日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫差异表达蛋白的筛选与鉴定

采用双向凝胶电泳和质谱技术对日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫蛋白质表达谱进行分析,并在mRNA水平进行验证;观察差异表达SJCHGC蛋白重组真核表达质粒pEGFP-C1/SJCHGC在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,并分析其表达产物的抗原性.成功鉴定了9个日本血吸虫雌雄合抱差异表达蛋白,其中在日本血吸虫雄虫合抱前表达上调的蛋白质有6个;而有3个蛋白质在日本血吸虫雄虫合抱后表达明显上调.大多数差异蛋白功能涉及血吸虫的生长发育、生殖、营养、运动、信号传递等过程.重组质粒pEGFP-C1/SJCHGC融合基因真核表达载体在真核细胞COS-7中获得了表达,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,细胞所表达的融合蛋白具有血吸虫抗原性.研究结果为揭示日本血吸虫雌雄合抱机制、研制抗血吸虫雌雄合抱疫苗提供了理论依据.

人类巨细胞病毒感染对U251细胞HOXB1基因表达的影响

目的 :通过研究人神经胶质瘤U2 5 1细胞株的HOX基因表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对U2 5 1细胞HOXB1基因表达的影响 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。方法 :应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :U2 5 1细胞表达HOXB1基因 ;HCMV感染后 ,U2 5 1细胞HOXB1基因表达明显上调 ;ATRA能显著上调HCMV感染后U2 5 1细胞HOXB1基因的表达。结论 :HCMV感染能诱导U2 5 1细胞HOXB1基因表达上调 ,HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。

日本血吸虫合抱相关未知功能基因SJCHGC00821的克隆及生物信息学分析

目的克隆与日本血吸虫合抱相关但未知功能的新基因SJCHGC00821,构建其真核表达载体,并应用生物信息学初步探讨其功能。方法应用PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增SJCHGC00821基因全长ORF,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3中,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定。应用生物信息学初步分析其细胞定位、蛋白序列、结构域及功能。结果获得日本血吸虫合抱相关未知基因SJCHGC00821的克隆,序列分析结果提示该cDNA序列含有一个597bp的完整阅读框序列,编码198个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为22.76kDa,等电点为4.84。二级结构分析预测提示其具有一定抗原性。结论成功地克隆了日本血吸虫SJCHGC00821基因全长ORF,构建了其pcDNA3真核表达载体,为进一步研究其结构与功能创造了条件。

医学微生物学双语教学的思考与探索

双语教学是我国高等院校教育改革的一项重要内容,为适应我国社会高速发展对人才的更高要求,提高学生自身专业外语水平,本文阐述了医学院校开展医学微生物学双语教学的重要性和必要性,总结了双语教学的英文教材,教学课件与授课方法,初步探讨了医学微生物学双语教学模式,从而使医学院校学生达到既学习本专业基础知识又提高英语水平的目的。

HCMV感染对人神经胶质瘤细胞HOXB1～4及HOXB9基因表达影响的研究

目的 研究人神经胶质瘤U2 5 1细胞株的HOXB基因表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对U2 5 1细胞HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB9基因表达的影响 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。方法 应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术检测U2 5 1细胞感染HCMV和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理前后HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4和HOXB9基因的相对表达水平。结果 U2 5 1细胞表达HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB9基因 ;HCMV感染后 ,U2 5 1细胞HOXB1基因表达明显上调 ,HOXB2和HOXB4基因表达轻微上调 ,HOXB3基因于HCMV感染后表达被抑制 ,HOXB9基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化 ;ATRA能显著上调HCMV感染后U2 5 1细胞HOXB1基因的表达。结论 HCMV感染能诱导U2 5 1细胞HOXB基因表达改变 ,HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。

病原生物学研究生开设生物安全课程的重要性探讨

高等医学院校是培养医学研究人才的重要场所,研究生是医学研究实验室的主要力量。医学研究生有很多机会接触各种病原微生物、有毒物、化学品和辐射物质等,因此加强医学研究生实验室生物安全教育、培养医学研究生的生物安全意识非常重要。文章通过对当前病原生物学发展与生物安全现状的分析,探讨在高等医学院校病原生物学研究生中开设生物安全课程的重要性。

长沙市146对孕妇和新生儿巨细胞病毒感染调查

目的 :对长沙市的孕妇和新生儿巨细胞病毒感染进行调查。方法 :用ELISA及PCR技术对长沙市 146对母婴HCMV -IgG ,IgM及HCMV -DNA进行检测。结果 :在 146对母婴中 ,HCMV -IgG阳性率分别为95 .9% (140 / 146 )和 94.5 % (138/ 146 ) ,HCMV -IgM阳性率分别为 5 .5 % (8/ 146 )和 1.4% (2 / 146 ) ,血浆HCMV -DNA阳性率分别为 2 4% (35 / 146 )和 18.5 % (2 7/ 146 )。新生儿HCMV -DNA阳性率显著高于HCMV -IgM的阳性率 (P <0 .0 5 )。结论 :孕妇普遍感染过HCMV ,在妊娠期间可发生活动性感染。同时 ,新生儿有可能产生先天性HCMV感染。

日本血吸虫中国株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的克隆、表达及其免疫保护性研究(英文)

根据基因库中日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)EST(BU803192)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接,获得SjHGPRT全长cDNA(1270bp),经序列分析,推断该片段含有编码SjHGPRT基因的完整阅读框,其编码基因与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SmHGPRT)全长编码基因碱基一致性为82%,其理论推导的氨基酸组成与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的一致性约为83%.将其编码基因克隆到表达载体pQE30上,在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达,表达产物分子质量约为28ku.用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行蛋白质印迹检测,在预测位置上出现明显的识别条带.重组蛋白动物免疫保护性结果显示:在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和雌子宫内卵数方面,疫苗组与对照组比较差异均具有显著性(P<0.05,P<0.01).结果表明,日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达,表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果,是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗血吸虫病疫苗候选分子.

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用——HGPRT是否是主要的靶抗原(英文)

目的 观察日本血吸虫SIEA2 6 2 8kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA2 6 2 8kDa成分 ,并以此纯化产物免疫BALB/c小鼠。将小鼠分为三组 ,分别用SIEA、SIEA2 6 2 8kDa和免疫佐剂免疫动物 ,然后进行尾蚴攻击感染。 4 6天后剖杀动物 ,冲虫 ,然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果 SIEA2 6 2 8kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为 5 4 .8% ,与对照组比较有极显著性差异 ;该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了 4 8.0 7%和 77.4 1% ,且以成熟虫卵数的下降较为显著 ,分别降低了 83.6 %和 93.3% ;粪卵数的下降幅度最为显著 ,达87.2 6 %。结论 SIEA2 6 2 8kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。

黑胸大蠊室内繁殖、发育的生物学特性研究

目的阐明药用昆虫黑胸大蠊室内繁殖、发育的生物学特征。方法系统观察黑胸大蠊在人工饲养条件下生殖产卵、孵化、若虫生长、蜕皮、羽化等生活史全过程。结果统计分析了卵鞘长度、每鞘含卵数及分布、卵孵率、鞘孵率、卵期、若虫发育历期、羽化率、性比、成虫寿命、雌虫产卵期等生物学特征参数。结论实验结果为建立黑胸大蠊的人工饲养及大量繁殖方法提供了重要的科学依据和详细的实验观察资料。

致弱尾蚴免疫血清与日本血吸虫不同发育阶段抗原免疫反应性的研究

目的 通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法 分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原 ;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平 ;通过SDS PAGE电泳和免疫印迹技术 ,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性。结果与结论 SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同。间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平。致弱尾蚴免疫血清共筛选出 2 3种具免疫学活性的抗原分子 ,分子量分别为 :2 4 .5kDa、2 8kDa、36kDa、4 3kDa、4 4kDa、4 8kDa、5 4kDa、5 8.5kDa、6 0kDa、6 2kDa、6 6kDa、6 8kDa、70kDa、75kDa、79kDa、85kDa、87kDa、91kDa、95kDa、97kDa、10 5kDa、10 8kDa、110kDa。其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占 11种 ,尾蚴抗原分子 4种 ,雄性成虫抗原分子 3种 ,雌性成虫抗原分子 6种 。

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。

日本血吸虫中国株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白真核重组体的构建及其免疫小鼠的保护性研究

目的研究日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护性效果。方法将全长SjSDISP基因克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP,用重组裸DNA免疫昆明小鼠3次,间隙2W,末次免疫后第二周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42 d处死小鼠,剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率。结果经双酶切、PCR和测序验证,表明真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP构建成功。动物免疫保护性实验结果显示:pcDNA3-SjSDISP疫苗组减虫率较低,与对照组相比减虫效果不明显(P>0.05);但在每克肝卵、每克粪卵和每雌子宫内卵方面,与对照组相比差异均具有显著性(P<0.01)。结论日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白DNA疫苗可能主要在抗血吸虫卵胚发育或抗生殖起作用,具有潜在的疫苗研究与开发价值。

人巨细胞病毒AD_(169)株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 。

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 。

人类巨细胞病毒感染对神经胶质瘤细胞HOXB5,HOXB6,HOXB7及HOXB8基因表达的影响

以半定量RT -PCR技术检测经人类巨细胞病毒 (HCMV)感染和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理的神经胶质瘤细胞U2 5 1株的HOXB5 ,HOXB6 ,HOXB7和HOXB8的相对表达水平 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。结果示 ,未经处理的U2 5 1细胞不表达HOXB5 ,HOXB6及HOXB8,但表达HOXB7;HCMV感染和 /或ATRA处理后 ,细胞仍不表达HOXB5及HOXB6 ,但在第二代时均表达HOXB8,尤以HCMV和ATRA共同处理后更明显 ;第三代后HOXB8的表达恢复正常。HCMV和 /或ATRA处理细胞后 ,HOXB7的表达在第一代即上调 ,第二代、第三代其表达稍下降 ,至第四代时表达又上调。表明HCMV致畸作用可能是通过诱导HOX基因的表达进而调节其它基因的异常表达而实现。

日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达

目的:克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法:根据基因库中SjSDISP对应的EST(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果:获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL21中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论:编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。