透射电镜观察DCs形态;CA致敏DCs,检测IL-12p70水平;将致敏后的DCs和淋巴细胞共培养,用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖,用ELISA试剂盒检测IFN-γ和IL-4水平。结果倒置显微镜和透射电镜下见典型的DCs,CA致敏的DCs分泌高水平IL-12p70;共培养后,淋巴细胞明显增殖,分泌的IFN-γ水平显著升高,IL-4水平与其他各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CA刺激后DCs被活化,诱导的免疫应答向Th1方向极化,该应答与华支睾吸虫感染早期的保护性免疫密切相关。

ESA刺激华支睾吸虫感染小鼠脾细胞分泌Th1/Th2的动态观察

目的观察华支睾吸虫分泌排泄抗原(ESA)刺激感染小鼠脾脏单个核细胞Th1/Th2细胞因子的动态变化。方法双抗体夹心ELISA法检测华支睾吸虫感染后不同时间小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4的动态变化。结果自感染后1w起IFN-γ的表达量开始上升,第4w达高峰(P<0.05),此后开始下降,至第12w水平接近正常。与IFN-γ不同,IL-4的表达自感染后第1w起持续升高,直至观察结束的12w(P<0.05)。结论初步结果提示华支睾吸虫感染后急性期转向慢性期的过程中Th1/Th2细胞因子的表达经历了由Th1优势应答向Th2优势应答的转变。

改良Hodge与Carba NP和mCIM试验快速检测产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的方法学比较

目的比较改良Hodge试验、Carba NP试验及碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌快速表型筛选的能力。方法以PCR扩增肺炎克雷伯菌中携带的碳青霉烯酶相关耐药基因为金标准,比较改良Hodge试验、Carba NP试验及mCIM试验对202株碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌试验菌的筛选能力。结果 202株试验菌经PCR扩增120株耐药基因阳性,产物测序得知75株只携带bla_(KPC-2)基因,20株同时携带bla_(KPC-2)和bla_(VIM-2)基因,19株同时携带bla_(KPC-2)和bla_(IMP-4)基因,3株只携带blaIMP-4基因,2株只携带bla_(VIM-2)基因,1株只携带bla_(NDM-1)基因;120株产碳青霉烯酶试验组菌株对亚胺培南、厄他培南及头孢菌素类抗菌药物的耐药率均为100.00%,对替加环素和多黏菌素B敏感。82株非产碳青霉烯酶的对照菌株对亚胺培南、厄他培南均敏感,对头孢曲松的耐药率为100.00%。以PCR结果为金标准,试验菌通过改良Hodge试验检测的灵敏度为92.50%,特异性为97.56%;Carba NP试验检测的灵敏度为94.17%,特异性为98.78%;mCIM试验检测的灵敏度为98.33%,特异性为100.00%。与PCR结果相比,改良Hodge试验的一致率为94.55%,Kappa值为0.8885;Carba NP试验的一致率为96.04%,Kappa值为0.9188;mCIM试验的一致率为99.01%,Kappa值为0.9796。结论 Carba NP试验和mCIM试验在快速检测产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌较改良Hodge试验具有更高的敏感性和特异性,并且操作简便,适合在临床微生物学实验室、医院感染控制室及疾病预防控制系统各单位普及应用。

瑞安地区慢性乙型肝炎核苷(酸)类药物不应答患者P区耐药分析

目的分析瑞安地区慢性乙型肝炎核苷(酸)类药物治疗不应答患者血清中HBV P区变异情况和核苷(酸)类药物耐药情况。方法检测逆转录酶11个位点上的碱基突变情况,分析耐药基因耐药位点相关突变情况及不同核苷(酸)类药物的突变形式,根据位点变异情况,计算敏感性下降和耐药情况。结果检测202例乙型肝炎患者11个基因位点,其中54.46%发生1个或1个以上位点突变。突变的基因位点有173V、180L、181A、184T、202S、204M、236N,构成比分别为5.21%、25.52%、17.71%、3.13%、2.08%、39.06%、7.29%。另外P区耐药突变形式分析中,110例患者的样本在11个分析位点上共有17种突变模式。核苷(酸)类药物敏感性下降或耐药情况,202例乙型肝炎DNA中拉米夫定的耐药率最高,为45.05%,恩曲他滨、替比夫定、恩替卡韦、阿德福韦的耐药率分别为43.56%、34.65%、31.68%、10.89%,未发现替诺福韦的耐药株。结论阿德福韦和替诺福韦可作为核苷(酸)类药物治疗出现反弹的首选药物。

血流感染中非O1／非O139群霍乱弧菌的毒力基因及分子分型特征分析

目的分析血流感染中非O1/非O139群霍乱弧菌的毒力基因及分子分型特征，为诊断、治疗和制定预防措施提供依据。方法5株测试菌株均分离自2012年至2015年在瑞安市人民医院住院的5例败血症患者的血液标本，对病原菌进行形态学观察、菌株鉴定、药物敏感试验和多位点序列分型（MLST）技术分析，并选取霍乱弧菌主要的17个毒力基因进行PCR检测。结果血流感染中分离的5株病原菌经鉴定均为非O1/非O139群霍乱弧菌。药物敏感试验结果显示5株试验菌对四环素（TE）、环丙沙星（CIP）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、美罗培南（MEN）、阿米卡星（AK）、庆大霉素（CN）等均敏感；1株对复方新诺明（SXT）耐药；5株对氨苄西林（AMP）均耐药。MLST结果显示，5株病原菌均为新的ST型，分别为ST268、ST269、ST267、ST270、ST271，且发现两个新的等位基因mdh60、pyrC86。毒力基因检测显示5株病原菌分为4个毒力基因型，RY02、RY04（hlyA＋toxR＋hap＋rtxA＋nanH＋vasH＋vasA＋vasK＋）、RY01（hlyA＋toxR＋hap＋rtxA＋nanH＋vasH－vasA＋vasK－）和RY03（hlyA＋toxR＋hap＋rtxA＋nanH－vasH＋vasA＋vasK＋；RY05：hlyA＋toxR＋hap＋rtxA＋nanH＋vasH－vasA－vasK－）。结论非O1/非O139群霍乱弧菌在免疫低下患者中可引起人类血流感染，其致病性可能与hlyA、toxR、hap、rtxA、T6SS等毒力基因有关。

GeneXpert MTB/RIF系统在疑似结核病患者中的诊断价值

目的评价GeneXpert MTB/RIF系统在临床疑似结核病患者中的诊断价值。方法对临床疑似结核病患者的220份标本分别进行抗酸涂片镜检、结核分枝杆菌培养、鉴定及比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF系统检测结核分枝杆菌及利福平敏感性。应用统计学方法分析GeneXpert MTB/RIF系统检测结果。结果 GeneXpert MTB/RIF系统与罗氏培养法检测结核分枝杆菌之间的差异无统计学意义(P>0.05),并且通过Kappa检验2种方法检测的结果,一致性较好(Kappa=0.944)。GeneXpert MTB/RIF系统与抗酸涂片镜检检测结核分枝杆菌之间的差异有统计学意义(P<0.05)。Kappa检验2种方法检测的结果,一致性一般(Kappa=0.726)。以结核培养为金标准,220份疑似结核病患者的标本中,GeneXpert MTB/RIF系统检测结核分枝杆菌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.92%、97.92%、95.45%、98.60%。结论 GeneXpert MTB/RIF系统在临床疑似结核病患者的诊断中具有重要价值。