直接ELISA检测沙门氏菌方法的建立及其应用研究

从已获得的４株沙门氏菌属特异杂交瘤单克隆抗体中，筛选出ＣＢ８和ｄｅ７两株单抗组合成酶标检测试剂，并建立了检测沙门氏菌的直接ＥＬＩＳＡ方法。它能检出沙门氏菌属９９％的菌株，而不与其他肠道杆菌反应（包括大肠杆菌、阴沟杆菌、产气杆菌、志贺氏菌、枸椽酸杆菌、克雷伯氏菌、变形杆菌和沙雷氏菌）。应用本方法检测粪样、鱼粉、奶样，其敏感性和特异性分别高达１００％和９７．６％，仅出现２．４％的假阳性率。该法不受各种样品成分的影响，而且在２～３ｄ即可完成样品筛选。直接ＥＬＩＳＡ具有快速简便、易于推广的优点，有重要实用价值。

免疫鸡群感染新城疫强毒后的排毒规律

将经过２次新城疫（ＮＤ）基础免疫的ＳＰＦ鸡，随机分成５组，每组８只，在６０日龄时分别用Ｆ４８Ｅ８、Ｔｅｘａｓ、Ｈｅｒｔ３３ＮＤ强毒和Ｌａｓｏｔａ弱毒经口腔接种０．２５ｍＬ／只，１２ｈ后采取泄殖腔棉拭，利用ＮＤ强毒快速诊断试剂盒进行排毒的动态监测，并在攻毒前期、中期、后期测定各试验组ＳＰＦ鸡的ＨＩ效价。试验第３天开始排毒，２０ｄ结束，其间在６～７ｄ和１１～１３ｄ出现２次排毒高峰。ＨＩ抗体在初期先是降低１个滴度，后期开始升高而且离散度不断增大。

多重聚合酶链反应检测污水中产气荚膜梭菌

根据产气荚膜梭菌产生 4种主要毒素 ( α,β,ε,ι毒素 )可分为 A～ E5种菌型 .依据产气荚膜梭菌的 5种毒素基因的序列 ,设计 5对 PCR引物 ,建立多重聚合酶链式反应 ( PCR)方法 ,以快速区分 5种类型的产气荚膜梭菌 .6 8份环境样品 (生活污水、屠宰场污水 )的常规检测和基因分型共检出 5 5株产气荚膜梭菌 ,其中 A型产气荚膜梭菌 5 1株 ,占总数的 90 %以上 ,B,C,D 3种类型只占 5 % ,试验未检出 E型产气荚膜梭菌 ,所有的分离株未发现带有肠毒素 .结果表明 :目前污水中主要存在的菌型为 A型菌 ,其他菌型的产气荚膜梭菌很少 。

多重聚合酶链反应检测环境中产气荚膜杆菌

产气荚膜杆菌根据产生 4种主要毒素 (α、β、ε、ι 毒素 )可分为 5种类型A E型。在该研究中依据产气荚膜杆菌的 5种毒素基因的序列 ,设计了 5对PCR引物 ,建立了多重PCR方法 ,该方法可以快速区分 5种类型的产气荚膜杆菌。并对 68份环境样品 (生活污水、生物肥料 )进行检测和基因分型 ,共检出 55株产气荚膜杆菌 ,其中A型产气荚膜杆菌 50株 ,占总数的 90 %以上 ,B型、C型、D型只占 5 % ,未检出E型产气荚膜杆菌 ,所有的分离株没有发现带有肠毒素。结果表明 ,目前环境中主要存在的菌型为A型菌 ,其他菌型的产气荚膜杆菌很少 。

免疫鸡群感染新城疫强毒后排毒规律研究

将经过２次新城疫（ＮＤ）疫苗基础免疫的ＳＰＦ鸡，随机分成５组，每组８只，在６０日龄时分别用Ｆ４８Ｅ８、Ｔｅｘａｓ、Ｈｅｒｔ３３、Ｌａｓｏｔａ等新城疫强毒和弱毒经口腔接种（剂量为０２５ｍＬ），１２ｈ后采取泄殖腔棉拭样品，利用ＮＤ强毒快速检测试剂盒进行排毒的动态监测，并在攻毒前期、中期、后期测定各试验组ＳＰＦ鸡的ＨＩ效价．结果发现试验组鸡群中个体在第３天开始排毒，２０ｄ左右排毒结束，其间在６～７ｄ和１１～１３ｄ出现两次排毒高峰．ＨＩ抗体在初期先是降低１个滴度，后期开始升高，而且ＨＩ抗体的离散度不断增大．

多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。

应用直接ELISA快速检测肉品中沙门氏菌

本试验应用沙门氏菌属特异单克隆抗体CB_8和de_7建立了检测沙门氏菌的直接ELISA方法,它能检出肉样中至少5CFU/25g样品,并在48h内得出结果。该法对沙门氏菌的最低检测量为10~6CFU/ml。在对305份肉样检测时,其阳性检出率为8.9％,采用常规方法检测,其阳性检出率为8.2％。而且,该方法的特异性和敏感性分别为100％和99％,两者符合率为99.3％。与常规方法相比,该方法具有快速、简便、准确及微量等优点,并且省去常规方法的繁琐步骤,提高了检测效率,不需高值仪器,易于基层的普及推广。

产气荚膜梭菌肠毒素的致病机理研究进展

产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病的病原体 ,可引起人的食物中毒和抗生素相关腹泻 ,产气荚膜梭菌肠毒素是该菌的一个非常重要的致病毒素 ,在引起人的胃肠疾病方面起着关键性的作用 ,本文对产气荚膜梭菌肠毒素产生。

沙门氏菌快速检测试剂盒的研制及其应用

在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。

40例鸡沙门氏菌病病原分离与鉴定

1988年3～6月,我们在某县兽医院禽病门诊室,见有不少病死鸡的肝脏肿大,呈古铜色(紫红色),间或有点状灰白色坏死灶。多数病死鸡在3周龄以上。从发病年龄和病变看,象鸡伤寒或副伤寒,难以区别,当地兽医都认为是鸡伤寒。为此,我们采集了40例病死鸡肝脏,进行病原分离与鉴定,现将情况报告如下。一、发病日龄和主要病变 40例病死鸡中,7至20日龄6例。肝脏肿大,条纹状出血,表面见有坏死灶,肺或心肌上有坏死结节,部分鸡卵黄吸收不良。

ELISA直接检测鲜奶中的沙门氏菌

沙门氏菌是肠杆菌科中一大类重要致病菌,在动物和人群中广为散播,引起人和动物的疾病,严重的会出现死亡,在公共卫生上具有重要意义。沙门氏菌已成为引起细菌性食物中毒的主要致病菌之一,约占食物中毒总病例的40％。其中许多沙门氏菌病系通过奶制品传播;因此鲜奶的卫生与否密切关系人的健康。长期以来,我们对鲜奶的沙门氏菌检测采用国标方法,该法以分离培养、生化及血清学试验为基础,操作繁琐、工作量大、耗时,阴性结果报告需4～5天,阳性结果报告需6～7天,这么长的检验时间,既增加生产成本,也影响产品质量。为此,我们在王志亮等研制的沙门氏菌属特异单克隆抗体的基础上,建立了直接ELISA方法,对500份鲜牛奶样品进行沙门氏菌检测,同时作国标方法平行检测试验,取得满意的结果,现报告如下。

应用直接ELISA快速检测蛋品中的沙门氏菌

应用直接ＥＬＩＳＡ快速检测蛋品中的沙门氏菌文其乙，田银芳，陆毓明，邱军荣，焦新安扬州大学农学院（２２５００９）在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位［１］。蛋品有高营养成分，易被人体吸收，故一直是人们食用的主要食品。蛋品的卫生质量好...

沙门氏菌的基因分型和指纹图谱分析及其在分子流行病学中的应用

沙门氏菌的基因分型和指纹图谱分析及其在分子流行病学中的应用文其乙综述焦新安，张如宽审校（江苏农学院畜禽传染病实验室）沙门氏菌菌株的鉴定通常借助于生化反应和血清学试验，以确定所调查菌株的生化血清型。随着分子生物学的发展，现代生物技术手段已应用于沙门氏菌...

磁性分离技术及在微生物检测上的应用

微生物检测技术就是从样品中分离和鉴定目的微生物、通常我们使用选择性培养基来获得单个的纯化目的微生物。如果对于受到损伤的和热应激的微生物还需经过增菌培养,增菌过程应包括前增菌、选择性增菌和后增菌。因此从样品中检测病原微生物需很长的时间。

酶免疫方法快速检测沙门氏菌的研究进展

近年来,沙门氏菌引起的食物中毒病例在全世界范围内不断增加,造成了严重的经济损失和对人类健康的危害。在美国,约有40％的鸡肉被沙门氏菌污染,由沙门氏菌引起的食物中毒每年约有200万例,经济损失达10亿美元。为了有效控制沙门氏菌病的传播,就必须有快速和可靠的方法来检测食物及环境中的沙门氏菌。

二种产气荚膜梭菌培养基的计数效果的实验研究

本次试验研究了ISC培养基和m-CP培养基对四种方法处理的产气荚膜梭菌进行细菌计数,并以RCM培养基作为对照培养基。测出了两种选择性培养基对经四种不同处理后的产气荚膜梭菌的计数能力,从试验结果可知,l兀培养基在对采用四种方法处理后的产气荚膜梭菌计数总能力大于m-MP培养基14倍,因此,我们认为采用hC培养基作为检测和计数环境中各种样品中产气荚膜梭菌的数量时,要优于使用m-CP培养基。

我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定

从江苏、广东、河南、新疆、四川、北京、黑龙江等１８个省、市、自治区临诊上有典型大肠杆菌病病变的病禽１０５１羽采集病料，分离培养和鉴定出５９５株大肠杆菌。经Ｏ血清型测定，除１４４株未能定型、１１株自凝外，共鉴定出４４０个分离株的Ｏ血清型。这些分离株覆盖了６０个血清型，但以Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２、Ｏ８８、Ｏ１１、Ｏ２６、Ｏ４、Ｏ１、Ｏ１２７和Ｏ１３１等１０个血清型为主，共２６４株，占定型菌株的６０％；前６种血清型在种类上只占定型菌株血清型总数的１０％，却拥有２０４个分离株，占定型菌株的４６３６％。因此，可以认定Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２、Ｏ８８、Ｏ１１、Ｏ２６等６个血清型为优势血清型。不同地区优势血清型分离株６０个，以每分离株１０７菌落形成单位（ＣＦＵ）细菌气管内接种１日龄无特定病原体（ＳＰＦ）鸡６羽，根据接种后７天内发生死亡和病变鸡的比例，确定出高致病株、中度致病株和低致病株分别为８３３３％、１０％和６６７％；其它常见血清型Ｏ４、Ｏ１、Ｏ１２７和Ｏ１３１分离株３０个和１０个非常见血清型分离株，按同样方法接种１日龄易感鸡６羽，高致病株、中度致病株和低致病株分别为９０％、１０％和０％。结果表明：我们所收集的分离株均?

应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌

根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物 ,对沙门氏菌属 A～F各群中共 1 5株沙门氏菌标准菌株、2 7株沙门氏菌现场分离菌株和其他 1 0株非沙门氏菌菌株进行聚合酶链反应 (PCR)扩增 ,结果沙门氏菌均出现 495 bp特异性 DNA扩增条带 ,所有对照均未出现特异条带 ,提示这对引物具有很强的沙门氏菌属特异性。PCR敏感性试验显示 ,该体系能检出 1 4pg以上的沙门氏菌 DNA。通过对 5种不同的 DNA模板提取方法的比较 ,选择操作简便、快速、成本低廉的热裂解法。采用该方法 ,对生鲜奶样进行检测 ,经与国家标准卫生检验方法相比较 ,两者符合率达 1 0 0 %。

产气荚膜梭菌肠毒素的分子生物学研究进展

产气荚膜梭菌(Clostridum perfringens)是一类G+产芽胞的厌氧梭菌,可以引起人食物中毒和家畜气肿疽,其致病性很大程度取决于产生不同的外毒素.目前至少已鉴定出20余种不同的产气荚膜梭菌的毒素.根据产气荚膜梭菌的4种主要毒素(α,β,ε,т),可以将产气荚膜梭菌分为A～E5个型.