探究云南省消毒供应专业发展现状与需求

目的调查云南省内各级医疗机构消毒供应中心(CSSD)三项强制性行业标准(WS310-2016)执行现状,对比省外CSSD发展差距,调研发展需求。方法依据WS310-2016要求和现阶段云南省各级医疗机构CSSD发展现状设计调查问卷,确定46项细化指标,2022年9月与2023年12月分别通过网络调查对省内外各级医疗机构WS310-2016的落实现状进行调查分析。结果调查的382所医疗机构中,云南省内有195所,省外有187所,云南省内外各级医疗机构占比差异无统计学意义(P>0.05),其中省内能够完全落实行业标准的有23所(11.8%),省外有29所(15.5%),云南省内CSSD人力资源、设备设置配置、器械管理及质量监测等方面均不同程度落后于省外发达地区,差异有统计学意义(P<0.05)。结论云南省内CSSD发展与省外有一定差距,资源配置等制约标准执行,组建CSSD专家团队,建立省级CSSD质量控制中心,共建学术交流平台,以加快云南省CSSD标准化、规范化、同质化进程。

hMSC对异体DC-CIK细胞分泌细胞因子的影响

目的:通过检测人骨髓间充质干细胞(hMSCs)对共培养的异体树突状细胞活化的细胞因子激活的杀伤细胞(DC-CIK细胞)分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4和IL-2的影响,探讨hMSCs的免疫调控机制。方法:从健康人骨髓液中分离、培养hMSCs,通过观察细胞形态,检测其分化为神经元样细胞的神经元烯醇化酶(NSE),脂肪样细胞的油红O染色以及CD29和CD44的表达鉴定hMSCs。从健康人的外周血分离、培养DC,CIK细胞。用流式细胞术(FCM)检测CD1α,HLA-DR的表达来鉴定DC;检测CIK细胞CD3+CD56+的表达。将hMSCs与DC-CIK细胞以1:10的比例共培养4d,用FCM检测培养上清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4和IL-2的含量。结果:hMSCs呈长梭形,表达CD29和CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%,分化为神经元样细胞的NSE阳性;脂肪样细胞的油红O染色为阳性。DC细胞表达CD1α,HLA-DR的阳性细胞数分别为(91.9±10.04)%,(88.80±8.92)%。DC与CIK细胞共培养第4天表达CD3+CD56+的细胞数为29.23±12.23%。hMSCs与DC-CIK细胞共培养第4天的培养上清中IFN-γ为(135.05±48.19)ng/L;TNF-α为(11.33±1.42)ng/L;IL-10为(10.15±2.25)ng/L;IL-6为(494.63±235.222)ng/L;IL-4为(7.07±2.30)ng/L;IL-2为(1074.63±303.74)ng/L。对照组(DC-CIK细胞)的IFN-γ为(717.60±248.15)ng/L;TNF-α为(17.78±7.52)ng/L;IL-10为(29.95±12.76)ng/L;IL-6为(8.03±0.21)ng/L;IL-4为(9.08±3.07)ng/L;IL-2高于1250ng/L。结论:DC-CIK细胞与hMSCs共培养后,IFN-γ分泌减少,IL-10轻微下调。表明hMSCs可能通过干扰DC-CIK细胞分泌细胞因子来发挥免疫调节作用。

体外定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞的研究

[目的]探索体外定向诱导人胚胎干细胞(hES细胞)分化为表皮样干细胞的条件,为研究其定向分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础.[方法]将人胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜上皮面向上全铺或半铺布半孔底共培养4～5 d,观察其形态变化并分别用β1整合素,CK15及CK19免疫组化检测人胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化.[结果]人胚胎干细胞与人羊膜共培养4～5 d后,在人羊膜上皮面形成表皮样干细胞集落,表达高水平的表皮干细胞特异标记物β1整合素、CK15和CK19.在无羊膜覆盖处,细胞贴壁生长,形成单层表皮样细胞,细胞呈多边形,排列紧密,大部分细胞表达β1整合素.对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞.[结论]在体外人羊膜可定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞,并提示在羊膜上皮面的细胞克隆可能是表皮样干细胞,而贴壁生长的细胞可能大部分是表皮样瞬间放大细胞.

人胚胎干细胞源性表皮样干细胞分化潜能

[目的]探讨人胚胎干细胞源性表皮样干细胞的分化潜能,为研究其分化的调控机制及寻找新的人皮肤组织工程种子细胞奠定基础。[方法]将人胚胎干细胞与人羊膜共培养4 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,用胰酶消化后移植裸鼠皮下20 d、30 d及50 d。对移植后细胞的分化情况进行了形态学和免疫组织化学观察分析。[结果]人胚胎干细胞源性表皮样干细胞在裸鼠皮下20-30 d后,细胞分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状或泡状结构,它们可分别呈CEA和CK18阳性。种植50 d后,除上述结构外,可见角化复层扁平上皮、毛囊样、汗腺样及皮脂腺样等结构。[结论]研究结果提示人胚胎干细胞源性表皮样干细胞具有分化为角化复层扁平上皮及毛囊样、汗腺样和皮脂腺样等结构的潜能。

恶性实体瘤患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖与杀瘤活性

目的探讨恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖能力、免疫表型及杀瘤活性。方法用rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb与恶性实体瘤患者外周血单个核细胞共孵育。分别在培养第4、7、10、13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型及MTT法检测对K562细胞的杀伤活性。结果恶性实体瘤患者外周血单个核细胞与rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb孵育4、7、10、13d,细胞数分别增加(2.5±1.6)、(11.9±3.5)、(22.3±7.8)和(29.5±6.1)倍。CD3+、CD4+、CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别从(62.8±7.6)%、(31.5±5.8)%、(44.9±8.2)%和(1.3±1.1)%增加到(89.3±9.5)%、(50.1±7.2)%、(57±9.0)%和(37.0±12.7)%。对K562细胞的杀伤效应在第4、7、13天分别为(23.6±8.5)%、(56.4±7.2)%和(80.1±4.5)%。结论rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb诱导恶性实体瘤患者外周血单个核细胞活化为以CD3+CD16+CD56+为主的细胞因子诱导的杀伤细胞,细胞增殖力强,并对K562细胞有强大的杀伤活性。

人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞的分化

背景:国内外的研究多采用细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞,而较少用人羊膜与骨髓间充质干细胞共培养的方法进行诱导分化。目的:观察人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的可行性。方法:体外分离培养、扩增人骨髓间充质干细胞,选用第5代人骨髓间充质干细胞与健康人羊膜共培养12d进行诱导分化。结果与结论:人骨髓间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形,流式细胞仪检测表达CD29,CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%。人羊膜与人骨髓间充质干细胞共培养12d,人骨髓间充质干细胞渐变为扁平的表皮样细胞,免疫组化染色显示CK19散在阳性,广谱CK为弥漫阳性。说明人羊膜可诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞。

川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的 用川芎嗪 (ligustrazinhydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,rMSCs)分化为神经元样细胞。 方法 用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用第 5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化。用 10 μg LbFGF预诱导 2 4h ,更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白 (NF M)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)、微管联合蛋白 2 (MAP 2 )、生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。 结果 第 5代间质干细胞形态达到均一 ,呈梭形。用川芎嗪诱导 15min到 3h ,间质干细胞胞体逐渐增大 ,并伸出细长突起形似神经元样细胞。免疫组织化学显示NF M、NSE、nestin、MAP 2和GAP 4 3表达阳性 ,而GFAP阴性。对照组上述染色均为阴性。 结论 川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。

三七总皂甙诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

【目的】用三七总皂甙 (totalPanaxnotoginsengsaponins)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchy malstemcell,rMSC)分化为神经元样细胞。【方法】用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用第 5代后的间质干细胞进行诱导分化。用 10 μg/LbFGF预诱导 2 4h ,更换成含三七总皂甙的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组化SABC法鉴定神经丝蛋白 (NF M )、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白 (nestin)、微管联合蛋白 2 (MAP 2 )、生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。【结果】第5代间质干细胞形态达到均一 ,呈梭形。用三七总皂甙诱导 30min到 5h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示NF M、NSE、MAP 2、GAP 4 3、nestin表达阳性 ,而GFAP阴性。【结论】三七总皂甙可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。

人原始生殖细胞分离培养的初步研究

[目的]探讨分离培养人原始生殖细胞的最佳条件。[方法]用胰蛋白酶消化5～9周人流组织中的人胚生殖嵴,获取人原始生殖细胞。以小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层,在高糖DMEM培养基中添加10μmol/L福司克林(forskolin)和5～μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养液中培养、传代,并对子代细胞进行碱性磷酸酶活性检测和体外分化实验。[结果]原代培养时形成许多大小不等,形态各异的由人原始生殖细胞组成的集落,约5～7d传代。传代后,集落生长,变大。细胞培养到第七代,检测碱性磷酸酶染色为强阳性,体外分化实验有拟胚体形成。[结论]人原始生殖细胞可以用胰蛋白酶消化分离培养。用高糖DMEM培养基,添加forskolin和bFGF有利于人原始生殖细胞增殖。体外分化实验初步证实人原始生殖细胞具有多向分化潜能。

恶性实体瘤患者自体CIK细胞的体外扩增及初步临床应用

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)在自体血浆中的增殖特性,回输治疗的安全性及近期疗效。方法用淋巴细胞分离液分离获取40例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为CIK细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,CIK细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别为(93.0±6.1)%和(25.8±12.2)%。40例恶性实体瘤患者回输自体CIK细胞后,6例部分缓解;13例好转;9例病情稳定;12例进展。治疗总有效率为15%。治疗过程中主要出现畏寒、发热,未观察到其它明显的毒副作用。结论恶性实体瘤患者自体血浆可以高效扩增CIK细胞,回输治疗安全有效,且无明显的毒副作用。

恶性实体瘤患者自体细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗的安全性改进

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞在自体血浆中的增殖特性及静脉回输治疗的安全性。方法用淋巴细胞分离液分离获取50例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为细胞因子诱导杀伤细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,细胞因子诱导杀伤细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别占(93.0±6.1)%、(28.4±7.2)%、(65.5±4.5)%和(25.8±12.2)%。恶性实体瘤患者回输自体细胞因子诱导杀伤细胞的治疗过程中未观察到明显的毒副作用,主要表现有畏寒、发热。结论恶性实体瘤患者血浆可以高效扩增自体细胞因子诱导杀伤细胞,临床应用安全可靠,且无明显的毒副作用。

多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型

目的:用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化. 方法:用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞,rhIFN-γ,rhIL-2,Anti- CD3mAb共孵育.分别在第0,4,7,10,13 d计细胞数,并通过流式细胞术检测细胞免疫表型. 结果:大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-γ,IL-2,Anti- CD3mAb共孵育4,7,10,13d,细胞数分别增加2.69±0.9, 14.1±3.7,23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+,CD4+,CD8+ 和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%, (31.5±5.8)%,(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%,(48.0±6.3)%,(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%. 结论:rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞,体外增殖力强,是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.

补体旁路活化对血小板形态的影响

目的:探讨酵母多糖A活化补体旁路对SD大鼠血小板形态的影响。方法:采集健康SD大鼠颈动脉血,制备富血小板血浆,分别加入(1.0、2.5、5.0)×10-3 g/L酵母多糖A,用血小板聚集仪测定血小板聚集曲线,电镜观察血小板的超微结构。结果:5.0×10-3 g/L酵母多糖A可引起血小板明显的变形和轻微的聚集。酵母多糖A在(1.0、2.5、5.0)×10-3g/L范围内,血小板的变形幅度与酵母多糖A剂量对数呈正相关(r=0.7835,P<0.01)。电镜观察见活化的血小板变形,有伪足样突起,胞质内颗粒减少或融合。结论:酵母多糖A可经补体旁路活化SD大鼠血小板,使血小板发生变形和释放胞质颗粒。

采用高速离心及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体比较及鉴定

比较及鉴定超高速离心法及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体。采用BCA蛋白检测可见ExoQuick-TC法提取的外泌体蛋白含量高于超高速离心法提取的蛋白含量。Exosome Antibodies,Array&ELISA Kits检测可见ExoQuick-TC法提取外泌体的纯度优于超高速离心法提取的纯度。两种方法提取的外泌体电镜下形状无差异,随机选取3个电镜视野进行计数可见ExoQuick-TC法提取外泌体数量多于超高速离心法提取外泌体。ExoQuick-TC法提取的外泌体具有更高的产量及纯度。

大鼠外周血及骨髓来源树突状细胞的培养及鉴定

目的培养及鉴定大鼠外周血及骨髓来源树突状细胞(DC)。方法分离大鼠外周血及骨髓单个核细胞,加入20 ng/m L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、10 ng/m L白细胞介素4(IL-4)培养10 d。流式细胞术检测CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、整合素分子OX62的表达确定未成熟DC。成熟的DC在加入以上剂量的GM-CSF、IL-4处理基础上,再加入4μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理,流式细胞术检测CD80、CD86、MHCⅡ、OX62的表达,光镜及透射电镜检测细胞形态。结果流式细胞术检测结果表明,外周血来源的DC OX62表达较高、骨髓来源的DC的OX62表达较低,经TNF-α诱导后,外周血来源的成熟DC和骨髓来源的成熟DC的OX62水平均明显增加。两种方法提取的DC光镜下形态无差别,电镜下可见外周血来源的成熟DC的突起明显多于骨髓来源的成熟DC。结论外周血更容易获得和诱导高纯度的成熟DC。

三七总皂甙诱导MSCs分化为神经元样细胞时胞内钙离子浓度变化的研究

目的探讨三七总皂甙(tPNS)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞过程中细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。方法LDMEM冲洗SD大鼠股骨骨髓腔,培养大鼠MSCs。选用第5代MSCs进行诱导分化,用含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的LDMEM培养液预诱导24h,加入含10μmol/LFluo3/AM的LDMEM培养液负载30min,最后更换成含三七总皂甙0.25g/L的无血清培养液,同时在波长为488nm激光下扫描观测细胞形态和荧光强度的变化。结果更换三七总皂甙诱导液后,细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20min时细胞荧光强度仍高于诱导前,此时可见MSCs开始向神经元样细胞分化。结论三七总皂甙在体外诱导MSCs分化为神经元样细胞过程中胞内游离钙离子[Ca2+]i浓度升高。

慢性粒细胞白血病患者骨髓中白血病相关巨噬细胞的表达及意义

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中巨噬细胞的表达及在CML发病中的作用,明确其临床意义。方法采用免疫组织化学染色法检测CML慢性期(CML-CP组)30例、加速期(CML-AP组)21例、急变期(CML-BP组)15例、经治疗后缓解患者44例、未缓解患者7例及30例非血液系统恶性疾病患者骨髓组织中CD68、CD163、CD206的表达变化,比较骨髓巨噬细胞在CML患者不同时期骨髓组织中的表达差异。结果 CML各组患者骨髓组织中CD68、CD163、CD206的表达明显高于对照组及缓解组,CML-BP组患者高于CML-AP组,CML-AP组高于CML-CP组,且差异均有统计学意义(P<0.01);缓解组CD68虽高于对照组但差异无统计学意义(P>0.05),而CD163、CD206仍高于对照组,且差异均具有统计学意义(P<0.01),未缓解组与CML-BP组相比有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);在对照组中CD163和CD206表达明显低于CD68的表达,且差异具有统计学意义(P<0.01),同时,CML-CP组、CML-AP组、CML-BP组、缓解组、未缓解组中CD163与CD68阳性细胞数密切相关(P<0.01),CD68的阳性细胞数略高于CD163,但差异无统计学意义(P>0.05);而在CML疾病的同一时期CD163、CD206的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论巨噬细胞在CML患者骨髓中具有较高的浸润密度,并随着病情的进展逐渐向M2型极化,且在CML不同时期浸润密度不同,与CML的发生、发展密切相关,同时也可能是CML患者复发的原因之一。而在骨髓组织中CD163、CD206均可作为识别M2型巨噬细胞的标志物。

PCT、CRP在支气管哮喘合并呼吸道感染中的诊断价值

目的探讨血清降钙索原(PCT)、C反应蛋白(CRP)对哮喘合并感染患者的诊断价值。方法对120例哮喘及哮喘合并感染者采用免疫发光法定量测定患者血清PCT水平,自动免疫散射速率比浊法测定CRP水平。结果哮喘合并细菌感染患者PCT、CRP水平明显高于哮喘合并病毒感染及单纯哮喘患者(P<0.01)。哮喘合并细菌感染组中PCT和PCRP水平明显高于哮喘合并病毒感染组和单纯性哮喘组(P<0.01)。哮喘合并病毒感染组PCT轻度增加,与单纯性哮喘组比较差异虽有统计学意义(P<0.05),但诊断价值不明显。以PCT≥0.5μg/L为界,诊断细菌感染的敏感性87.5%(49/56),以CRP≥10mg/L为界,诊断细菌感染的敏感性为71.1℅。结论血清学PCT、CRP指标能早期正确鉴别哮喘合并细菌感染患者,血清PCT、CRP水平高低可作为是否使用抗菌药物的参考依据。

干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及其与K-ras基因突变的相关性研究

背景与目的:结直肠腺瘤-癌序列是目前公认的结直肠癌演变过程,该过程伴随一系列基因突变及蛋白的异常表达和积累。本研究旨在探讨结直肠癌发生、发展过程中干扰素诱导蛋白16(interferon induced 16,IFI16)表达及其与K-ras基因突变之间的相关性。方法:收集云南省第一人民医院病理科2008—2009年门诊及手术的结直肠正常黏膜组织、腺瘤和腺癌各发展阶段标本,应用免疫组化SP法检测IFI16表达情况;应用PCR-RFLP法对结直肠癌标本K-ras基因12密码子进行检测,并与IFI16进行相关性分析。结果:IFI16在结直肠腺癌与腺瘤、腺瘤与正常结直肠黏膜组织中蛋白表达差异均有统计学意义(49.2%vs 25%,P<0.05;25%vs 0%,P<0.05)。结直肠癌患者K-ras基因突变率为38.3%;K-ras基因变异与IFI16表达无相关性(55.2%vs 44.4%,P>0.05),但与IFI16异位表达差异有统计学意义(13.8%vs 72.2%,P<0.05),两者之间呈显著相关(r=0.635,P<0.01)。结论:IFI16参与了结直肠癌的发生、发展过程,K-ras基因突变与IFI16异位在结直肠癌的发生、发展过程中起重要作用。